磷酸脂酶C-gamma1在小血板生长因子介导的细胞分裂信号传递中的作用

【摘要】： 在哺乳动物细胞中目前存在约10种不同的磷酸脂酶C （phospholipase C，PLC），它们共有三个家族：PLC-β，PLC-γ，PLC- δ。PLC参与第二信使的产生，即将磷酸脂酰肌醇二磷酸 （Phospjatidylinositol，4,5-diphosphate，PIP2）分解为第二信使二 酰基甘油（diacylglycerol，DAG）和肌醇三磷酸（inositoll，4，5- trisphosphate，IP3）。在PLC家族中，只有PLC-γ含有SH2和SH3结 构域（domain），而且可被生长因子酪氨酸受体所激活。这些生长因子 包括表皮生长因子（EGF）、神经生长因子（NGF）、成纤维细胞生长因 子（FGF）以及血小板生长因子（PDGF）等。当受体与其配体结合并被激 活后，PLC-γ1则与激活的受体偶朕，继而在这些受体酪氨酸激酶的催 化下，其酪氨酸残基被磷酸化。由此活化的PLC-γ1从胞质转移到质膜 上，并可催化PIP2的降解为DAG和IP3。生长因子是细胞分裂、增殖的 重要调控因子，但PLC-γ1在其中究竟起什么作用，目前尚不清楚。 目的：研究PLC-γ1在细胞有丝分裂过程中生长因子PDGF介导的信 号传递中所起的作用。 方法：采用缺失内源性PLC-γ1的成纤维细胞株，1．研究PLC-γ1 对细胞生长及自然转化的影响：作常规生长曲线，观察细胞集落形成能 力。2．研究PLC-γ1对细胞形态结构的影：相差显微镜、透射电镜观 察。3．研究PLC-γ1对PDGF诱导的细胞迁移的影响：观察细胞迁移率。 4．研究PLC-γ1对PDGF诱导的细胞内钙流的影响。5．研究PLC-γ1对PDGF 诱导的DNA合成的影响：3H-TdR掺入法测定细胞DNA的合成。 结果：1．未加PDGF时，缺失PLC-γ1的细胞株（PLC-γ1~(-/-)）与正 常细胞株（PLC-γ1~(+/+)）在细胞生长、集落形成能力、细胞形态结构、细 胞迁移率、细胞内钙流产生及DNA合成等方面无显著差异。2、PDGF 刺激后，二者均有增殖表现，但PLC-γ1~(-/-)细胞略差于PLC-γ1~(+/+)细胞。 二者细胞迁移、DNA合成显著增强，都出现细胞内钙动员。但PLC-γ1~(-/-) 细胞DNA合成时间延长，钙流较PLC-γ1~(+/+)值小且峰值出现较晚。 结论：1．PLC-γ1在PDGF诱导的细胞增殖的信号传递过程中有重 要作用。2．当缺失内渺胜Pu－YI 时，扎C－YI原有的信号转导途径可 山其它信号转导通路代偿。3．PDGF通过 I：LC－YI对细胞增砍卜良明显的调 控作用。