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乙型肝炎病毒感染与肝细胞凋亡的关系研究

倪宏  
【摘要】: 乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)相关的慢性肝病在我国 广泛流行,是当前危害人民健康最严重的传染病。细胞凋亡参与HBV相 关肝病的发病机制,但病毒与肝细胞凋亡的关系还未完全阐明,究竟是抑 制肝细胞凋亡还是促进肝细胞凋亡,尚无最后结论。 本实验通过体外连接HBV(ayw亚型)DNA获得6.4kb的双拷贝 DNA片段,然后将其插入pcDNA3载体的EcoR V位点获得连接;通过 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)和酶切筛选并验 证,获得头尾串联双拷贝HBV全基因重组真核表达质粒,构建了HBV全 基因重组真核表达质粒。 应用脂质体介导法,把头尾串联双拷贝HBV全基因重组真核表达质 粒转染肝癌细胞。通过G418筛选,对阳性克隆细胞进行十二烷基硫酸 钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western免疫印迹分析,证明 已把HBV全基因重组真核表达质粒转染肝癌细胞并获得稳定表达,建立 HBV复制状态的细胞克隆。 本实验用肝癌细胞系HepG2细胞及转染HBV DNA的肝癌细胞HKS_5 细胞进行比较研究,并设立以空载体pcDNA3转染的肝癌细胞HpcD细胞 作为照,对HBV与肝细胞凋亡的关系做进一步的研究,发现转染HBV DNA的肝癌细胞对凋亡的敏感性大为减低,提示HBV可能抑制肝细胞凋 亡。 阐明HBV与肝细胞凋亡的关系,有助于对HBV感染慢性肝病的发病 机制的进一步研究。


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