收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

AGE 激活内皮细胞NF-κB及诱导COX-2表达的机制研究

张桂林  
【摘要】: 背景 AGE是蛋白质、脂类的氨基与糖的醛基之间发生非酶性糖化氧化反应的终产物。随着年龄增大及血糖升高,各种组织中AGE增多。AGE形成在多种疾病如糖尿病、动脉粥样硬化、阿尔海默茨病、慢性肾衰等病理过程加速,已经证实AGE蓄积和上述疾病的发生、发展及组织病变密切相关。AGE可通过多种受体而被细胞识别,其各种生物学作用可能与其特异性受体RAGE介导有关。已有的研究表明,AGE与RAGE结合可引起细胞内氧化应激,导致核转录因子(NF)-κB的激活,诱导由NF-κB所调控的各种基因的表达。在内皮细胞,AGE可引起粘附分子(ICAM-1、VACM-1)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、E-选择素等基因的表达增强。这些因子的表达可增加内皮通透性,增强炎性细胞的吸附,降低内皮细胞的正常防护功能等,故NF-κB激活引起炎症反应,导致血管内皮功能失调,可能参与AGE相关的疾病的病理进程。揭示NF-κB激活的信号通路有助于认识疾病发生发展,指导疾病的治疗。已发现,AGE引起的氧化应激,参与了NF-κB的激活。AGE引起的氧化应激与NADPH氧化酶的激活有关。NADPH氧化酶的激活可能通过两条途径,其中,佛波醇脂引起的NADPH氧化酶激活由PKC介导,而溶血卵磷脂则通过PTK介导。AGE通过何种途径激活NADPH氧化酶及激活后的NADPH氧化酶如何引起NF-κB的激活目前尚不清楚。已发现, AGE引起的ROS参与了p38 MApK的激活,对单核细胞THpl的研究 发现,p38 MApK介导了NF一KB的激活。在内皮细胞,p38州叭尹K是否 参与了AGE诱导的NF一KB的激活目前尚不清楚。 激活的NF一KB可诱导很多介导免疫和炎症信号的基因表达,环加 氧酶一2(C0X一2)是NF一KB调节的重要蛋白之一。多种因素可诱导COX一2 在内皮细胞、血管平滑肌细胞等多种细胞中的表达,引起氧化应激产生 及炎症反应,参与多种疾病的病理过程。AGE可刺激内皮细胞表达多种 炎症介质,作为炎症介质调节酶的COX一2是否参与AGE引起的病理生 理过程目前尚不清楚。 我们以AGE修饰的人血清白蛋白(AGE一HSA)作为AGE模型,研 究了AGE诱导内皮细胞NF一KB激活的信号传导机制,观察了AGE对 COX一2表达的诱导作用。 方法 我们用DRA病人关节组织研究NF一KB在体内的激活情况,然后选 择体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)及内皮细胞株(ECV304) 为靶细胞,观察AGE修饰蛋白对内皮细胞NF.KB激活及COX一2表达 的作用并对其作用机制进行探讨。 1.AGE对血管内皮细胞NF一KB的激活作用。 (1)用免疫组织化学方法检测NF一KB在DRA病人关节血管内皮细胞 中的移位激活情况。 (2)用免疫组织化学法染色检测AGE处理HUVEC后,NF一KB在胞 浆和胞核内的分布变化,用图象分析仪检测分析核浆灰度比值评价NF- KB的激活状况。 (3)AGE刺激ECV304引起的1кBa的变化用节触stern blot检测,NF~ KB的活性用EMSA检测。 2.AGE激活血管内皮细胞NF一KB的机制。 (l)用高铁细胞色素c还原法检测细胞内02一;用琉基反应试剂 TbioGI。一1测定细胞内GSH。不同浓度AGE刺激ECV304,检测细胞内 02一的产生量及GSH的含量变化。用抗氧化剂PDTC预处理ECV304,检 测AGE诱导的02一产生量,1кBQ降解及NF~KB活性改变,观察ROS 在AGE诱导的NF一KB激活中的作用。 (2)用NADPH氧化酶特异性激活抑制剂aPocynin预处理Ecv304,检 测AGE诱导的02一生成量、1кBa降解及NF一KB活性改变,观察NADPH 氧化酶在AGE诱导02一产生及NF一KB激活中的作用。 (3)用PKC抑制剂GF109203及PTK抑制剂Geulstein分别预处理 ECV304,检测AGE诱导的02一生成量改变,观察PKC和PTK在AGE 诱导NADPH氧化酶激活产生02一中的作用。 (4)用p38 MApK抑制剂SBZo358o预处理ECV304,检测A能诱导 的IKB。降解及NF一KB活性改变,探讨p38MAPK在AGE诱导的NF- KB激活中的作用。 3.AGE诱导血管内皮细胞COX一2的表达及机制。 (l)用W七stem blot检测AGE诱导的内皮细胞COX一2的表达。 (2)用NF一KB抑制剂SNSO、1仗Ba抑制剂TPCK、抗氧化剂PDTC和 NADPH氧化酶的激活抑制剂apoc师n预处理Ecv 304,EMsA检测NF- KB的活性,观察它们在AGE诱导的COX一2表达中的作用。 结果 1.AGE可引起血管内皮细胞NF.KB的激活。 (1) DRA病人关节滑膜组织中存在N下~KB的激活。免疫组化结果显 示,晚期DRA病人关节滑膜中血管内皮细胞胞核NF一K BIP“染色阳性, 浸润的单核细胞亦大部分胞核阳性染色,提示NF~KB被激活;早期DRA 病人关节滑膜中未见明显的NF一KB激活。 (2) AGE通过RAGE引起HUVECNF~KB激活。NF一KBIP65免疫组 化结果显示,正常HUVEC细胞浆阳性染色,细胞核阴性;经AGE (5O林岁ml,2h)刺激后,细胞核出现阳性染色,说明AGE诱导NF一KB 从细胞浆向细胞核移位,提示AGE引起NF.KB激活。用可溶性RAGE 与AGE(20:1)预孵育0.5h,可阻断AGE引起的NF一KB从细胞浆向 细胞核的移位。说明AGE引起的NF一KB激活是通过RAGE介导的。 (3) AGE通过诱导IKBQ降解而激活N下~KB。正常ECV304胞浆存 在较高水平1кBa,AGE(50林gl]耐)刺激0.5h,1кBa降解达50%, 2


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 刘钊;边云飞;肖传实;;晚期糖基化终产物通过氧化应激引起人骨髓间充质干细胞凋亡[J];中国动脉硬化杂志;2011年05期
2 向敏;王建梅;周成华;张雅琴;吴萍萍;;西红花酸对AGEs诱导血管内皮细胞通透性增加的抑制作用[J];中国药理学通报;2011年09期
3 程朝彬;陈建华;;应用微生物生产维生素C的研究进展[J];中国医药生物技术;2011年04期
4 凯思琳;庄稼英;;为什么一些1型糖尿病患者可以避免发生并发症[J];糖尿病天地(临床);2011年06期
5 钱伯钦;;食物中的抗癌成分[J];食品与健康;2000年04期
6 王蕾;吴和平;舒筱灿;舒旭;伍世挥;罗海;;p47phox向胞膜移位调节高糖导致的内皮细胞内活性氧升高[J];医学研究杂志;2011年07期
7 胡莹洁;李竞;;PEDF在糖尿病微血管病变中的抗氧化作用[J];医学综述;2011年13期
8 陈宗宁;胥琳琳;邵荣标;;哈夫尼亚菌生物学特性研究[J];检验医学与临床;2011年16期
9 杨元斌;徐景野;宋启发;闫鹏;;副溶血性弧菌ERIC-PCR分型技术研究[J];中国卫生检验杂志;2011年07期
10 钟林娜;黄国良;冯敏;张莹;;缬沙坦对人肾小球系膜细胞糖基化终产物受体表达的影响[J];中国应用生理学杂志;2011年03期
