收藏本站
收藏 | 论文排版

紫花苜蓿抗褐斑病基因的ISSR、SRAP以及AFLP分子标记研究

王瑜  
【摘要】: 苜蓿(Medicago sativa L.)是重要的蛋白饲料,被誉为“牧草之王”。由苜蓿假盘菌(Pseudopeziza medicaginis (Lib.) Sacc.)引起的褐斑病是苜蓿最常见和破坏性很大的病害之一。抗病新材料的选育和使用是防治苜蓿褐斑病最经济、有效的办法。本研究以五个品种苜蓿的抗、感株系,中抗×中抗组合,(抗×感)×感BC1群体为实验材料,利用BSA法结合ISSR、SRAP以及AFLP三种分子标记技术筛选与苜蓿抗褐斑病基因连锁的分子标记,旨在为苜蓿抗褐斑病种质材料的快速鉴定以及苜蓿抗褐斑病的分子标记辅助选择育种奠定基础,同时,也根据BC1群体抗、感单株的分离情况对苜蓿抗褐斑病遗传规律做探索性研究。本项研究取得的主要结果如下: 1、通过优化影响紫花苜蓿(Medicago sativa. L)ISSR-PCR的主要参数,建立适于紫花苜蓿的ISSR反应体系和扩增程序。在20μL体系中各反应物的最适含量为:15 ng模板DNA,0.2 mmol/L dNTP,0.4μmol/L ISSR引物,0.8 U Taq DNA聚合酶,2μL 10×PCR Buffer,1.5 mmol/L MgCl2,2.5%去离子甲酰胺。PCR扩增程序为:94℃预变性4 min,94℃变性30 s,62℃(62℃~58℃)退火45 s,72℃延伸1 min 45 s,共11个循环,每个循环退火温度降1℃; 94℃变性30 s,52℃(52℃~48℃)退火45 s,72℃延伸1 min 45 s,共24个循环;72℃延伸5 min,25℃保温。 2、用伊鲁瑰斯、萨兰斯、沙湾、沙河、泾阳五个品种苜蓿的抗、感株系分别建立各自的抗、感病DNA池,通过ISSR标记研究,得到与抗褐斑病基因相关的ISSR标记4个,分别为ISSR6-S640、ISSR22-S450、ISSR22-S660与ISSR834-R450。 3、通过接种鉴定,在以上五个品种苜蓿的抗、感株系中,筛选出高抗单株6株,高感单株6株,中抗单株4株,通过相互间杂交,配置高抗×高抗组合6个,高感×高感组合6个,高抗×高感组合21个,中抗×中抗组合4个,对各组合后代进行接种鉴定,筛选出优良高抗×高抗组合2个,高感×高感组合2个,高抗×高感组合1个,中抗×中抗组合1个,将其作为进一步试验的研究材料或者作为苜蓿抗褐斑病育种的原始材料。 4、以中抗×中抗群体为试验材料,通过SRAP标记研究,获得与抗褐斑病基因连锁的SRAP标记1个,命名为M3E3-R169,该标记与抗褐斑病基因间遗传距离为11.75 cM。经克隆测序,发现该标记片段中的6~157号碱基序列与紫花苜蓿谷氨酰胺合成酶基因的3855~4006号碱基具高度一致性,同一性高达97%,横跨该基因11号表达子与间隔子序列。 5、对两个BC1群体进行接种鉴定,其抗、感单株分离比均符合为3:1的分离比例,结合高抗×高感F1群体多数为抗病单株的表现,初步推断苜蓿褐斑病为单显性基因控制,可能存在多个微效基因共同作用。 6、对BC1群体进行AFLP标记分析,得到与褐斑病抗或感病基因连锁的分子标记三个,分别为M1P1-R206、M2P8-R185和M5P6-S264,其在群体抗、感单株中分子标记检测的正确率分别为91.2 %、89.2 %与95.7%,与抗病基因的遗传距离分别为8.95 cM、10.95 cM与4.35 cM。经对三个标记的克隆测序,发现三个片段均与截形苜蓿的一些克隆片段具有很高的同源性。 本研究鉴定出的四个苜蓿抗褐斑病分子标记,将为苜蓿抗褐斑病种质资源的鉴定以及抗褐斑病育种提供分子标记辅助选择的依据,会提高选择效率,缩短育种年限。同时,本研究中所建立的BC1群体还可用于紫花苜蓿遗传图谱的构建。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 蔡丹凤;陈美元;蔡志欣;李洪荣;郭仲杰;廖剑华;王泽生;;鸡腿蘑栽培菌株的SRAP分析[J];食用菌学报;2010年03期
