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磷酸脂酶C-gamma1在小血板生长因子介导的细胞分裂信号传递中的作用

杨霖  
【摘要】: 在哺乳动物细胞中目前存在约10种不同的磷酸脂酶C (phospholipase C,PLC),它们共有三个家族:PLC-β,PLC-γ,PLC- δ。PLC参与第二信使的产生,即将磷酸脂酰肌醇二磷酸 (Phospjatidylinositol,4,5-diphosphate,PIP2)分解为第二信使二 酰基甘油(diacylglycerol,DAG)和肌醇三磷酸(inositoll,4,5- trisphosphate,IP3)。在PLC家族中,只有PLC-γ含有SH2和SH3结 构域(domain),而且可被生长因子酪氨酸受体所激活。这些生长因子 包括表皮生长因子(EGF)、神经生长因子(NGF)、成纤维细胞生长因 子(FGF)以及血小板生长因子(PDGF)等。当受体与其配体结合并被激 活后,PLC-γ1则与激活的受体偶朕,继而在这些受体酪氨酸激酶的催 化下,其酪氨酸残基被磷酸化。由此活化的PLC-γ1从胞质转移到质膜 上,并可催化PIP2的降解为DAG和IP3。生长因子是细胞分裂、增殖的 重要调控因子,但PLC-γ1在其中究竟起什么作用,目前尚不清楚。 目的:研究PLC-γ1在细胞有丝分裂过程中生长因子PDGF介导的信 号传递中所起的作用。 方法:采用缺失内源性PLC-γ1的成纤维细胞株,1.研究PLC-γ1 对细胞生长及自然转化的影响:作常规生长曲线,观察细胞集落形成能 力。2.研究PLC-γ1对细胞形态结构的影:相差显微镜、透射电镜观 察。3.研究PLC-γ1对PDGF诱导的细胞迁移的影响:观察细胞迁移率。 4.研究PLC-γ1对PDGF诱导的细胞内钙流的影响。5.研究PLC-γ1对PDGF 诱导的DNA合成的影响:3H-TdR掺入法测定细胞DNA的合成。 结果:1.未加PDGF时,缺失PLC-γ1的细胞株(PLC-γ1~(-/-))与正 常细胞株(PLC-γ1~(+/+))在细胞生长、集落形成能力、细胞形态结构、细 胞迁移率、细胞内钙流产生及DNA合成等方面无显著差异。2、PDGF 刺激后,二者均有增殖表现,但PLC-γ1~(-/-)细胞略差于PLC-γ1~(+/+)细胞。 二者细胞迁移、DNA合成显著增强,都出现细胞内钙动员。但PLC-γ1~(-/-) 细胞DNA合成时间延长,钙流较PLC-γ1~(+/+)值小且峰值出现较晚。 结论:1.PLC-γ1在PDGF诱导的细胞增殖的信号传递过程中有重 要作用。2.当缺失内渺胜Pu-YI 时,扎C-YI原有的信号转导途径可 山其它信号转导通路代偿。3.PDGF通过 I:LC-YI对细胞增砍卜良明显的调 控作用。


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