结核分枝杆菌mRNA定量检测作为活菌标志及其用于利福平药物敏感性分析、化疗反应监测的研究

【摘要】： 目的 探讨结核分枝杆菌mRNA作为活菌检测分子标志的可行性，评价应用mRNA定量法进行结核分枝杆菌利福平敏感性分析和肺结核患者化疗反应监测的价值。方法 (1)采用定量RT-PCR方法测定结核分枝杆菌H_(37)R_v在利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星处理后24h、48h、72h 85B mRNA表达水平的变化。(2)应用定量RT-PCR方法检测53株结核分枝杆菌临床分离株对利福平的敏感性。(3)应用定量RT-PCR方法对15例初治肺结核患者应用标准短程化疗方案治疗过程中痰标本mRNA的系列监测。结果 (1)10μg/ml利福平处理24h后结核分枝杆菌85BmRNA下降到无药对照的0.02％，其他药物处理分别下降到无药对照的1％～10％，各药处理72h后85BmRNA均下降到1％以下，与菌落形成单位(CFU)呈平行关系。(2)53株结核分枝杆菌临床分离株mRNA定量法测定：利福平1μg/ml存在以1％和10％为耐药临界比例时与绝对浓度法的符合率分别为：69.8％、81.1％，利福平2μg/ml存在时符合率分别为84.9％、92.5％，利福平4μg/ml存在符合率是92.5％、92.5％。与绝对浓度法相比，mRNA定量法的敏感度在90％以上，特异度在2μg/ml利福平、以10％为临界比例时为87.5％。(3)结核分枝杆菌85BmRNA在15例肺结核患者治疗的2d快速下降，治疗14d时12例检测阴性，治疗60d时全部阴性。结论 (1)mRNA表达水平在24h内反映出含药与无药的区别，是检测和判定结核分枝杆菌“死”“活”的分子标志物。(2)mRNA定量法用于结核分枝杆菌药物敏感性分析具有快速、可定量等优点，建议以利福平2μg/ml作用24h后下降到无药对照的10％以下为利福平敏感，利福平2μg/ml作用24h未下降到无药对照的10％为利福平耐药。(3)结核分枝杆菌mRNA在接受治疗的肺结核患者的痰标本中快速下降，是活菌数量下降的反映，痰标本中mRNA的变化可作为快速评价化疗反应的分子指标。