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H2009肺腺癌抗体的制备和鉴定

曲婵娟  
【摘要】:目的:批量制备、筛选和鉴定H2009人肺腺癌细胞系的单克隆抗体,为筛选获得与肺癌增殖相关的基因/蛋白奠定基础,通过探索、鉴定肺癌相关抗原,为肺癌的免疫诊断和治疗提供可能的新研究靶标。 内容:1.H2009肺腺癌单克隆抗体制备; 2.H2009肺腺癌单克隆抗体的鉴定分析。 方法:用H2009肺腺癌细胞系免疫BALB/C小鼠,制备大容量单克隆抗体库,通过细胞ELISA、细胞免疫荧光、流式技术筛选针对H2009肺腺癌细胞系阳性较强而针对人正常支气管上皮细胞阴性或阳性相对较弱的杂交瘤及单克隆抗体,利用有限稀释法获得稳定分泌抗H2009肺腺癌细胞系的单克隆抗体的杂交瘤,并进行类和亚类鉴定以及与多种肺癌细胞系包括其他肺腺癌细胞系A549、A2、SK-LU-1、Ca-lu-3、大细胞肺癌801D、小细胞肺癌H209和肺鳞癌SK-MES-1的结合状况,通过免疫组化初步验证单抗与肺癌组织的结合情况;从H2009、A549、A2等细胞系提取细胞膜蛋白,通过westernblotting鉴定这些单抗所针对的抗原特性;探讨了纯化IgM的腹水和杂交瘤上清的几种方法。 结果:获得针对H2009肺腺癌细胞系阳性,针对人支气管上皮细胞阴性或弱阳性的单克隆抗体20株,亚类均为IgM,κ链。并且得到了这些单抗与其他肺癌细胞系的结合状况,初步鉴定了9H4、11C10、11B6、2D6等单抗所针对的抗原分子量。 结论:得到了20株目的杂交瘤及抗体,初步分析了所针对的肺癌细胞系的膜抗原蛋白分子量,为进一步研究奠定了基础;IgM纯化从小鼠腹水比杂交瘤无血清培养上清所得到的抗体产量大、并能达到较高纯度。


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