收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

脊髓损伤后一氧化氮合酶的表达特征及其反义核酸的应用研究

张新宇  
【摘要】: 【研究背景】选择性地调节与SCI发生、发展相关的特异的靶分子是发现SCI治疗新方法的基础。NOS的不同表达水平与SCI继发性损伤的程度密切相关,已有研究用不同的抑制剂改变NOS的表达水平可以达到抑制SCI继发性损伤的作用,因此,NOS可以被认为是可以用于干预治疗SCI的靶分子。当前,多种动物种属的多种组织中的NOS基因已被确定,并可做为对多种相关疾病治疗的靶基因,为从基因水平进行治疗提供了可能。反义寡脱氧核苷酸可以特异地抑制靶基因的表达。 【目的】通过研究不同类型的NOS在损伤后动物脊髓组织中的分布、表达和信号转导通路的改变情况,评价不同类型NOS在脊髓继发性损伤反应中的作用;应用与NOS对应的反义寡脱氧核苷酸(ASODN)改变脊髓损伤后NOS基因的表达,观察对脊髓损伤后神经功能恢复的影响,对脊髓损伤的发生机理和治疗途径做初步的探讨。 【方法】1、制备大鼠脊髓压迫伤模型,分别于大鼠脊髓压迫伤后6、12、24、48、72h等5个时间点,用免疫组织化学和图像分析的方法判断脊髓损伤后不同类型NOS在大鼠脊髓组织中的分布和表达情况,确定何种与脊髓损伤后的继发性损伤有关,并用透射电镜观察细胞凋亡的形态改变;2、p38MAPK信号转导途径在损伤后的改变情况通过信号转导特异性抑制剂SB203580并结合Western blotting方法进行检测;3、根据前两部分的结论,应用与脊髓损伤相关的NOS脂质体介导的反义寡脱氧核苷酸进行动物体内治疗,通过RT-PCR技术检测NOS-mRNA的改变,用分光光度法测定组织中NO含量和NOS活性,观察脊髓损伤后神经功能的恢复情况:包括动物行为学、神经电生理、MRI和病理组织学等指标,伤段脊髓组织细胞凋亡的改变程度通过流式细胞技术进行研究,最后推测NOS在脊髓损伤中的表达特征、作用机理和可能的治疗途径。 【结果】1、免疫组化阳性部位主要分布在脊髓的前角和中央管周围的大多角形细胞以及后角的小圆细胞,脊髓损伤前、后脊髓组织中均有nNOS的持续表达;iNOS在损伤后开始出现,并迅速增加,至12-48h达到高峰,以后开始下降;eNOS损伤前后基本没有明确表达;SCI后可 以看到凋亡细胞的超微结构改变。2、SCI后p38MAPK存在明显的变化 规律:3Omin时出现明显表达上调,6h达到高峰,以后逐渐下降;应用 p38特异性抑制剂SBZo358o可以明显抑制p38MApK活性、NoS活性和 NO含量,并减少细胞凋亡的发生率印0.05)。3、应用AsODN一iNOS、 ASODN一nNOS可以抑制相应酶的表达应用,并可以降低组织中的NOS 活性和NO含量,ASODN一iNOS可以非常明显地抑制损伤后细胞凋亡 的发生印0.01),ASODN一nNOS的上述抑制作用较弱印0.05)。对神经传 导功能的恢复前者优于后者。 【结论】脊髓损伤后脊髓组织中主要表达iNOS和nNOS,并存在 P38MAPK信号转导通路改变和细胞凋亡,脊髓损伤后应用NoS反义核 酸可以使脊髓损伤后神经功能得到改善,iNOS活性变化对脊髓损伤的恢 复更具决定作用,其作用与对细胞凋亡的抑制有关。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 彭志平;蒋明东;尹晓玲;文明;李少林;;反义寡脱氧核苷酸抑制多药耐药基因mdr1表达并逆转耐药肝癌细胞的体外试验研究[J];中国药房;2011年33期
2 李春海;宋树英;桑翠玲;李文慧;尹俊;;PAMAM-D纳米载体介导TFinAODN防治心肌缺血再灌注脂质过氧化损伤的实验研究[J];河北医药;2011年13期
3 罗刚;董俊英;陈谦明;李秉琦;;CyclinD1 mRNA反义寡脱氧核苷酸导入对颊癌细胞株BcaCD885生物学行为的影响[J];广东牙病防治;2011年07期
4 李春海;桑翠玲;宋树英;周万先;尹俊;李文慧;;聚酰胺—胺型树枝状高聚物纳米载体介导的组织因子反义寡脱氧核苷酸防治心肌缺血再灌注损伤机制的初步研究[J];疑难病杂志;2011年07期
5 罗秀玲;龚小英;丁金荣;曾科思;;不同清洗方法对医疗器械清洗效果的研究[J];护理实践与研究;2011年14期
6 陈菲菲;林灵;王以光;周红霞;陶佩珍;赫卫清;王勇;;海洋细菌中活性化合物的筛选策略(英文)[J];中国抗生素杂志;2011年05期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
11 ;[J];;年期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 高官聚;翟丙祥;张辉;李新霞;朱旭红;;联合酶学检查对胸(腹)腔积液诊断的评估[A];中国防痨协会全国学术会议大会学术报告[C];2001年
2 叶姜瑜;王希;;原核生物透明质酸合酶(Hyaluronan Synthase)探询[A];重庆市遗传学会第一届学术年会暨纪念孟德尔规律再发现100周年学术讨论会论文集[C];2000年
3 王永向;高亮;纪宗正;;针对于K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸对人胰腺癌细胞株PC-2作用的研究[A];2005年浙江省肿瘤学术会议全国大肠癌转移与复发的诊治研讨会学术论文集[C];2005年
