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BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗的质量评价研究

郭胜楠  
【摘要】:目的狂犬病由狂犬病病毒感染引起,是一种人畜共患的动物源性传染病。人和所有温血动物均易感染。近年来,狂犬病仍是传染病中死亡率最高的疾病之一,严重威胁着人民群众的生命安全[1]。目前,广泛使用的人用狂犬病疫苗均不含佐剂成分。然而多种类型的免疫佐剂已应用于人用疫苗或正在研究。新型CpG佐剂人用狂犬病疫苗可以增强体液免疫、细胞免疫,提高疫苗质量,可以增强免疫保护效果,降低疫苗抗原使用量。方法本文通过检测含有CpG佐剂的人用狂犬病疫苗的体液免疫应答、细胞免疫应答及保护力水平,探讨该疫苗暴露前免疫效果和暴露后免疫效果。同时,探究新型人用狂犬病疫苗中添加的CpG佐剂是否可以降低疫苗抗原使用量,降低人免疫球蛋白的使用量,节约疫苗生产成本及治疗成本的目的。对于CpG佐剂狂犬病疫苗的暴露前免疫效果的研究,参考现行版《中华人民共和国药典》中人用狂犬病疫苗效价测定法,对佐剂疫苗的效价测定方法,进行适用性研究,建立使用于CpG佐剂疫苗的效价测定方法;用含有CpG佐剂的不同抗原含量的疫苗免疫小鼠后,检测效价,评价CpG佐剂狂犬病疫苗保护力。采用快速荧光灶抑制试验(RFFIT),检测CpG佐剂疫苗的体液免疫应答水平;以适宜的抗原刺激物浓度刺激小鼠脾细胞,用酶联免疫斑点试验(ELISPOT)及流式细胞术(Flow Cytometry,,FCM)分别检测其细胞免疫应答水平及淋巴细胞亚群分型。对CpG佐剂狂犬疫苗的暴露后免疫效果的研究,采用金黄地鼠模型来评价该佐剂疫苗保护效果。结果研究结果显示,建立了适用于CpG佐剂疫苗的效价检测方法,以正确评价其相对效力。RFFIT结果显示,佐剂疫苗组免后各个时间点的血清中和抗体效价均高于单纯疫苗组。ELISPOT结果显示,CpG佐剂疫苗在免疫小鼠后第7天、14天、28天、42天的IFN-γ及IL-2水平较高,且明显优于对照组疫苗。以金黄地鼠为感染模型,对暴露后免疫效果的研究证明,CpG佐剂的加入可以增强机体免疫效果。结论相比无佐剂狂犬疫苗,在合适配伍的条件下,BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗能够增强体液免疫应答和细胞免疫应答。佐剂的加入可以降低抗原使用量和免疫球蛋白使用量。作为一种新型佐剂疫苗,BCG-Cp-DNA佐剂人用狂犬病疫苗具有广阔的前景。


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