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赤芍801调节血管炎症反应和血小板活化的基础与临床研究

蒋跃绒  
【摘要】:研究背景 炎症反应与血小板活化的相互介导及促进,是诱发动脉粥样硬化不稳定斑块破裂、导致急性冠状动脉综合征(ACS)等急性心肌缺血事件的重要病理基础。调节血管炎症反应和血小板活化是心血管疾病防治领域研究的焦点之一。环氧合酶(COX)是花生四烯酸代谢途径合成PGs、TXs、PGI2的重要限速酶,其催化合成的活性物质参与血管炎症反应和血小板活化过程。由血管内皮细胞释放粘附分子,促使单核巨噬细胞、淋巴细胞向局部粘附、聚集、浸润,则是血管炎症反应的显著特征。赤芍801(PrG)是由中药赤芍的活性成分没食子酸经酯化反应而成的单体药物,既往药理研究表明它能对抗花生四烯酸诱导的血小板聚集,且具有抗炎作用。本课题分体外实验、体内实验及临床研究三部分,分别从细胞、分子、基因、蛋白及整体水平上研究赤芍801对COX代谢通路、白细胞与内皮细胞粘附、炎症因子、血小板活化和血栓形成的影响,并用于非ST段抬高急性冠脉综合征的治疗,为寻找新的、更为有效的通过抗炎、抗血栓形成等环节治疗冠心病的药物提供新的思路和方法,并为临床治疗缺血性心脏病提供理论依据。 体外实验 目的:研究赤芍801对环氧合酶代谢通路及血管内皮细胞(VEC)与多形核白细胞(Polymorphonuclear leukocyte, PMN)粘附的影响。方法:采用基于小鼠腹腔巨噬细胞的COX-1和COX-2体外筛选模型,用钙离子导入剂(Calcium ionophore A23187)短时刺激小鼠腹腔巨噬细胞,放免法(RIA)测定培养上清液中的6-酮-前列腺素F_(1α)(6-keto-PGF_(1α))的量反映COX-1活性;用脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)长时间刺激细胞,测定培养上清液中的前列腺素E_2(PGE_2)的量反映COX-2活性。半定量RT-PCR法检测PrG对LPS刺激的Raw小鼠巨噬细胞COX-1、COX-2mRNA表达的影响。Western blotting法检测PrG对LPS刺激的Raw小鼠巨噬细胞COX-1、COX-2蛋白表达的影响。同时以TNF-α为刺激物,造成人内皮


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