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筛选肺腺癌相关血清自身抗体标志物

郑华  
【摘要】: 背景与目的:肺腺癌是肺癌中发病率最高的一种病理类型,大部分肺腺癌患者确诊时已为晚期,失去了最佳治疗时机。寻找出肿瘤标志物使其在早期发现肺癌是目前亟待解决的问题。本研究联合T7噬菌体展示技术(Phage display)和重组cDNA表达文库血清学分析(Serological analysis of recombinant cDNA expression library, SEREX)技术筛选肺腺癌相关抗原,以检测血清中肺腺癌相关自身抗体标志物。 方法:用10例肺腺癌和10例健康对照血清池(Pooled sera)对已构建好的肺腺癌T7噬菌体展示cDNA文库进行4轮生物淘选(Biopanning),用另20例肺腺癌血清池对4轮淘选后文库进行SEREX筛选。将筛选出来的阳性克隆克隆用96针手动阵列点样仪(96 Solid Pin Multi-Blot Replicator)点在硝酸纤维素膜上形成8×12阵列,并与40份单个血清(26例肺腺癌和14例健康对照)反应,通过聚类分析(Cluster Analysis)建立自身抗体检测模型。对模型中克隆进行测序,在GeneBank数据库中进行同源性比较。用193例单个血清(87例肺腺癌、77例健康对照和29例肺结核血清)进行模型验证。对结果进行判别分析(Discriminant Analysis)及交互校验(Leave-one-out cross validation)及其他统计分析。 结果:共筛选约22,000个噬菌体克隆,挑选出90个阳性克隆。建立了19个克隆组成的自身抗体检测模型,通过验证模型确定了几组自身抗体标志物。1为诊断性自身抗体标志物;2为肺腺癌与健康对照和肺结核鉴别的自身抗体标志物;3为鉴别肺腺癌与肺结核的自身抗体标志物,这三组标志物的敏感性、特异性均大于80.0%。在诊断性自身抗体标志物中,有些自身抗体与性别、淋巴结转移及T分期相关,当与CEA比较时,敏感性比CEA高,特异性比CEA稍差,与CEA联合检测时,敏感性不变,特异性略有增高。 在19个克隆中,没有一个展示肽段来源于人类正确的读码框,其中8个来源于移位的读码框,2个来源于插反了的序列,2个序列不是CDS,2个没有匹配的mRNA,还有5个是预测的miscRNA。 结论:联合T7噬菌体展示技术和SEREX技术筛选了肺腺癌相关抗原,并且其相关自身抗体为有效的诊断与鉴别诊断的标志物,可以用于肺腺癌的筛查。


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