收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

HLA-A~*0201-肽复合物的初步构建与应用

周最明  
【摘要】: 为建立能直接检测单一表位特异性细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)的新方法—人类白细胞抗原(human histocompatibility leukocyte antigen,HLA)-Ⅰ类分子-肽四聚复合物(tetrameric complex),采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别从细胞株Raji和CIR/A0201克隆了HLA-A~*0201分子的轻链(β2微球蛋白,β2m)与重链基因;通过PCR法将一段由15个氨基酸组成的可生物素化序列加在重链的第275位氨基酸的羧基末端,构建了重链-BirA酶底物肽(substrate peptide for BirA-dependent biotinylation,BSP)重组基因,以增强HLA-A*0201-肽复合物与T细胞受体的亲和力,并便于生物素-亲和素进行标记。β2m与重链-BSP基因分别通过酶切位点Nde I/sap I和XbaI/Sap I与表达质粒pTYB1进行基因重组并测序证实,在IPTG诱导下,β2m-标签蛋白、重链-BSP-标签蛋白融合基因在大肠杆菌ER2566中,以包涵体形式获得高效、稳定表达。经DTT诱导切割下标签蛋白后得到纯化的β2m与重链-BSP多肽,它们不带有除本身结构以外的氨基酸残基,在体外复合实验中能够、且只能够与相应表位(如HBcAg18-27)形成稳定复合物。 同时结合T细胞表位的计算机预测分析,利用纯化的β2m与重链-BSP多肽只能够与相应表位形成稳定复合物的特点,初步证明乙型肝炎病毒(HBV)C区热点变异S87G和/或I97L对HLA-A*0201限制性CTL表位的形成没有影响。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 袁志波;;老年高血压患者血尿β_2微球蛋白变化及其在肾损害中的意义[J];长江大学学报(自科版)医学卷;2009年03期
2 吴珺,郝友华,丁红晖,龚非力,杨东亮;可生物素化sH-2D~d-HBs复合物的构建及鉴定[J];医学分子生物学杂志;2004年03期
3 韦美发;β_2微球蛋白检测对原发性高血压早期肾功能损害的诊断价值[J];右江医学;2005年04期
4 张耀祖;;血清CysC作为肾小球滤过率指标在慢性肾功能衰竭中的意义[J];现代检验医学杂志;2005年06期
5 苏晓燕;黄湖辉;李劲高;宛霞;;血液透析与透析滤过对中小分子物质清除的比较[J];岭南急诊医学杂志;2006年05期
6 沈璟璟;钟璐;陈芳源;欧阳仁荣;;血清乳酸脱氢酶和β_2微球蛋白对急性髓细胞白血病的预后价值[J];上海交通大学学报(医学版);2007年04期
7 崔冬生;顾平;王彦永;刘力;耿媛;郭记宏;;帕金森病患者血、尿β_2微球蛋白变化[J];临床荟萃;2007年17期
8 吴洁;张连生;柴晔;宋飞雪;吴重阳;曾鹏云;玲玲;刘瑛;;β_2微球蛋白抑制非霍奇金淋巴瘤患者树突状细胞成熟和功能的研究[J];临床肿瘤学杂志;2009年02期
9 吴音;冷青;季征;张桂敏;马清君;郑芳;宋扬;;乳酸脱氢酶、β_2微球蛋白在急性白血病中的临床意义[J];中国医疗前沿;2011年03期
10 况小红;童浩;贾霖;;血清β2-微球蛋白和C-反应蛋白水平检测在多发性骨髓瘤患者诊断、疗效监测和预后判断中的临床意义[J];四川医学;2011年03期
11 袁华敏;李毅刚;丁献山;;尿β_2MG、RBP水平与重金属中毒分析[J];实用预防医学;2011年05期
12 周最明,郭亚兵,王战会,骆抗先,侯金林;人β2微球蛋白基因在大肠杆菌中的稳定、高效表达[J];第一军医大学学报;2002年11期
13 艾红梅;陈克军;;痕迹蛋白和β_2-微球蛋白对早期糖尿病肾病的诊断价值[J];检验医学与临床;2008年07期
14 田一娟;;β_2微球蛋白免疫比浊法在日立全自动生化分析仪上的应用[J];国际医药卫生导报;2009年24期
15 田卫东;崔征;杨志娜;宋明辉;;尿β_2微球蛋白在糖尿病中的诊断价值[J];现代中西医结合杂志;2010年34期
16 李仙丽;冯显红;姚爱军;徐建良;;血清胱抑素C与β_2微球蛋白在糖尿病肾病早期诊断中的价值[J];检验医学与临床;2011年07期
17 陈霄峰;林明增;陈文芬;杨清宇;;急性白血病患者血乳酸脱氢酶、β_2微球蛋白变化的临床意义[J];中国临床保健杂志;2007年02期
18 孙亦兵;;组合型人工肾对慢性肾衰患者血清多胎类毒素清除效果观察[J];河北北方学院学报(医学版);2007年06期
