收藏本站
收藏 | 论文排版

非典型蛋白激酶C对Th17细胞免疫调节作用的研究

杨莹莹  
【摘要】:免疫调节在免疫生理及免疫病理中起着非常重要的作用。当今免疫学的热点,如自身免疫、肿瘤免疫和变态反应等,均与免疫调节失衡有关。Th17细胞、调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)、自然杀伤性T细胞(natural killer T cell,NKT)、滤泡辅助性T细胞(T follicular helper,Tfh)及其分泌的细胞因子(cytokine)、化学趋化因子(chemokine)等,均是参与免疫调节的重要细胞与介质。我们在国际上首次证实了非典型蛋白激酶Cλ/ι(PKCλ/ι)是一个重要的信号转导分子,参与调节Th2细胞的分化及功能,并在T细胞极化中起重要作用。蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)广泛存在于机体组织及细胞中,在跨膜信号传递过程中起着重要作用。PKC分为三组:传统PKC(classical PKC,c PKC),包括α、βI、βⅡ和γ亚类;新型PKC(novel PKC,n PKC),包括δ、ε、η和θ亚类;非典型PKC(atypical PKC,a PKC),由PKCζ和PKCλ/ι亚类组成。PKC参与多种生理与病理反应,在肿瘤免疫、过敏性炎症、糖尿病等的发病机理中起重要的作用,已成为新药开发的靶标(therapeutic target)。已经证实非典型蛋白激酶Cλ/ι(protein kinase Cλ/ι,PKCλ/ι)参与调节Th2细胞的分化及功能,并在T细胞的极化中起重要作用。它们广泛参与多种信号转导通路,与寄生虫感染、过敏性炎症、肿瘤等的发生发展密切相关。Th17细胞是新近发现的CD4+T细胞亚群,区别于传统的Th1/Th2细胞,并与之起相互拮抗作用。Th17细胞具有独立的分化调节途径,发挥着重要的免疫调节与免疫效应功能。Th17细胞能分泌IL-17(也称为IL-17A),IL-17F,IL-21和IL-22等效应性细胞因子。IL-17和IL-22细胞因子的受体广泛存在于多种组织,如上皮组织中。因此这两种细胞因子在免疫系统和组织细胞的相互联络中起关键作用。越来越多的研究表明,Th17细胞在过敏性气道炎症中发挥重要作用。Th17细胞在过敏性哮喘、感染及自身免疫中起重要的免疫病理作用,已被视为开发治疗以上疾病新药的靶标。有关PKCλ/ι对Th17细胞的作用,国内外尚未有报道,属空白领域。为此,本研究应用PKCλ/ι条件性基因敲除鼠,开创性地研究PKCλ/ι对Th17细胞分化及功能的作用,阐明其分子机理。并探讨PKCλ/ι-Th17轴(axis)对过敏性炎症的调控作用。第一部分PKCλ/ι基因缺损对Th17细胞体外分化及细胞因子分泌的调节作用目的:探讨PKCλ/ι对Th17细胞体外分化及细胞因子分泌的调节作用。拟运用活化T细胞特异的PKCλ/ι条件性基因敲除鼠与对照鼠,分离纯化其CD4+T细胞。采用非极化及Th17极化体外培养体系,探讨PKCλ/ι缺损是否影响Th17细胞的分化及效应细胞因子的分泌等。方法:选用PKCλ/ιflx/flxOX40Cre+(以下简称KO)及对照鼠PKCλ/ιflx/flxOX40Cre-(WT),采用全自动磁性细胞分离技术(Auto MACS Pro)从脾脏中纯化初始(na?ve)CD4+T细胞。纯化的CD4+T细胞用Anti-CD3/CD28刺激作体外非极化培养、Th17/Treg极化条件下培养。培养上清中细胞因子含量用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、培养细胞用流式细胞技术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)作细胞内细胞因子染色(intracellular cytokine staining)。例如检测Th2、Th17、Treg细胞的数量及细胞因子分泌,用流式细胞仪分别作细胞内IL-4、IL-17、CD25/Foxp3染色,并测定培养上清中三种细胞所对应的代表性效应细胞因子IL-4/IL-13、IL-17A/IL-17F、TGF-β1/IL-10等。结果:PKCλ/ι缺损型CD4+T细胞在体外Th17极化条件(TGF-β+IL-6),培养4天,经再刺激后IL-17分泌细胞(Th17细胞)明显低于WT型CD4+T细胞!在体外Th17非极化条件下(anti-CD3/CD28刺激),培养上清中PKCλ/ι敲除鼠IL-17细胞因子水平明显降低;在体外Th17极化条件下,PKCλ/ι敲除鼠IL-17细胞因子水平明显降低。在脾细胞培养上清中(anti-CD3/CD28刺激),PKCλ/ι缺损组IL-17细胞因子水平明显降低;在体外Th17极化条件下,PKCλ/ι缺损组的IL-17细胞因子水平也是明显降低的,这与体内的结果一致。结论:PKCλ/ι能调控Th17细胞体外的分化及细胞因子的分泌。第二部分PKCλ/ι基因缺损对Th17体内功能的影响目的:研究PKCλ/ι缺损对Th17细胞体内功能的影响;我们将研究活化T细胞特异的PKCλ/ι条件性基因敲除对小鼠哮喘模型的影响。