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大黄炮制前后物质基础变化规律研究

李丽  
【摘要】:中药材必须经过炮制加工成为饮片后才能应用于临床,这是中医临床用药的一个特点。大黄是我国传统常用中药,其药用历史悠久,而且是通过多种炮制改变药性使之广泛应用于临床各科的典型范例。目前临床常用的大黄饮片主要有生大黄、酒大黄、醋大黄、熟大黄(酒炖)和大黄炭。本论文作为国家自然基金重点项目“炮制改变大黄药性的科学内涵变化规律研究”的主要研究内容,将紧紧围绕炮制改变大黄药性科学内涵变化规律这一关键问题,以大黄炮制前后的物质基础变化为切入点,通过系统的化学成分研究,结合主要化学成分炮制前后的定性、定量分析,探明大黄不同饮片的化学成分组成及量比关系,并以组分填充模拟炮制方法来揭示大黄饮片炮制前后物质基础的变化规律,为进一步探讨炮制与大黄药性改变的相关性提供科学依据。 本论文共分六章。 第一章文献综述 查阅了近10年来有关大黄的研究资料,从药材基源、化学成分、质量控制、古今炮制方法以及药理作用等方面对大黄的研究现状和存在问题进行了分析和整理,为本论文研究方案的制定和顺利实施提供了有益的借鉴。 第二章化学成分研究 以掌叶大黄Rheum palmatum L为研究对象,采用系统的化学提取分离方法,经现代光谱和波谱分析鉴定,确定了34个化合物的结构。分别为:反式-3,3',5'-三羟基-4-甲氧基二苯乙烯-5'-O-β-D-葡萄糖苷[trans-3,3',5'-trihydroxy-4-methoxystilbene-5'-O-P-D-glucopyranoside,DH-1],反式-3,3',5'-三羟基-4-甲氧基二苯乙烯[trans-3,3',5'-trihydroxy -4-methoxystilbene, DH-2],设食子酸乙酯[ethylgallate,DH-3],4(?)-羟基苯基-2-丁酮[4-(4'-hydroxyphenyl)-2-butanone, DH-4],大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷[physcion-8-O-β-D-glucopyranoside, DH-5],大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷[chrysophanol-8-O-β-D-glucopyranoside, DH-6],没食子酸[gallic acid, DH-7],儿茶素[catechin, DH-8],芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷[aloe-emodin-8-O-β-D-glucopyranoside,DH-9],大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷[rhein-8-O-β-D-glucopyranoside,DH-10],番泻苷B[sennoside B,DH-11],4'-羟基苯基-2-丁酮-4'-O-β-D-(6"-O-桂皮酰基)-葡萄糖苷[4-(4'-hydroxyphenyl)-2-butanone-4'-O-β-D-(6"-O-cinnamoyl)-glucopyranoside, DH-12],番泻苷A[sennoside A,DH-13],反式-3,5,4'-三羟基二苯乙烯-4'-O-β-D一(6"-O-没食子酰基)-葡萄糖苷[trans-3,5,4'-trihydroxystilbene-4'-O-β-D-(6"-O-galloyl)-glucopyranoside,DH-14],4'-羟基苯基-2-丁酮-4'-O-β-D-(6"-O-(4"'-羟基)-桂皮酰基)-葡萄糖苷[4-(4'-hydroxyphenyl)-2-butanone-4'-O-β-D-(6"-O-p-coumaroyl)-glucopyranoside,DH-15],大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷[emodin-8-O-β-D-glucophyranoside,DH-16],4'-羟基苯基-2-丁酮-4'-O-β-D-(2"-O-没食子酰基-6"-O-(4"'-羟基)-桂皮酰基)-葡萄糖苷[4-(4'-hydroxyphenyl)-2-butanone-4'-O-β-D-(2"-O-galloyl-6"-O-p-coumaroyl)-glucopyranoside, DH-17],胡萝卜苷[daucosterol,DH-18],p-谷甾醇[β-sitosterol,DH-19],反式-3,5,4'-三羟基二苯乙烯-4'-O-β-D-葡萄糖苷[trans-3,5,4'-trihydroxystilbene-4'-O-β-D-glucopyranoside, DH-20],芦荟大黄素-3-CH2-O-β-D-葡萄糖苷[aloe-emodin-3-CH2-O-β-D-glucophyranoside,DH-21],邻二羟基苯[o-dihydroxy-benzene,DH-22],4'-羟基苯基-2-丁酮-4'-O-β-D-(6"-O-没食子酰基)-葡萄糖苷[4-(4'-hydroxyphenyl)-2-butanone-4'-O-β-D-(6"-O-galloyl)-glucopy-ranoside,DH-23],大黄素-1-O-β-D-葡萄糖苷[emodin-1-O-β-D-glucophyranoside, DH-24],大黄酚[chrysophanol,DH-25],大黄素甲醚[physcion,DH-26],大黄酸[rhein,DH-27],大黄素[emodin,DH-28],1-甲基-2-羧基-8-羟基-9,10-蒽醌-3-O-β-D-(6'-O-肉桂酰基)葡萄糖苷[1-methyl-2-carboxyl-8-hydroxyl一9,10-anthraquinone-3-O-β-D-(6'-O-cinnamoyl)glucopyranoside,DH-29],2,5-二甲基-6,8-二羟基色原酮[2,5-dimethyl-6,8-dihydroxy-chromone,DH-30],大黄酸-8-O-β-D-(6'-O-丙二酸甲酯酰基)吡喃葡萄糖苷[rhein-8-O-β-D-(6'-O-methoxylmalonyl)-glucopyranoside,DH-31],芦荟大黄素[aloe emodin,DH-32],ω-羟基大黄素[citreorosein,DH-33],1-甲基-2,8-二羟基-3-羧基-9,10-蒽醌[1-methyl-2,8 -dihydroxy-3-carboxy -9,10-anthraquinone DH-34]。经国内外数据库检索,确定化合物DH-29、DH-30、DH-31和DH-34为4个新化合物。此研究结果不仅丰富了大黄的化学成分研究内容,而且也为大黄不同饮片的物质基础研究提供了必要的前提条件。 第三章大黄炮制前后物质基础的比较研究 首次建立了以两种波长进行生大黄、酒大黄、醋大黄、熟大黄和大黄炭等5种饮片HPLC指纹图谱测定的方法,通过不同饮片各10批次的分析,形成了大黄5种饮片的对照指纹图谱,并以化学成分研究中分离得到的化合物为对照,归属了生大黄、酒大黄、醋大黄指纹图谱中的24个色谱峰;熟大黄图谱归属了19个色谱峰;大黄炭图谱归属了22个色谱峰。明确了大黄不同饮片的化学成分组成,为大黄不同饮片的定性鉴别提供了更为科学、全面的新方法。 首次以非水解的方式,建立了大黄5种饮片中4个原生蒽醌苷及5个原生蒽醌苷元的含量测定方法,揭示了炮制前后蒽醌类成分的变化规律。同时还首次建立了大黄饮片中二苯乙烯苷、苯丁酮及其苷、鞣质类等12种主要化学成分的HPLC含量测定方法,初步揭示了大黄饮片炮制前后不同类型化学成分的变化规律,为完善大黄饮片质量评价标准提供了科学依据。 第四章大黄饮片模拟炮制研究 论文首次建立了以“空白饮片”为载体的组分填充模拟炮制方法,与目前普遍采用的单成分加热模拟炮制方法不同,本论文所采用的模拟炮制方法是以组分为研究对象,以“空白饮片”为载体,按照饮片原本的炮制方法来进行模拟饮片的炮制,其模拟炮制条件和炮制前后成分的变化更贴近于饮片的真实炮制变化情况。本论文成功地将该方法应用于大黄饮片炮制前后化学成分变化规律的研究,通过三个组分各5种模拟饮片的比较研究,初步揭示了大黄饮片炮制前后主要化学成分的变化规律及可能的变化途径。 第五章药理实验结果 本章主要介绍课题组在大黄饮片药理实验方面取得的结果。根据大黄饮片的功能主治,课题组以大黄“苦寒泻下”功能药性变化为主线,对生、酒、熟、炭等4种大黄饮片进行了泻下作用及其机制的比较研究,结果显示生大黄和酒大黄均具有明显的泻下作用,且生大黄作用强于酒大黄,熟大黄和大黄炭基本无泻下作用。这不仅与大黄饮片的传统功效特点相符合,而且结合物质基础研究所得到的结论,证实了基于传统药性理论的苦寒药性与基于现代药效学研究的泻下作用强度均按同样的顺序逐步降低,大黄“苦寒泻下”药效物质基础——蒽醌苷类成分含量变化与饮片生物活性及药性改变的相关性。此外,还证实了结合鞣质及可水解鞣质并非一直以来认为的具有收敛作用,而具有明显的促进胃肠运动及泻下作用,而真正产生收敛作用的可能是缩合鞣质和可水解鞣质经胃肠道消化分解产生的没食子酸。这一结果为大黄作为泻下药物长期应用会导致便秘提供了合理的解释,对于临床合理应用大黄饮片具有重要的参考价值。 第六章结论 本论文在认真分析和总结大黄近年来研究成果的基础上,紧紧围绕炮制改变大黄药性科学内涵变化规律这一关键问题,以大黄炮制前后的物质基础变化为切入点,以大黄“苦寒沉降”功效为指征,从系统的化学成分研究入手,通过HPLC指纹图谱定性和主要化学成分定量分析,明确了大黄5种饮片的化学成分组成及其量比关系,并将首创的“空白饮片”为载体的组分填充模拟炮制方法运用于大黄的研究,揭示了大黄饮片炮制前后化学成分的变化规律及其可能的变化途径。结合课题组对大黄各炮制品泻下作用及其机制探讨的结果,证实基于传统药性理论的苦寒药性是按照生大黄→酒大黄→熟大黄→大黄炭的顺序逐步减弱,而基于现代药效学研究的泻下作用强度也按同样的顺序逐步降低。 论文紧密结合中药炮制学科的研究重点和发展趋势,以大黄为范例,探索建立了“以科学内涵变化规律为纽带分析炮制与药性改变相关性”的炮制原理研究模式;建立了基于炮制原理的“多有效成分定量,指纹图谱定性”的质量评价模式;建立了“以模拟炮制方法揭示中药炮制前后物质基础变化规律”的炮制原理研究模式,在丰富中药饮片炮制原理研究方法的同时,为同类中药的炮制研究提供了借鉴,拓宽了炮制学科的研究思路,提升了炮制学科的科研水平,具有较高的理论意义和实用价值。


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