开心解郁汤治疗血管性抑郁症机理研究

【摘要】：作为抑郁症的一种特殊亚型,血管性抑郁症是危害严重的晚发性血管障碍性抑郁症,随着人口老龄化和心脑血管疾病发病率增加,血管性抑郁症的发病率增加。血管性疾病与抑郁症互相影响,明显增加了患者的致残率和死亡率,造成患者及其家庭、社会的严重负担,且本病患者对目前抗抑郁剂治疗反应性低、耐受性差,易出现毒副作用。因此,血管性抑郁症已成为关乎人口健康和社会公共卫生的重大问题,在国外已成为研究的热点,在国内还较少涉足这方面的研究。 中医药治疗具有整体调节的特点,动物实验研究和临床报道均表明中药治疗本病的有效性。与抗抑郁西药相比,它可以避免长期用药的毒副作用,然而其作用机理仍不明确。因此我们利用血管性抑郁症大鼠模型对导师黄世敬研究员治疗本病的经验方--开心解郁汤的可能作用机制展开实验研究。研究目的： 研究血管性抑郁症模型大鼠行为学、脑血流、海马形态学和海马GFAP\BDNF的表达变化及开心解郁汤的干预作用,探讨血管性抑郁症的发病机理及开心解郁汤的抗抑郁作用机制。 研究方法： 1.动物分组及模型复制：100只健康成年雄性Wistar-Kyoto (WKY)大鼠,体重240-260g,随机分为假手术组(sham)、血管性抑郁组(model,模型组)、血管性抑郁+高剂量开心解郁汤组(high-dosage,高剂量中药组)、血管性抑郁+低剂量开心解郁汤组(medium-dosage,低剂量中药组)、血管性抑郁+盐酸氟西汀组(fluoxetine,氟西汀组)。采用双侧颈总动脉永久性阻断法(LBCCA)结合慢性不可预见性温和应激(CUMS)联合孤养的方法建立稳定的大鼠血管性抑郁模型； 2.给药方法：灌胃给药：高剂量中药组给予开心解郁汤15.4g生药/kg·d,低剂量组给予开心解郁汤7.7g生药/kg·d,氟西汀组给予盐酸氟西汀2.4mg/kg·d,假手术组和模型组给同体积蒸馏水,据体重变化每周调整灌胃量,连续灌胃给药21天； 3.观察指标 3.1观察行为学：糖水偏嗜实验及旷场实验,均于实验前、后测定； 3.2测定脑血流(CBF)； 3.3HE染色观察海马形态学变化； 3.4免疫组化和RT-PCR技术测定大鼠脑海马GFAP\BDNF蛋白含量及其mRNA水平的变化。 研究结果： 1.行为学：与假手术组比较,模型组大鼠糖水消耗百分率、旷场试验中穿越格子数及站立次数明显降低(P0.01,P0.05)；与模型组相比,高剂量中药组和低剂量中药组均能显著增加抑郁大鼠糖水消耗百分率和旷场试验中站立次数(P0.01,P0.05),高剂量中药组还能显著增加抑郁大鼠旷场试验中穿越格子数(P0.01)；糖水消耗百分率高剂量中药组显著大于低剂量中药组(P0.01)。 2.脑血流：与假手术组比较,模型组大鼠额叶及顶叶脑血流值均明显降低(P0.01,P0.05)；与模型组相比,治疗各组均能显著增加额叶及顶叶脑血流值(P0.01,P0.05)；高剂量中药组显著高于低剂量中药组(P0.01),与氟西汀组相当。 3.海马形态学：光镜下大鼠海马CA3区可见,假手术组形态正常,表现为染色均匀,结构致密,神经元排列整齐,层次清晰,细胞质淡红色,胞核明显,核仁清楚。模型组组织结构紊乱、间质水肿、染色淡；可见神经元丢失、大小不均,可见核碎裂等改变；部分血管扩张,出现血管周围水肿。治疗各组海马也可见病理性改变,但组织结构紊乱及间质水肿减轻；坏死细胞明显减少,细胞变性程度减轻。 4.海马GFAP表达：假手术组大鼠海马各区GFAP广泛表达,阳性细胞呈星形,深染。模型组染色阳性细胞面积和强度均显著减小,细胞数目减少。治疗各组阳性细胞面积、强度和数目均有所恢复。与假手术组比较,模型组大鼠平均面密度和平均光密度均明显降低(P0.01)；与模型组相比,高剂量中药组能够显著增加平均面密度和平均光密度(P0.01),与氟西汀组相当,低剂量中药组还能够显著增加平均面密度(P0.05)；此外,高剂量中药组平均光密度显著大于低剂量中药组(P,0.01)。 与假手术组相比,模型组大鼠GFAP mRNA的相对表达水平显著降低(P，0.01)；与模型组相比,高剂量中药组和低剂量中药组大鼠GFAP mRNA的相对表达水平显著增加(P0.01,P0.05)；此外,高剂量中药组大鼠GFAP mRNA的相对表达水平显著大于低剂量中药组和氟西汀组(P0.05)。 5.海马BDNF表达：假手术组大鼠海马各区BDNF广泛表达,阳性细胞胞浆呈棕黄色。模型组染色阳性细胞面积和强度均显著减小,细胞数目减少。治疗各组阳性细胞面积、强度和数目均有所恢复。与假手术组比较,模型组大鼠平均面密度和平均光密度均明显降低(P0.01)；与模型组相比,高剂量中药组能够显著增加平均面密度和平均光密度(P0.01),与氟西汀组相当；此外,高剂量中药组平均面密度和平均光密度显著大于低剂量中药组(P0.01,P0.05)。 与假手术组相比,模型组大鼠BDNF mRNA的相对表达水平显著降低(P0.01)；与模型组相比,高剂量中药组和低剂量中药组大鼠BDNF mRNA的相对表达水平显著增加(P0.01,P0.05)；此外,高剂量中药组大鼠BDNF mRNA的相对表达水平显著大于低剂量中药组(P0.01),与氟西汀组相当。 研究结论： 1. LBCCA结合CUMS联合孤养的复合造模方法一方面可引起大鼠抑郁样行为学改变,表现为大鼠兴趣感下降、自发活动和探究性活动减少等；另一方面可以降低脑血流供应,诱导形成大鼠血管性抑郁症模型； 2.开心解郁汤可以明显改善大鼠的抑郁状态； 3.开心解郁汤可以增加脑血流供应； 4.开心解郁汤可以减轻血管性抑郁症模型大鼠海马病理损伤； 5.开心解郁汤可以促进海马GFAP及BDNF表达。