收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

牛轮状病毒病原流行病学调查、基因重配毒株的构建及二价减毒株的免疫原性评价

常继涛  
【摘要】: A群轮状病毒(Rotavirus, RV)是各种幼龄动物非细菌性腹泻的主要病原之一。牛轮状病毒(Bovine Rotavirus, BRV)属于呼肠孤病毒科(Reoviridae),轮状病毒属(Rotavirus)。成熟病毒粒子包含11节段双股RNA基因组,可编码6种结构蛋白和5种非结构蛋白。牛轮状病毒感染多发生在1月龄以内的犊牛,引起腹泻疾病的严重程度差别很大,包括无症状感染、温和的自限性腹泻以及伴有严重脱水和电解质失衡的重度腹泻。 为了解牛轮状病毒在我国的流行情况以及流行的主要血清型,本研究从内蒙古、黑龙江、新疆、北京、以及安徽等地收集115份牛腹泻粪便样品,应用RNA PAGE电泳和RT-PCR方法对所收集的粪便样品进行牛轮状病毒感染的病原流行病学检测。共检测出12份轮状病毒阳性样品,平均阳性率为10.4%(12/115),不同地区轮状病毒的阳性率差异很大(0~100%)。阳性样品经RT-PCR分型鉴定,新疆的1份和内蒙古的4份样品属于G10型,新疆另一牛场的2份和黑龙江的2份样品属于G6型。对所有阳性样品进行病毒分离,我们获得1株能在MA104细胞上稳定传代的病毒,经鉴定该分离株属于G10P[11]型轮状病毒,命名为HM26。G10型牛轮状病毒的分离在国内尚属首次。对该分离株进行序列分析发现,其VP4、VP7基因节段与VP6、NSP1及NSP4基因节段来源于牛轮状病毒的不同毒株,说明该分离毒株是同种属轮状病毒不同毒株之间的基因重配株。在进行轮状病毒分离的过程中,我们也分离出2株牛呼肠孤病毒和2株牛肠道病毒,这些病毒在牛腹泻疾病的发生和发展中的作用有待于进一步的研究。 在我国乃至世界范围内,牛轮状病毒均是引起犊牛腹泻的主要致病因素,并且G6和G10型轮状病毒是牛轮状病毒流行的主要血清型。另外,应用基因重配方法构建轮状病毒多价重配减毒疫苗已经在人轮状病毒疫苗的研究方面取得成功。所以,本研究借鉴人轮状病毒的研究平台,构建能够涵盖牛轮状病毒主要血清型G6和G10的二价减毒疫苗。以羊轮状病毒LLR-85毒株和牛轮状病毒NCDV毒株为亲本病毒,构建了一株以LLR-85为基因背景重配了NCDV株VP7基因的重配毒株R191。经RNA PAGE电泳和RT-PCR序列分析两种方法的鉴定,证明R191的基因组组成为VP7基因来源于NCDV株,而其余的10个基因节段均来源于LLR-85毒株。用此重配毒株与亲本毒株LLR-85联合应用即构成能够涵盖牛轮状病毒主要血清型G6和G10的二价减毒疫苗。同时,对该疫苗毒株在新生犊牛体内进行免疫原性和病毒释放的评价。17头轮状病毒抗体阴性的不吃初乳新生犊牛,被分为4组,在出生后24h之内口服接种疫苗毒株和安慰剂。第一组2头犊牛口服接种R191,第二组2头犊牛口服接种LLR-85,第三组7头犊牛口服接种R191和LLR-85,第四组6头犊牛口服接种安慰剂。采集接种后(Post Inoculation Days, PID)0, 10, 21, 28天的所有接种犊牛的血清,用以分析犊牛在免疫接种疫苗毒株后血清中轮状病毒特异性的IgG和IgA抗体的反应情况。结果显示,免疫组所有犊牛在免疫后10天血清中抗轮状病毒IgG和IgA抗体均转为阳性,在免疫后21天血清中抗轮状病毒IgG和IgA抗体均达到最高滴度,分别为1:800~1:6400和1:800~1:3200。对免疫组所有犊牛在免疫后21天同时也进行了针对G6和G10型的型特异性中和抗体的定量检测,结果显示,每头接种犊牛均产生了不同水平的中和抗体,滴度为1:16~1:256不等。收集免疫犊牛接种后7天内的粪便样品,进行接种轮状病毒的检测。结果显示,在77份粪便样品中仅有2份样品检测为轮状病毒LLR-85阳性,排毒率仅为2.6%。良好的免疫原性和较低的病毒释放率显示,上述毒株可作为预防牛轮状病毒感染的疫苗候选毒株。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 徐春厚;程葛;姜野;王绍辉;;鸡痘病毒的分离鉴定[J];黑龙江畜牧兽医;1996年04期
