犬瘟热病毒H基因克隆分析及DNA疫苗研究

【摘要】： 犬瘟热(Canine distemper)是由犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)引起的急性、高度接触性传染病。本病在世界范围内流行,在我国也经常发生。它是当前危害养犬业发展最严重的疫病之一。经常引起犬、水貂、狐等动物发病,病死率在30%-80%,雪貂病死率为100%,甚至在人变形性骨炎患者体内发现了其基因。近年来发展起来的分子生物学技术将CDV研究向前推进了一步,也促进了对CDV深入研究的必要。 为了对CDV遗传变异和进化关系进行分析,针对来自临床宠物犬口鼻棉拭子样品,以RT-PCR方法进行诊断并随机采取其中7份样品扩增其血凝素编码基因(H)测序进行分析,并建立系统发生树。根据序列相似性分析得出,基因相似性与其地理位置分布密切相关,蛋白预测分析,病料中潜在N连接糖基化位点与疫苗株存在差异,而病料中脯氨酸残基和半胱氨酸残基相对保守。本次检测到的病毒均属于野毒的亚洲一型,蛋白抗原性变化取决于N连接糖基化位点的变化。 为了探索犬瘟热病毒DNA疫苗免疫效果,本研究扩增了CDV H基因以及N蛋白部分编码序列,并构建pVAX真核重组质粒,免疫BALB/c纯系小鼠股二头肌进行血清学分析,建立间接ELISA试验检测小鼠血清中抗体变化。为了优化免疫结果,设立注射剂量梯度,pVAX-CDV-H, pVAX-CDV-N,pVAX-CDV-H-N不同外源片段对照。结果显示,本次试验中免疫剂量在10~30μg时,多片段联合表达载体的免疫效果最佳。