19 邓正辉;李龙平;王新华;周忠;;多发性骨髓瘤患者血清β_2微球蛋白和高敏C反应蛋白检测的临床意义[J];中国医疗前沿;2008年06期
20 曾奇斌,李化云;50岁以下糖尿病、高血压病、冠心病患者β_2微球蛋白测定及其意义[J];南华大学学报(医学版);2001年01期
中国重要会议论文全文数据库 前9条
1 翁秀芳;陈浩;吴雄文;梁智辉;韩军艳;黄亚非;龚非力;;可溶性HLA-A2-肽复合物的体外折叠与生物素化[A];湖北省暨武汉市免疫学会第八届学术会议论文集[C];2003年
2 王小红;张桂梅;冯作化;;可溶性PD-1促进HSP70-肽复合物抗肿瘤效应的研究[A];湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会论文摘要汇编[C];2004年
3 徐小红;杨磊;彭春雷;宋诸臣;魏金芝;丛智荣;;LDH,β_2-MG及CA125测定对非霍奇金淋巴瘤病情及预后判断的价值[A];第三届中国肿瘤内科大会教育集暨论文集[C];2009年
4 孙玉静;杨守京;刘彦仿;赵君;;汉坦病毒感染诱导乳鼠脑组织HSP表达并与病毒抗原结合形成HSP-病毒抗原肽复合物[A];西部大开发 科教先行与可持续发展——中国科协2000年学术年会文集[C];2000年
5 刘恒国;罗南萍;;血清THP、β2-MG与高脂血症的关系[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年
6 王小红;张桂梅;冯作化;;B7-1/B7-H1等共刺激分子在特异性抗肿瘤免疫应答中的表达效应研究[A];湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会论文摘要汇编[C];2004年
7 严海红;李云生;罗筱云;;腹膜透析以及联合间断性血液透析滤过对血清β2微球蛋白的清除作用[A];2008年浙江省肾脏病学术年会论文汇编[C];2008年
8 陈洪涛;张桂梅;张慧;冯作化;;Hsp70-肿瘤抗原肽复合物防治小鼠黑色素瘤B16肺转移的作用[A];湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会论文摘要汇编[C];2004年
9 吴延庆;邹斌;程晓曙;吴清华;周月英;;活性氧在一氧化氮缺乏所致高血压肾损害中的作用[A];中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 周最明;HLA-A~*0201-肽复合物的初步构建与应用[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
2 刘杏娥;pcDNA3.1/HSP70-MAGE-3融合DNA疫苗诱导特异性抗肿瘤免疫应答的实验研究[D];浙江大学;2004年
3 汤宇;混合HSPs/肽复合物疫苗免疫治疗小鼠内瘤的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 高诗娟;异种HSP_(70)及异种HSP_(70)-肿瘤抗原复合物对γδT细胞的活化作用[D];大连医科大学;2003年
2 刘慧敏;LD、β-2-M、CA125在非霍奇金淋巴瘤中的临床意义[D];新疆医科大学;2008年
3 张劲;截短型重组蛋白HLA-G1的原核表达纯化和共复性研究[D];西北农林科技大学;2006年
4 傅强;慢性肾衰竭微炎症状态检测及其临床意义[D];吉林大学;2009年
5 魏瑜;复方黄连胶囊对早期糖尿病肾病大鼠肾病变的防治作用研究[D];安徽医科大学;2008年
6 邓建;HIFU治疗后肿瘤抗原对树突状细胞的活化及其抗肿瘤效应[D];重庆医科大学;2004年
7 高勇;糖尿病大鼠早期尿白蛋白、β2微球蛋白及肾脏基质金属蛋白酶活性研究[D];吉林大学;2004年
8 冯军;HIFU治疗肿瘤后树突状细胞疫苗诱导的特异性抗肿瘤效应[D];重庆医科大学;2004年
9 柴国林;Hca-F榄香稀复合瘤苗抗原—卡介苗热休克蛋白复合物(H_(TA)-HSP70_(BCG))对小鼠树突状细胞的活化作用[D];大连医科大学;2003年
10 张颖;HIFU治疗肿瘤后局部HSP70的表达及其诱导的特异性抗肿瘤效应[D];重庆医科大学;2004年
中国重要报纸全文数据库 前5条
1 罗刚;构建基因文库解析病毒密码[N];健康报;2004年
2 高春东;高血压患者为什么易发生肾损害?[N];中国中医药报;2003年
3 记者冯国梧通讯员李运红;两种疫苗可治疗恶性肿瘤[N];科技日报;2002年
4 徐晓宁 李运红;特异性肽疫苗将成杀手锏[N];健康报;2002年
5 梅英;大环内酯类药物有抗肿瘤作用[N];中国医药报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978