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人胚胎神经干细胞的形态学观察

周细中  
【摘要】: 神经干细胞是神经前体细胞的一种,具有自我更新、增殖、分化为神经元细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞能力的细胞。传统的观点一直认为神经元和胶质细胞是分化成熟的细胞,中枢神经系统内不存在神经干细胞。但是,自1992年Reynolds等发现成年哺乳动物脑中存在神经干细胞以来,对神经干细胞的研究越来越多,解决神经干细胞的问题不仅具有学术上的意义,而且对神经干细胞的深入了解将对神经系统疾病的治疗产生重要影响。人们虽然已经证实胚胎期的神经系统存在神经干细胞,也有人成功分离培养人胚胎神经干细胞,并对其体外生长方式、条件、形态和诱导分化等有所研究。可能是研究标本来源相对困难,至今尚未见在人胎脑发现神经干细胞的报道,至于其在胚胎发育中可能存在的规律更是无从阐明。 一般来说,在中枢神经组织中,神经干细胞是与神经元细胞和神经胶细胞同时并存的细胞类型之一,且以一定比例存在。Nestin为神经上皮细胞的特异性抗原,属第Ⅳ类中间丝,在神经板上皮细胞即开始表达,当神经细胞的迁移基本完成后Nestin的表达量开始下降,并随神经细胞分化的完成而停止表达,已被广泛应用于神经干细胞的鉴定。 本实验收集自愿于中晚期引产的孕妇自愿捐献的胎儿(均为水囊引产)若干例(n>35),男女不限。按照胎龄13W、17W、21W、25W、29W、33W、37W分为7组,每组最少5例(不包含其他周龄的胎儿),每例分别在脑室管膜下区、海马、纹状体切取3~5个厚约0.5~1cm组织块。应用Bouin液固定,常规制作石蜡切片(片厚约6μm),应用Nissl染色、HE染色和免疫细胞化学方法研究上述部位的脑细胞,在OLYMPUS BH-2显微镜下观察、照相,观察有无神经干细胞特有的神经巢蛋白(Nestin)阳性表达细胞,以证实胎脑组织中有无神经干细胞的存在并描述其形态 学特征。采用计算机图像仪对7组胎儿3个不同区域进行Nestin阳性表 达细胞形态计量分析,以探讨人胚胎神经干细胞可能存在的发育规律。 结果发现分别在 166、17w、2000、222、23W、24吁、25W、27W胎)L 的胎脑脑室管膜下区或海马或纹状体可见Nestin阳性细胞表达,且不同 胎龄不同部位Nestin阳性细胞数量不一。Nestin阳性细胞呈现两种形 态:一种细胞略呈椭圆形,体积稍大,直径为ZI土1.sthe(n二30),核染 色质蔬松,核仁二个或多个、较大,胞浆量中等;一种细胞小而圆,体 积小,直径为 18士 3.4the(n==30),核大、染色质致密均匀,卫-2个核仁, 胞浆少,且以后一种细胞多见。Nestin阳性细胞有的呈现小集落(单个 细胞构成人细胞接触紧密,间隙不清。 本实验首次证明在人胎脑存在神经干细胞,并且以两种细胞形态存 在,一种可能是神经干细胞,一种可能是神经祖细胞。由于不够细胞形 态计量所需的最小样本量尚不能依据不同胎龄不同区域对Nestin阳性 细胞进行定量分析,从而进一步说明人胚胎神经干细胞可能的发育规律。 这将是我们在下一步实验中要完成的。


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