11 宁若冰;许昌声;柴大军;林金秀;;麝香保心丸对H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞增殖及氧化应激的影响[J];中西医结合心脑血管病杂志;2011年08期
12 杨峥;姚超永;李利华;尹雪艳;;氧化应激与高血压[J];中国动脉硬化杂志;2011年05期
13 王晓琴;王振华;张波;;过氧化氢与肿瘤发生发展的关系[J];时珍国医国药;2011年07期
14 张婕;刘光陵;;氧化低密度脂蛋白与肾小球硬化的研究进展[J];临床儿科杂志;2011年08期
15 邱亚群;石晓路;扈庆华;林一曼;李迎慧;吕东月;;深圳市淡水鱼中香港海鸥菌污染状况调查[J];热带医学杂志;2011年07期
16 张玲玉;叶鹏;;肾脏组织中T淋巴细胞的浸润可增强氧化应激,与高血压和肾脏疾病的发生发展有关[J];中华高血压杂志;2011年07期
17 徐杰伟;何艳嫦;;三种方法检测淋病奈瑟菌的结果分析[J];国际检验医学杂志;2011年12期
18 孔芹;王绪友;;从腹水中检出1株稻皮黄单胞菌[J];内蒙古中医药;2010年19期
19 王勇;;杨梅素、葛根素对高尿酸血症的影响及其意义[J];内蒙古中医药;2010年19期
20 朱丽莎;王凤玲;杜昆;艾彪;;鲍曼不动杆菌在医院环境中的分布情况调查[J];海南医学院学报;2011年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 法祥光;杨琳;;Mab HIM_(70)对Np NADPH氧化酶的调节[A];第七届全国酶学学术讨论会论文摘要集[C];2004年
2 姜宗培;余学清;;ESRD的心血管并发症和氧化应激[A];中华医学会肾脏学分会2004年年会暨第二届全国中青年肾脏病学术会议专题讲座汇编[C];2004年
3 刘尚喜;侯凡凡;张桂林;刘阳;张志辉;袁方;;NADPH氧化酶介导糖化和氧化终产物对血管细胞的生物学效应[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年
4 黎健;;NADPH氧化酶与动脉粥样硬化[A];第七届全国老年医学学术会议暨海内外华人老年医学学术会议论文汇编[C];2004年
5 张桂林;刘尚喜;邓鹤秋;张训;;晚期糖基化终产物通过氧化激活人血管内皮细胞核因子κB[A];中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2004年
6 曹琼瑶;孙璐;谭英;王白帆;文欣;席真;;D65残基簇对枯草芽孢杆菌原卟啉原氧化酶与底物及FAD相互作用的影响研究[A];第六届全国化学生物学学术会议论文摘要集[C];2009年
7 敖英;彭仁琇;杨静;汪炳华;刘英慧;但红;李颖;;CYP2家族表氧化酶在心肌缺血再灌注损伤中的表达及MS-PPOH的抑制性效应[A];第十届全国生化与分子药理学术会议论文摘要汇编[C];2007年
8 周伟;陈宝元;冯靖;李硕;万南生;张祯;郭润;;不同程度间歇低氧对大鼠内皮NADPH氧化酶与硫氧还蛋白的影响[A];中华医学会呼吸病学年会——2011(第十二次全国呼吸病学学术会议)论文汇编[C];2011年
9 李慢;韩芳;石玉秀;;PTSD大鼠蓝斑神经元细胞色素C氧化酶表达变化的实验研究[A];中国解剖学会第十一届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文汇编[C];2009年
10 宋文冲;陈超;;虎参痛风丸对小鼠黄嘌吟氧化酶的影响[A];第八届全国生化药理学术讨论会暨第七届Servier奖颁奖大会会议摘要集[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张桂林;AGE 激活内皮细胞NF-κB及诱导COX-2表达的机制研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