2 于素芳;丁延芹;姚良同;岳宝强;杜秉海;;一株棉花根际铁载体产生菌E19的分离鉴定[J];生物技术;2007年06期
3 谈志祥;刘道新;鲁杏华;何世成;范仲鑫;郑姣妹;邱立新;;湖南省猪链球菌2型病流行情况调查[J];养猪;2008年04期
4 程龙飞,柯美峰,郑腾,黄瑜,李文杨,施少华;猪源新城疫病毒的分离鉴定[J];中国兽医科技;2004年12期
5 晋爱兰;猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定[J];山东畜牧兽医;2005年01期
6 喻华英;胡文兵;贾桂珍;蒋涛;;犊牛腹泻病中沙门氏菌的分离与鉴定[J];塔里木大学学报;2006年01期
7 光海红;赵玉军;;鹿巴氏杆菌病的诊断[J];中国畜牧兽医;2006年08期
8 马永兴;韩庆安;刘乃强;张绍军;郑百芹;张子佳;徐贺静;张英海;;仔猪水肿病病原菌分离鉴定及防治[J];动物保健;2006年09期
9 陆奇能;朱宏杰;洪健;金伟;张凡;鲁兴萌;;一株传染性软化病病毒的分离和鉴定[J];病毒学报;2007年02期
10 路国兵;王更先;韩景瑞;牟志美;;白僵菌菌株的分离鉴定及生物学特性研究[J];中国蚕业;2007年02期
11 茹仙古丽·木明;苏皮亚;肖开提;;羔羊大肠杆菌病的诊断报告[J];新疆畜牧业;2007年03期
12 刘君寒;王兆守;何健;王保战;李顺鹏;;一株氯氰菊酯降解菌的分离和鉴定[J];南京农业大学学报;2007年03期
13 张洪英;司微;高艳;刘立奎;崔尚金;王宇;;犬瘟热病毒强毒株的分离与鉴定[J];中国预防兽医学报;2007年08期
14 郭剑英;梁群超;李开江;赵洪杰;杨红;;雏鸡大肠杆菌的分离与鉴定[J];江西畜牧兽医杂志;2007年05期
15 廖永洪;艾地云;罗青平;王红琳;张蓉蓉;罗玲;邵华斌;杨峻;;鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验[J];湖北畜牧兽医;2007年10期
16 解英波;姚静;乌日罕;特木尔巴根;马利峰;于富丽;李平安;申之义;;内蒙地区牛乳中布鲁氏杆菌的分离鉴定[J];中国动物检疫;2008年02期
17 兰罗勋;陈红;;鸡大肠杆菌病病原的分离及药敏试验[J];湖北畜牧兽医;2008年06期
18 刘海军;李静远;胡仁建;于丽;余华;蔡家利;;一起鸭疫里默氏杆菌病的诊治[J];重庆工学院学报(自然科学版);2009年01期
19 陈炜;刘平;郭仕坤;刘静;李丽娟;;六安地区猪链球菌分离鉴定及药敏学试验[J];畜牧与饲料科学;2009年02期
20 苑学;邢欣;龙淼;逄晓阳;刘国文;孙国权;王哲;;牛瘤胃液中链球菌的分离与鉴定[J];中国畜牧兽医;2009年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王晓丽;夏花;朱宏建;高必达;;朝鲜蓟上一种萎蔫病的病原分离与鉴定[A];粮食安全与植保科技创新[C];2009年
2 廖成水;程相朝;吴庭才;张春杰;李银聚;郁川;王晓利;胡阿勇;;河南省鸡源沙门氏菌新近流行株的分离鉴定及其耐药性分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
3 黄瑜;程龙飞;李文杨;苏敬良;庄向生;;鸭疱疹病毒Ⅱ型(暂定名)的分离鉴定[A];第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2001年
4 岳华;汤承;刘群;罗薇;刘内生;杨小农;龙虎;;“鸭传染性肿头症”病毒的分离及部分特性研究[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2002年
5 付少才;陈万荣;周珍辉;周育森;;猫泛白细胞减少症病毒的分离与鉴定[A];全国兽医外科学第13次学术研讨会、小动物医学第1次学术研讨会暨奶牛疾病第3次学术讨论会论文集[C];2006年
6 雷爱莹;彭敏;曾地刚;李咏梅;;高效净水沼泽红假单胞菌的分离和鉴定[A];广西水产研究所论文集(2001—2005)[C];2006年
7 金曙光;霍鲜鲜;乌仁塔娜;;半干青贮中优良乳酸菌的分离鉴定[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集[C];2008年
