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外源Wtp53表达对人肺癌细胞药物敏感性影响及相关基因克隆

张洪涛  
【摘要】: 目的 了解外源野生型P53(wtp53)基因表达对人大细胞肺癌801-D细胞对化疗敏感性影响。克隆wtp53影响801-D细胞顺铂敏感性的相关基因。 方法 脂质体介导构建的含wtp53基因载体转染801-D细胞经PCR和流式细胞仪(FACS)分析等检测wtp53有效转染及表达。~3H-TdR掺入法测定801-D细胞转染wtp53后药物敏感性变化,并做同步FACS分析;DNA断裂鉴定药物作用后细胞死亡方式;免疫组化初步分析wtp53对MDR1蛋白表达的影响;用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)分离wtp53影响801-D细胞顺铂敏感性的相关基因,并进行克隆和序列分析。 结果 经对多种药物筛选表明,wtp53可选择性增加以顺铂为代表的DNA损伤制剂的敏感性,转染wtp53后及顺铂诱导后801-D细胞MDR1蛋白无明显变化。用mRNA差异显示方法获得6条阳性差异片段,经克隆和序列分析其中1条长459核苷酸片段有一个开放阅读框,与核糖核苷二磷酸还原酶A有56%的部分同源性。 结论 通过转基因方法证实wtp53可选择性增强大细胞肺癌801-D细胞顺铂等药物敏感性,其增强作用以非凋亡途径为主。P53调控801-D细胞顺铂敏感性与MDR1无明显关联。通过DDRT-PCR获得P53调节801-D细胞顺铂敏感性相关基因片段6条,其中1条与核糖核苷二磷酸还原酶A功能域有部分同源性,提示可能是介入P53调节801-D细胞顺铂敏感性的一个有意义基因,其确切功能还必须依赖于全长cDNA获得。


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