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胰岛素时间分辨荧免分析试剂盒的研制

姚焱  
【摘要】: 本工作采用双抗夹心一步法测定血清中胰岛素(Insulin)的含量。选择两株针对Insulin不同位点的单抗,一株包被于微孔板上,另一株用DTTA-Eu~(3+)标记作为示踪剂。反应过程中,两株抗体同时与血清中Insulin反应,形成免疫复合物。反应结束后,加入增强液将固相上Eu~(3+)解离到液相中,与增强液中配基形成高效荧光鳌合物。荧光强度与Insulin浓度呈正比。 本工作通过与DSL Insulin ELISA试剂盒同时测定64例样品,进行相关性比较,从3对抗体中选择了与它相关性最好的1对抗体:OXI-005和HUI-018,建立InsulinTRFIA。 本工作对抗体标记条件、包被条件、分析缓冲液的配制、加样量、反应时间等多个环节进行了优化实验。通过上述实验,研制完成了一个操作简便、反应快速、灵敏度高、符合临床要求的Insulin TRFIA试剂盒。 本方法的工作范围为5-160mIU/L;分析灵敏度0.3mIU/L;批间、批内变异系数均5%。回收率为97.7-102.9%:将一份高值血清用标准品稀释液倍比稀释后,测定值与预期值呈线性相关,r=0.9996;测定60例正常人血清样品,实测范围为2.79-22.03mIU/L,均值8.25±5.32mIU/L;该方法与DSL Insulin ELISA试剂盒同时测定20例样品,相关性方程和相关系数分别为:Y=0.81X-0.47,r=0.98;与原子高科股份有限公司提供的ELISA试剂盒同时测定60例样品,相关性方程和相关系数分别为:Y=0.59X-0.47,r=0.94。


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