8 吴忆春;魏建忠;王桂军;李郁;;超强毒鸡传染性法氏囊病病毒安徽株的分离鉴定[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集(下)[C];2005年
9 周珍辉;陈万荣;付少才;周育森;向双云;曹授俊;;猫泛白细胞减少症病毒的诊断[A];京津冀畜牧兽医科技创新交流会暨新思想、新观点、新方法论坛论文集[C];2008年
10 李文兵;胡昌江;黄勤挽;谢秀琼;;盐炙益智仁中5-羟甲基糠醛的分离鉴定[A];中华中医药学会中药炮制分会2009年学术研讨会论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 常继涛;牛轮状病毒病原流行病学调查、基因重配毒株的构建及二价减毒株的免疫原性评价[D];中国农业科学院;2009年
2 程霜;石榴皮萃取物抗氧化和降血脂作用与成分研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
3 吕本强;注射用双黄连粉针剂物质基础研究[D];第一军医大学;2007年
4 刘利;桑叶次生代谢产物研究[D];中国农业科学院;2005年
5 胡申才;具细胞毒活性海洋微生物的分离筛选及次级代谢物的研究[D];华中农业大学;2005年
6 王(韦华);猪源乙型脑炎病毒SXBJ07株全长基因组克隆分析及ELISA检测方法的建立[D];西北农林科技大学;2009年
7 惠明;枯草芽孢杆菌B53的分离鉴定及产聚γ-谷氨酸的研究[D];中国农业大学;2005年
8 易晓华;除虫菊内生真菌分离、鉴定及其代谢产物抑菌活性研究[D];西北农林科技大学;2008年
9 张明明;Ⅰ群禽腺病毒的分离鉴定和生物学特性研究及重组禽腺病毒的构建[D];扬州大学;2008年
10 马海宾;松材线虫纤维素酶系及其cDNA基因的克隆与RNA干扰研究[D];中国林业科学研究院;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 卢彦欣;狂犬病病毒街毒株BDRV的分离鉴定及全基因组序列测定[D];吉林大学;2007年
2 蔡秀磊;鸭疫里默氏杆菌耐药性与耐药基因研究[D];山东农业大学;2007年
3 白永平;绵羊肺炎支原体的分离鉴定与敏感药物试验的研究[D];四川农业大学;2007年
4 曹娟;生物表面活性剂产生菌的分离鉴定及其对环境污染物生物降解的促进作用[D];南京农业大学;2008年
5 郁宏伟;猪伪狂犬病毒的分离鉴定及检测方法的建立[D];河北农业大学;2005年
6 马清义;大熊猫消化道正常菌群的分离鉴定及药敏性研究[D];西北农林科技大学;2006年
7 杨胜祥;金叶子的化学成分研究[D];西北农林科技大学;2007年
8 董靖;无指盘臭蛙皮表金黄杆菌分离鉴定及其胞外蛋白酶研究[D];南京农业大学;2007年
9 严泽华;鸡传染性鼻炎三价灭活疫苗的研制[D];吉林大学;2007年
10 朱子洁;石家庄地区猪链球菌的分离鉴定及其快速检测方法的建立和应用[D];河北农业大学;2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 邵文杰;昆明植物所古植物化学研究获新进展[N];光明日报;2004年
2 李忠将刘雪梅;茅台集团建立我国第一个白酒微生物菌种资源库[N];经理日报;2008年
3 衡水市武邑县蔡徐农技信息中心 蔡占奎;冬季谨防鸭感冒[N];河北农民报;2008年
4 郑灵巧;我国流感病毒活动未见明显增强[N];健康报;2008年
5 河南农业大学 史莹华 博士;危机动物健康的致命“暗箭”[N];中国畜牧兽医报;2006年
6 甘肃农业大学 王锡祯 教授;猪呼吸道病综合征(PRDC)的流行动态及控制措施[N];中国畜牧兽医报;2006年
7 江苏农科院 邵国青 研究员 博士生导师;变异病原“重组武功”超强[N];中国畜牧兽医报;2007年
8 国家质检总局标准法规中心 苏志明;警惕黄曲霉毒素的危害[N];中国国门时报;2006年
9 满红;冬季防治鸭感冒5招[N];河北农民报;2007年
10 李昊;8基因均具有自主产权[N];甘肃经济日报;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978