幽门螺杆菌vacA多态性及～(14)C-尿素呼气试验对小鼠模型评价的研究

【摘要】： 目的 （1）了解广州地区人群感染的Hp菌株的vacA及cagA基因的多 态性，探讨Hp菌株的基因亚型分布特点及其与致病的关系；（2）建立幽 门螺杆菌（Hp）及海尔曼螺杆菌（Hh）感染小鼠模型，（3）建立~(14)C-尿素呼气 试验（UBT）无创性检测小鼠感染Hp及Hh的方法。 方法 （1）用聚合酶链反应（PCR）方法扩增92株Hp临床分离株的 vacA基因的信号区（s区）和中间区（m区）以及cagA基因。（2）用中 性红吸收法测定Hp培养上清浓缩液对胃癌细胞株SGC-7901细胞的细胞 毒性作用。（3）应用PCR方法扩增来源于人胃的Hh和来源于狗胃的Hh 类似菌的尿素酶B片段以及另一未知片段，并对未知片段进行测序。（4） 应用26株Hp临床分离株以及SS1株反复灌喂方法建立Hp感染小鼠模型。 （5）采用Hh感染患者以及感染Hh类似菌的狗胃粘膜组织磨碎后直接灌喂 方法建立Hh以及Hh类似菌感染小鼠模型。（6）应用UBT方法检查Hp及 Hh感染小鼠模型的细菌定植情况。 结果 （1）从92株Hp临床分离株中，检出sla/ml型14株（15.2％）、 sla/mla型6株（6.5％）、sla/m2型55株（59.8％）、slb/ml型2株（2.2％）、 slb/m2型5株（5.4％）、s2/m2型8株（8.7％），有2株Hp未能分型，未 发现slb/mla、s2/ml及s2/mla型。（2）分离自消化性溃疡与慢性胃炎患 者的Hp菌株，两组菌株的s亚型分布有显著性差异（P＜0.05），而m亚型 无显著性差异（P＞0.05）。sla型Hp与消化性溃疡的关系密切。（3）92 株Hp临床分离株中，有83株为cagA基因阳性，阳性率为90.2％。胃癌 以及消化性溃疡患者感染Hp的cagA阳性率高于慢性胃炎患者感染Hp的 cagA阳性率（P＜0.05），提示cagA阳性Hp与胃癌以及消化性溃疡的关系 密切。（4）cagA与Hp的s亚型有关，尤其与Hp的sla关系密切，而与m 亚型无关。（5）Hp的细胞毒性与其s亚型、m亚型以及cagA均有关系。 （6）应用2对不同的特异性引物均可一致扩增Hh及来源于狗胃粘膜的Hh 类似菌，2株不同来源的Hh及其类似菌的同源性为97.4％，提示两者可 能是同一种细菌，即Hh。（7）Hh或Hh类似菌容易在Balb/c小鼠胃内定 植，成功串达到100％新鲜分离的Hp混合株以及％ 株亦可在Balb／C 小鼠胃内定植，但其感染成功率低于Hh或Hh 茵。枯）HP及Hh、Hh 类似菌感染小鼠的病理变化类似，但Hh和Hh类似菌感染小鼠出现病理 变化的时间早而且较为明显。在感染第4周，部分Hh与Hh类似菌感染 小鼠胃粘膜可见少量淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞浸润，而HP 感染小鼠则在感染第8周后，亦可见上述病理变化。感染第16周后，全 部螺杆菌感染小鼠胃粘膜都可见不同程度的淋巴细胞、浆细胞浸润，部 分小鼠出现胃粘膜糜烂或伴有中性粒细胞浸润，甚至出现淋巴滤泡形成。 仅）Hp及 Hh感染小鼠呼出 C02的放射活性都在灌喂’℃－尿素溶液后第 10 分钟达到高峰，与阴性对照组比较有显著性差异（P＜0．05），然后逐渐降 低，至第24小时以后接近本底水平。以阴性对照组小鼠灌喂‘℃－尿素溶 液后第10分钟的dPP均数＋ZS（或3S）作为UBT的临界值，UBT诊断HP 感染小鼠模型的敏感性、特异性、阳性预告值和阴性预告值分别为 89．1％（92．3％）、85．6＄（84．5％）、86％（84．2％）、88．7％（92．5％）。UBT诊断 Hh感染小鼠模型的敏感性、特异性、阳性预告值和阴性预告值分别为 90．6％（93．5％）、95．9％（96．1％）、96．7％（96 7％）、88．7％（92．5％）。 结论 0）广州地区感染的地存在多种v既 基因亚型，较常见的亚 型为＊ 型，其次sla／ml 型，未发现slbhala、sZlml及sZ／mla 型。 Hp菌株cagA阳性率为 90．2儿。a）Hp的 sla亚型及 cagA阳性均与消 化性溃疡的发生以及Hp菌株的细胞毒性有关。＊）证实狗胃内存在Hh， 为人类感染 m来源于动物（狗）提供证据。（）初步建立了 pp感染小鼠模 型，但Hp长期感染模型仍不够理想八5）建立稳定可靠的Hh长期感染小 鼠模型，可用于Hh的致病性研究以及Hp疫苗评价。O）建立’t－尿素呼 气试验检测 Hp或 Hh感染小鼠模型的方法，为将来 Hp疫苗在小鼠模型 中防治效果的评价提供一种无创性检查手段。