强直性脊柱炎患者HLA-B27的检测、抗原纯化及表达水平的研究（附167例临床分析）

【摘要】： 目的： 1.分析强直性脊柱炎（AS）患者的临床特点，探讨AS的早期诊断，提 高AS的诊断水平； 2.评价三种HLA-B27检测方法的优劣； 3.探讨HLA-B27的表达（分别从RNA和蛋白水平）与AS发病及其临床 特征的可能联系； 4.分离纯化AS患者HLA-B27抗原，为进一步研究B27提呈肽与AS发 病的关系做技术和方法上的准备。 材料与方法： 1.总结笔者2年来临床实践中确诊的130例AS患者的临床资料和必要 的实验室检查结果，分别比较和分析AS早、中、后期患者、JAS与 AAS、男性与女性AS、HLA-B27（+）与（-）AS的结果。 2.分别使用施桂英提出的JAS诊断条件及ESSG和Amor等关于SpA的 诊断和分类标准重新评价37例AS疑诊患者的诊断。 3.采用PCR-SSP法和单抗板淋巴细胞毒法分别检测138份AS确诊及疑 诊患者的血标本，比较两法的检测结果。 4.应用流式细胞仪合并单克隆抗体技术检测白细胞及T细胞亚群的 HLA-B27抗原的表达水平，比较B27（+）与（-）结果的差异，分析 B27（+）各组间B27蛋白表达的差异及B27表达与AS发病及其临床 特征的关系。 5.应用β-actin内参法RT-PCR技术定量检测B27（+）AS患者白细胞 HLA-B27的mRNA水平，分析各组内差异及mRNA水平与B27蛋白表 达水平、AS发病及其临床特征的关系。 6.应用单克隆抗体亲和层析法分离纯化AS患者外周血单个核细胞表面 的HLA-B27抗原，SDS-PAGE法分析其纯度及分子量。 琴一旱巨大学2000厄协士学笆枪不 结果： 1．130例 AS确诊与 37例疑诊患者约占笔者门诊病人的 5“ 中、后期 占了 AS患者的70％，男女比例为 5．2：1；JAS 37例，AAS 93例，JAS 较 AAS更倾向于男性优势（男女比例达门：l人其外周关节首发率和 受累率均高于AAS，827卜）率亦高于AAS：男性AS以后期患者居 多（近 50们，女性以早期居多u0％以上人 女性 AS平均起病年龄显 著大于男性（p＜0．of），男性外周关节首发及受累率和腰椎、胸廊、 颈椎、髓关节强直率均高于女性，B27卜）率男性高于女性；R27h） AS患者脊柱及骸关节强直率远高于 B27（刁者 B27（＋）AS中近半 数为后期患者，而 B27卜）组则无一后期患者，B27O）组田R平 均值和ESR异常率均高于B27卜）组。 2．37例肪疑诊患者，平均患病 l．4年，疑诊NS者 15例，2例满足 施桂英诊断条件，8例符合ESSG标准，10例符合Am。r标准：疑诊 AAS者22例，3例符合ESSG标准，7例符合A。or标准。 3．经PCR－SSP法检测138例标本中，B27（。）111例，B27（－）27例， 经单抗板淋巴细胞毒法检测99例B27卜人 29例B27卜人 10例可 疑，与 PCR－SSP法比较其灵敏度为 88．3％，特异度为 85．2％，误诊率 为3．7％，漏诊率为5．4％，总符合率为87 7％。 4．经流式细胞仪结合单克隆抗体技术检测 B27（＋）标本白细胞的图形 全部为高荧光区的单一尖峰，与PCR－SSP法的结果完全符合；综合 CD3、CD4、CDS双标图形可的出 7个指标：白细胞 B27荧光值、B27 （＋）CD3亚群比例、CD3亚群 B27荧光值、B27（＋）CD4亚群比例、 CD4亚群 B27荧光值、B27（＋）CDS亚群比例和 CDS亚群 B27荧光值， 经比较，患者组上述7个指标均显著高于正常组（P＜0．05）；AS确诊 与疑诊患者可诊为 SPA者之间无差异；AAS组白细胞、C＊、CIj4亚 群荧光值显著高于NS组（P＜0．05），CDS无差异：早期AS组白细胞、 CI）3、CD4及＊ 荧光值均显著高于中期AS组（P＜0．05）：女性患者组 白细胞和 T细胞亚群荧光值均显著高于男性组（P＜0．05）；ESR正常与 异常组、外周受累与单纯中枢受累组、不同首发部位组之间均无显 著性差异：白细胞＊细胞各亚群之间均呈显著的正相关叩均m．01人 2 审一旱匣大学2000刁休＊学位必丈 H鲫胞、Cm、Cm荧光惭了起病贱朋弓汇相关（卜们．05），！渊啊 与？细胞各亚群荧光值与患病时间早弱负相关叩O．0幻，各细胞荧 光值均与ESR无显著性相关。 5．经p－actin内参法RT－PCI｛技术得至1127带相对于p－actjn带的相对 荧光值代表B271RNA 水平，经比较，患者织显著高于正常组 （P＜0．001），AS与 SPA、JAS与 AAS组间无显著差异，早朔、后期 组显著高于中州级（P＜0、（）5），ESR丁常（j异常织、外用受累与单纯 中枢受累组间无显著差异，腰椎起病织显著低于臀、髓、膝、踝起 病组（P＜0．05）；患者级内，1127－＂l｛NA水丁山’1绷胞、’1”细胞各亚群 m7荧光值之间均星显著正相关（I丫0．0（）I），与起病年龄、患病时间 无显著相关，与以R呈弱十关（1）卅．05）。 6．经单克隆抗体亲和层析法分离纯化的蛋白于SDS十A（；p。显示为单一 条带，其分子量为56．4kD。 结论： l．JAS与＊S、男性与女性仰、B27（＋）与 B27（－）AS之间有着不同 的临床特点，女性“、827卜）As病情较轻、预后良好；早朔。MS、