2 崔玉东;FMLP刺激的HL-60中[Ca~(2+)]i和某些激酶对NADPH氧化酶激活和肌动蛋白聚合的作用[D];中国人民解放军军需大学;2002年
3 刘玉欣;小胶质细胞与神经退行性疾病——机制与相应治疗药物探讨[D];大连理工大学;2004年
4 葛秀春;水稻与白叶枯病菌互作中活性氧与过敏性细胞死亡相关因子的研究[D];浙江大学;2003年
5 郭志坚;晚期糖基化终产物修饰的蛋白质对人血管内皮细胞的病理生物学作用及其机制的研究[D];第一军医大学;2002年
6 石琰景;果树GA生物合成基因——贝壳杉烯氧化酶和20-氧化酶的克隆及表达模式的初步研究[D];山东农业大学;2002年
7 郭君其;晚期糖基化终产物修饰的β_2微球蛋白对人关节滑膜细胞病理生物学作用的研究[D];第一军医大学;2001年
8 刘志军;以色治色法治疗白癜风的临床与实验研究[D];湖南中医学院;2002年
9 朱慧民;赤芍防止兔颈动脉球囊损伤术后再狭窄的实验研究[D];成都中医药大学;2003年
10 张巍;小胶质细胞和星形胶质细胞在多巴胺能神经元变性和保护中的可塑性变化[D];大连医科大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘阳;晚期糖基化终产物诱导单核细胞产生炎性细胞因子:信号传导机制[D];第一军医大学;2004年
2 毛敏;番茄红素对高脂球囊损伤兔脂质过氧化和NADPH氧化酶的影响[D];重庆医科大学;2010年
3 张林林;NADPH氧化酶在心梗后大鼠心室肌中的改变及其干预研究[D];苏州大学;2010年
4 吴怀敏;慢性间歇缺氧大鼠的血压变化及其颈动脉体中NADPH氧化酶的表达情况[D];华中科技大学;2010年
5 金海珍;姜黄煎对大鼠血管损伤后血清中NADPH氧化酶与NF-κB表达影响意义的实验研究[D];辽宁中医药大学;2011年
6 陈珉珉;氧化葡萄糖酸杆菌中两个NADPH依赖的氧化还原酶基因的克隆表达及其酶学性质分析[D];华东理工大学;2010年
7 马景昕;中药乙醇提取物对豚鼠皮肤酪氨酸酶mRNA水平的影响[D];大连医科大学;2003年
8 张海云;吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)对心力衰竭过程中NADPH氧化酶亚基p22~(phox)的影响及意义[D];山西医科大学;2009年
9 姬仲;细胞色素 p22phox C242T 基因多态性与脑梗塞相关性研究[D];第一军医大学;2001年
10 苗雨晨;ABA诱导蚕豆气孔运动中H_2O_2和Ca~(2+)信号转导机制研究[D];河南大学;2002年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;生活饮食需注意[N];保健时报;2005年
2 李桂兰;焯菜别忘加点油[N];大众科技报;2004年
3 黎彬;相洪琴;抗癌研究不断求解[N];中国医药报;2005年
4 蒲昭和;冬季饮红茶 护心又养胃[N];中国医药报;2008年
5 陆志城;NSCLC治疗燃点新希望[N];医药经济报;2005年
6 陆志城;厄罗替尼片[N];医药经济报;2005年
7 ;吉非替尼:对东方人群情有独钟[N];医药经济报;2005年
8 玉花;蘑菇[N];民族医药报;2000年
9 河北 副主任医师 龙安民;口服维生素C片注意事项多[N];家庭医生报;2007年
10 吕方;光合作用[N];大众科技报;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978