2 程远辉;周昌华;马爱芬;石小刚;张兴翠;;重庆何首乌遗传多样性的SRAP研究[J];中国中药杂志;2007年08期
3 赵炜;刘冠明;王晓明;王汉宁;;应用SRAP标记分析甜玉米自交系的遗传差异[J];玉米科学;2007年S1期
4 刘雅辉;闫红飞;杨文香;李星;李亚宁;孟庆芳;张立荣;刘大群;张汀;;23个小麦抗叶锈病近等基因系SRAP多态性[J];中国农业科学;2008年05期
5 徐进;张西西;董爱香;王涛;赵梁军;;部分矮牵牛品种亲缘关系的SRAP分析[J];园艺学报;2008年12期
6 杨迎花;李先信;曾柏全;邓子牛;;新型分子标记SRAP的原理及其研究进展[J];湖南农业科学;2009年05期
7 周平;许奇志;熊月明;金光;郭林榕;陈由强;;余甘子SRAP反应体系的优化[J];中国农学通报;2010年16期
8 张婧源;彭燕;罗燕;马啸;;不同产地白三叶种质遗传多样性的SRAP分析[J];草业学报;2010年05期
9 罗锐;杨会肖;黄少伟;赵奋成;刘天颐;刘纯鑫;;杂种松SRAP-PCR反应体系的优化[J];广东林业科技;2010年05期
10 张旭彤;张朝红;肖宇;王跃进;;无核葡萄SRAP-PCR反应体系的建立和优化[J];中国农学通报;2011年16期
11 李严,张春庆;西瓜杂交种遗传多态性的SRAP标记分析[J];园艺学报;2005年04期
12 赵洋;杨阳;曾贞;黄静;;SRAP标记在茶树育种上的应用前景[J];茶叶通讯;2007年02期
13 李武;林忠旭;张献龙;;亚洲棉种内群体异常偏分离的分子标记检测(英文)[J];遗传学报;2007年07期
14 李双双;赵瑞华;闫桂琴;郜刚;;马铃薯基因组SRAP反应体系的建立和优化[J];山西师范大学学报(自然科学版);2007年04期
15 郭凌飞;邹明宏;杜丽清;曾辉;陆超忠;;均匀设计优化澳洲坚果SRAP反应体系[J];果树学报;2008年02期
16 邓波涛;赵斐;王学英;;胡萝卜SRAP反应体系的优化[J];现代农业科技;2009年13期
17 王长林;郭巧生;武玉妹;;明党参遗传多样性的SRAP分子标记[J];中国中药杂志;2009年24期
18 李向;轩淑欣;王彦华;赵建军;申书兴;;不结球白菜SRAP反应体系的建立与优化[J];华北农学报;2010年04期
19 艾鹏飞;武玉芬;魏景芳;;小麦SRAP-PCR体系的正交设计优化(摘要)(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2011年03期
20 王守现;刘宇;耿小丽;孟莉莉;谢宝贵;;应用SRAP标记对六个鸡腿菇菌株的多态性分析[J];江西农业大学学报;2006年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 史倩倩;王雁;周琳;;基于毛细管电泳技术牡丹的SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
2 祁建民;;Genetic diversity and phylogenetic relationship of kenaf germplasm as revealed by SRAP analysis[A];北方遗传资源的保护与利用研讨会论文汇编[C];2010年
3 张妤艳;俞明亮;马瑞娟;蔡志翔;沈志军;许建兰;;与桃树性高/矮性状相关的SRAP标记[A];中国园艺学会桃分会第三届学术研讨会论文集[C];2011年