方法:建立尘螨(house dust mite,HDM)诱导的小鼠哮喘模型,应用PKCλ/ι条件性基因敲除鼠(PKCλ/ιflx/flxCreoxtuv,以下简称KO)和野生型对照鼠(PKCλ/ιflx/flxCreoxtuw,以下简称WT)。收集小鼠支气管肺泡洗液(Bronchoalveolar lavage,BAL),取肺组织(按其生理分页),分别做石蜡病理切片(HE),Kwik-Diff染色,以检测气道局部炎症浸润细胞;用ELISA及实时荧光定量PCR分别测定BAL液及肺组织中多种细胞因子/趋化因子,如IL-4,IL-17,IFN-γ,Gob-5,Eotaxin等。结果:本课题研究了PKCλ/ι敲除对HDM诱导的过敏性气道局部炎症的作用。气道炎症的一大特征就是CD4+T细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞以及嗜酸性粒细胞的浸润,继而导致气道高反应性和结构改变。在病理学切片结果中,PKCλ/ι敲除后,浸润肺支气管组织局部的嗜酸性粒细胞、中性粒细胞都明显减少;与此相对应,实时荧光定量PCR检测结果则表明,肺组织中的IL-4、IL-17、Eotaxin、Gob-5等炎症相关的细胞因子m RNA水平的表达明显下调。支气管肺泡洗液(BAL)的ELISA结果显示,PKCλ/ι缺损对HDM诱导的哮喘炎症相关因子造成一定的影响,其中Th2细胞因子IL-4、IL-5与Th17细胞因子IL-17以及与炎症相关的Eotaxin等都受到了抑制。结论:本课题运用PKCλ/ι条件性基因敲除鼠,成功建立了HDM诱导的小鼠哮喘模型。PKCλ/ι条件性基因敲除能明显抑制HDM诱导的过敏性气道炎症,表现为支气管及肺组织中炎症浸润细胞,特别是中性粒细胞数目减少,Th2及Th17效应细胞因子下调。PKCλ/ι能调控体内Th17的功能。本研究是在国际上首次运用PKCλ/ι条件性基因敲除鼠探讨PKCλ/ι-Th17轴对过敏性气道炎症的作用。相关分子机理的深入研究正在进行中。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 ;《细胞因子研究方法学》工具书出版[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2002年01期
2 罗晓丹;刘启发;;细胞因子与慢性移植物抗宿主病关系研究[J];中国实用内科杂志;2007年03期
3 李晓红;盛光耀;;儿童特发性血小板减少性紫癜多项细胞因子测定价值研究[J];现代预防医学;2011年15期
4 曹雪涛;第二届国际细胞因子会议评介[J];中国免疫学杂志;1990年03期
5 曹雪涛,叶天星,杜平;细胞因子和细胞因子网络的基础研究进展[J];国外医学(免疫学分册);1990年05期
6 曹雪涛,叶天星,杜平;细胞因子和细胞因子网络的临床研究进展[J];国外医学(免疫学分册);1990年05期
7 史久华;细胞因子与疾病[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1993年05期
8 刘卫京,吕秋军;细胞因子小分子模拟物研究进展[J];药学学报;2000年11期
9 孟宪钧;外科感染和细胞因子[J];中国实用外科杂志;2000年12期
10 ;《细胞因子研究方法学》工具书出版[J];中华微生物学和免疫学杂志;2000年03期
11 赵武述;细胞因子研究的临床意义及展望[J];中华检验医学杂志;2000年04期
12 赵武述;细胞因子的测定[J];中华检验医学杂志;2000年04期
13 刘辉国;细胞因子与睡眠调节及睡眠呼吸暂停综合症的关系[J];国外医学.呼吸系统分册;2000年01期
14 林华,索晓慧,张卫强;细胞因子在格林-巴利综合征发病机制中的意义[J];邯郸医学高等专科学校学报;2000年05期
15 史智勇,赵红斌;细胞因子对睡眠的影响[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);2000年04期
16 马文新;细胞因子及其临床检测[J];当代医学;2000年10期
17 张明;杜建新;;细胞因子在老年恶病质中的作用[J];国外医学(老年医学分册);2000年05期
18 ;增生性玻璃体视网膜病变与细胞因子研究进展[J];眼科研究;2001年06期
19 陈建颜;细胞因子与急性呼吸窘迫综合征[J];国外医学.麻醉学与复苏分册;2001年03期
20 陈军浩;Thl/Th2细胞因子的临床意义[J];河北医学;2001年12期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王志国;陈波;肖亮;张颢;展昭民;张伯龙;马军;;细胞因子在急性移植物抗宿主病中的临床研究[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
2 窦永喜;景志忠;候俊琳;骆学农;才学鹏;;细胞因子及其应用研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年
3 窦永喜;景志忠;候俊琳;骆学农;才学鹏;;细胞因子及其应用研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年
