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恶性疟原虫抗氯喹pfcrt基因的研究

王安平  
【摘要】:疟疾是一种严重危害人类健康的寄生虫病,广泛流行于热带、亚热带甚至温带边缘。在四种寄生于人体的疟原虫中,恶性疟原虫感染导致的恶性疟症状最为严重,病死率也较高,而恶性疟原虫氯喹抗药性的产生以及在世界范围内的波及则导致了对恶性疟防治费用的增加,引发了严重的公共卫生问题。目前我国海南、云南两省部分地区存在恶性疟流行,抗药性恶性疟的传播和扩散是当地疟疾防治工作面临的迫切问题。对氯喹抗药性的研究长期以来都以体内和体外药物敏感实验为主,但近些年来随着恶性疟原虫基因组研究的进展,恶性疟原虫抗氯喹基因pfcrt 已经成为当前氯喹抗药性研究的重点。 目的:建立一种恶性疟原虫氯喹抗药性基因pfcrt 点突变的检测方法以判断是否存在氯喹抗药性;对我国海南省恶性疟和世界其它地区恶性疟的pfcrt 等位基因多态性的单体型进行比较。 方法:(1) 根据pfcrt 基因第76 位氨基酸密码子的K76T 点突变在恶性疟抗氯喹中的关键地位,设计一套巢式PCR 引物,通过扩增出一条包含第76 位氨基酸密码子基因片段的扩增产物,再以限制性内切酶ApoI 进行酶切消化,用琼脂糖凝胶电泳观察恶性疟原虫pfcrt 等位基因是否为突变型。(2) 修改巢式引物的下游序列,将扩增片段延长使其包含第97 位密码子,根据RFLP 结果,各选取两份突变型和野生型PCR 产物进行DNA 测序,检测第72~76、97 位密


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