4 张凤兰;郝丽珍;杨忠仁;;沙芥SRAP体系构建与优化[A];庆祝中国园艺学会创建80周年暨第11次全国会员代表大会论文摘要集[C];2009年
5 潘俊松;王刚;李效尊;吴爱忠;蔡润;;黄瓜SRAP遗传连锁图的构建及侧枝性状的基因定位[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
6 乐文全;魏建梅;韩继成;张海娥;郝宝锋;冉辛拓;;梨红色果皮性状基因的SRAP标记[A];梨科研与生产进展(五)[C];2011年
7 乔燕春;李光光;黄红弟;李兆龙;张华;郑岩松;刘自珠;;菜薹种质资源SRAP分析及表型多样性研究[A];中国园艺学会2011年学术年会论文摘要集[C];2011年
8 刘振;赵洋;杨培迪;成杨;杨阳;;茶树SRAP反应体系优化及引物筛选[A];科技创新 转型升级 做大做强湖南特色茶叶——湖南省茶叶学会2011年学术年会论文集[C];2011年
9 顾慧;付三雄;戚存扣;张洁夫;浦惠明;陈松;;SRAP标记预测甘蓝型油菜常规品种间杂种优势[A];现代分子植物育种与粮食安全研讨会论文集[C];2011年
10 王明霞;严从生;江海坤;董言香;方凌;张其安;;安徽乌塌菜SRAP反应体系的建立与优化[A];庆祝中国园艺学会创建80周年暨第11次全国会员代表大会论文摘要集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 杨旻;基于ISSR和SRAP的半夏种质资源遗传多样性研究[D];湖北中医药大学;2010年
2 王玉书;羽衣甘蓝小孢子培养及红叶性状的SRAP标记[D];沈阳农业大学;2012年
3 林忠旭;棉花分子标记遗传连锁图构建和产量、纤维品质相关性状定位[D];华中农业大学;2005年
4 关潇;野生紫花苜蓿种质资源遗传多样性研究[D];北京林业大学;2009年
5 张俊卫;基于ISSR、SRAP和SSR标记的梅种质资源遗传多样性研究[D];华中农业大学;2010年
6 李冬梅;部分亚麻属植物遗传多样性及分子进化研究[D];东北农业大学;2009年
7 刘大军;陆地棉SRAP图谱构建与种子物理、营养品质性状QTL定位[D];西南大学;2010年
8 沈程文;广东茶树种质遗传多样性的形态和分子评价及其亲缘关系研究[D];湖南农业大学;2007年
9 白瑞霞;枣种质资源遗传多样性的分子评价及其核心种质的构建[D];河北农业大学;2008年
10 张凤兰;沙芥属植物遗传多样性及其亲缘关系研究[D];内蒙古农业大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王茂芊;利用SRAP标记对我国三大产区部分甜菜骨干材料进行遗传多样性分析[D];内蒙古农业大学;2010年
2 王晓菡;中国芍药品种遗传多样性SRAP分析和核心种质的初步构建[D];山东农业大学;2010年
3 刘麒;SRAP在猴头菌属中的菌种鉴定及遗传关系分析[D];吉林农业大学;2011年
4 赖鋆英;大花蕙兰植物学形态特征及遗传多样性的SRAP分析[D];福建农林大学;2010年
5 罗燕;菊苣种质形态变异及SRAP分子遗传多样性研究[D];四川农业大学;2010年
6 张慧;大麻哈鱼SRAP体系建立及其遗传多样性研究[D];东北林业大学;2011年
7 邸青;大白菜抗缘枯病及霜霉病基因的SRAP标记筛选[D];中国农业科学院;2010年
8 张辉;甜菜航天诱变SP3代育种材料几种同工酶及SRAP多态性分析[D];中国农业科学院;2011年
9 李颖;RAPD及SRAP技术在长白山区部分野生菊科植物系统分类学中的应用研究[D];延边大学;2010年
10 吴茜;中国香菇自然种质遗传多样性SRAP和IGS2分析[D];华中农业大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978