4 窦永喜;景志忠;候俊琳;骆学农;才学鹏;;细胞因子及其应用研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年
5 张凤蕴;吕雪莹;于伟玲;王丽群;王琳;李殿俊;;实验性变态反应性脑脊髓炎几种细胞因子的检测[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年(1993—2003)论文集[C];2003年
6 邹峥;张淑华;柯江维;;小儿幼年类风湿关节炎细胞因子产生及干预的研究[A];全国自身免疫性疾病专题研讨会暨第十一次全国风湿病学学术年会论文汇编[C];2006年
7 邹峥;张淑华;柯江维;;小儿幼年类风湿关节炎细胞因子产生及干预的研究[A];全国自身免疫性疾病专题研讨会暨第十一次全国风湿病学学术年会论文汇编[C];2006年
8 邹峥;张淑华;柯江维;华学明;刘小惠;;小儿幼年特发性关节细胞因子产生及干预的研究[A];中华医学会第十四次全国儿科学术会议论文汇编[C];2006年
9 万遂如;;细胞因子与细胞因子疗法[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会论文集[C];2007年
10 刘占国;袁小彭;罗宇维;何懿;孙尔维;;通过细胞因子谱评估免疫抑制剂对人免疫状态的作用[A];全国临床免疫检验研讨会暨第六届全国临床免疫学术会议论文汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李海军;白细胞介素-21在乙型肝炎病毒感染中的作用研究[D];第三军医大学;2015年
2 王婧瑶;卵巢癌患者髓源性抑制细胞、调节性T细胞及其相关细胞因子的表达及临床意义[D];天津医科大学;2015年
3 徐金成;环意大利公路自行车赛中能量代谢与肌损伤及细胞因子相关变化[D];北京体育大学;2015年
4 关连越;胰蛋白酶抑制剂保护肝缺血/再灌注损伤(HIRI)的机制和影响肝移植物存活的实验研究[D];吉林大学;2016年
5 王佳;抑制性细胞因子IL-35对急性髓细胞白血病免疫功能的影响及其机制研究[D];安徽医科大学;2016年
6 董海平;结核患者血浆细胞因子表达与临床表型及结核耐药的相关性研究[D];南方医科大学;2015年
7 夏添;细胞因子谱与降钙素原在血液肿瘤患儿感染中诊断作用的比较研究[D];浙江大学;2017年
8 孟繁华;IL-33及其受体ST2在吉兰—巴雷综合征中作用的研究[D];吉林大学;2017年
9 胡爱心;细胞因子在骨性关节炎的发生及治疗方面的相关研究[D];武汉大学;2015年
10 杨彬珧;血浆细胞因子与心率变异性和急性冠脉综合征发病风险的关联性研究[D];华中科技大学;2014年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 钟树玉;复方补筋片对绝经后膝骨关节炎血浆中性激素与细胞因子的影响[D];福建中医药大学;2015年
2 高雁怩;ALV-J感染后细胞因子变化规律及其促进IL-6产生的机制与效应研究[D];中国农业科学院;2015年
3 陈姣;原发免疫性血小板减少症负调控分子PD-1和CTLA-4表达研究[D];兰州大学;2015年
4 黄琼;改良细胞因子鸡尾酒诱导肺腺癌细胞总RNA转染树突状细胞疫苗抗肿瘤效应的体内研究[D];安徽医科大学;2015年
5 于炳旗;恶性肿瘤精神创伤后应激障碍患者的发病特点及血清炎性因子水平的研究[D];河北大学;2015年
6 牛小慧;双氢青蒿素联合顺铂对荷瘤大鼠细胞因子的影响[D];山西医科大学;2015年
7 孙聪聪;骨髓增殖性肿瘤中JAK2V617F突变及IL-6、TNF-α、IL-32、IL-37的定量测定及相关性研究[D];山东大学;2015年
8 李少慧;乳酸杆菌对细胞因子及TLR-NF-κB途径的调节作用研究[D];哈尔滨工业大学;2015年
9 董杰;多肽及γ链细胞因子对慢性HBV感染者CD8~+T细胞上Tim-3的表达影响[D];第四军医大学;2015年
10 李健;不同类型红斑狼疮患者血清中细胞因子的表达模式及意义[D];第三军医大学;2015年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 仇逸;口服细胞因子治疗肿瘤将获突破[N];医药经济报;2009年
2 通讯员 何育萍 记者 王玉华;我省细胞因子研究获重大突破[N];湖北日报;2001年
3 徐州市第一人民医院血液科 张鲁勤;白介素18等细胞因子在非恶性血液病中的作用及临床研究[N];徐州日报;2005年
4 安徽医科大学临床药理研究所徐叔云 魏伟 王华 吴成义 李常玉;细胞因子是柄双刃剑[N];中国医药报;2003年
5 本报特约通讯员 吴志军;向一个个“第一”冲击[N];解放军报;2002年
6 王振坤;人体的血液防线之一[N];家庭医生报;2007年
7 ;独辟蹊径 追根溯源[N];中国医药报;2003年
8 新言;中医证的本质是细胞因子吗?[N];科技日报;2005年
9 王苏平;探究中医证本质[N];健康报;2004年
10 清华;世界多肽药物的研发概况[N];中药报;2001年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978