4 陈伟红;汪明春;杜新;刘焕勋;卓家才;李明;古庆利;汪鹏程;蔡力生;;STAT5反义寡脱氧核苷酸对CML原代细胞增殖的抑制作用[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年
5 金海燕;卢仲毅;匡凤梧;许峰;王兴勇;;急性肺损伤中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、内皮素(ET)和一氧化氮合酶表达的研究[A];2004年全国危重病急救医学学术会议论文集[C];2004年
6 楚向丽;章茜;王书春;王雨若;;GABA受体激动剂消除NO合酶抑制剂对大鼠睡/醒周期的影响[A];中国生理学会第21届全国代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2002年
7 李丽帆;;胱硫醚β—合酶基因多态性与冠心病的关系[A];广西生物化学与分子生物学会第六次学术研讨会论文摘要[C];2003年
8 李积胜;杨芳;杨烽;;急性给锂小鼠大脑皮层一氧化氮合酶阳性神经元的时程变化[A];中国微量元素科学研究会学术研讨会论文集[C];2004年
9 王永向;高亮;纪宗正;南克俊;;针对于K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸对人胰腺癌细胞株PC-2作用的研究[A];中华医学会第10届全国胰腺外科学术研讨会论文汇编[C];2004年
10 李双;朱长虹;;反义寡脱氧核苷酸及卵泡刺激素对卵巢粘液性囊腺癌原代细胞的增殖细胞核抗原表达的影响[A];湖北省性学会第二届第二次学术年会论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张新宇;脊髓损伤后一氧化氮合酶的表达特征及其反义核酸的应用研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
2 张靓;运动与动脉粥样硬化:一氧化氮的作用及机制研究[D];华东师范大学;2003年
3 孙炜;一氧化氮合酶抑制剂对关节软骨修复组织的影响[D];第一军医大学;2001年
4 陶美凤;两个Ⅰ型聚酮合酶功能结构域在异源宿主的表达[D];华中农业大学;1999年
5 王宏光;反义寡脱氧核苷酸抑制肝癌细胞VEGF的表达及肝癌细胞中VEGF的自分泌机制[D];第四军医大学;2002年
6 范延红;iNOS基因表达调控鼠CFs增殖和胶原合成的作用及其信号转导机制的研究[D];第四军医大学;2002年
7 郑刚;α1,4半乳糖糖基转移酶反义寡脱氧核苷酸治疗卵巢癌的实验研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
8 张友磊;乙酰肝素酶反义寡脱氧核苷酸对乳腺癌侵袭转移和血管生成的抑制作用[D];第二军医大学;2003年
9 邢三丽;神经细胞表面ATP合酶的鉴定和功能研究[D];复旦大学;2008年
10 徐标;糖尿病血管并发症机制的研究[D];南京医科大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 潘昊;膀胱移行细胞癌中一氧化氮合酶的表达及其与微血管密度关系的研究[D];浙江大学;2001年
2 刘雁鸣;口腔癌中一氧化氮合酶表达与微血管形成关系的研究[D];浙江大学;2001年
3 孙家强;鼻息肉一氧化氮合酶表达及其意义探讨[D];安徽医科大学;2002年
4 范晓晨;诱导型一氧化氮合酶在病毒性心肌炎发病机制中作用的实验研究[D];安徽医科大学;2001年
5 郑峰;重组人诱导型一氧化氮合酶在V_79细胞中的稳定表达及其对平滑肌细胞增殖的影响[D];第三军医大学;2001年
6 严春花;一氧化氮合酶抑制剂对小鼠肺癌血管形成的影响[D];延边大学;2003年
7 李世林;生长激素对髂内动脉结扎大鼠勃起功能影响的实验研究[D];武汉大学;2004年
8 林青;曲马多对福尔马林致痛大鼠脊髓Fos蛋白、一氧化氮合酶、生长抑素的影响[D];福建医科大学;2002年
9 秦杰;单侧输尿管梗阻后大鼠肾脏诱导型一氧化氮合酶的表达及其意义[D];浙江大学;2003年
10 李隆钢;诱导型一氧化氮合酶,硝基酷氨酸在胃癌组织中表达与细胞凋亡的关系[D];中国医科大学;2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 工程师 刘建军;谈谈酶制剂在饲料中的应用[N];河北科技报(农村版);2000年
2 范晓艳;胰腺炎发病谁作怪?[N];医药经济报;2003年
3 许丽霞;福建两项最新食品科研成果通过鉴定[N];中国食品质量报;2005年
4 邢翠红;饮茶防秋燥瘙痒[N];医药养生保健报;2007年
5 由广旭;周琴;李卫平等;乌苏里藜芦碱对脑损伤有保护作用[N];中国医药报;2004年
6 河北大学生命科学学院 马利;饲用复合酶在畜禽上的应用[N];河北科技报;2004年
7 记者 靖九江;H2S在肾血管性高血压中发挥作用[N];中国医药报;2006年
8 万同己;一氧化氮与消化系统癌症[N];中国医药报;2004年
9 四川农业大学 李梦云 陈代文;黄曲霉毒素的毒害及残留[N];中国畜牧报;2004年
10 美国Promega公司北京办事处 戴钢;服务新药开发:PROMEGA公司独树一帜[N];中国高新技术产业导报;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978