骨髓间充质干细胞的相关研究

【摘要】： [目的] 骨缺损是骨科临床的难题之一，目前的治疗方法有自体骨移植、同种异体骨移植、生物材料充填等，治疗效果与模式都不理想。骨组织工程的研究为解决这一问题提供了新的思路，是近年研究的热点之一。 自骨髓间充质干细胞被发现，因其自身所具有的特殊性而日益受到人们的关注。首先，它是有多向分化潜能的原始骨髓细胞，在特定的条件下可向成骨细胞、软骨细胞、肌腱、脂肪细胞、骨髓基质细胞、血管内皮细胞及神经星状细胞分化，且易于获得及扩增，是重要的组织工程种子细胞。其次，骨髓间充质干细胞有其独特的细胞增殖分裂模式，使外源基因易于导入和表达，因此，骨髓间充质干细胞是潜在的基因治疗靶细胞。然而，目前骨髓间充质干细胞分离纯化鉴定及体外培养的方法尚没有一致方案，有些方法相当繁琐，不利于MSCs培养的标准化及推广。为此，我们对人骨髓间充质干细胞的分离、纯化、鉴定及体外培养的方法进行了探索，并随之与本室研制的PLGA支架材料进行复合研究，了解骨髓间充质干细胞与生物材料的亲合力，探讨其作为种子细胞的可行性。 并拟对骨髓间充质干细胞进行基因改造。拟转入骨形态发生蛋白7cDNA，从而得到骨组织工程的新型种子细胞。因此，我们进行含BMP7腺病毒穿梭质粒的构建。 同时，在骨髓间充质干细胞水平，从药理角度进行研究，了解盐酸四环素对骨髓间充质干细胞增殖的影响。开拓影响及干预骨发育的细胞因素的研究，从而探讨临床药物对骨发育的影响机制。 [方法] 取5月胎儿肱骨和股骨，从肱骨和股骨骨髓中分离出骨髓间充质干细胞： 1．与PLGA支架复合的形态学观察。复合1周后，行扫描电镜观察。 2.盐酸四环素对胎儿骨髓间充质干细胞的增殖的影响。将盐酸四环素分 别加入胎儿骨髓间充质干细胞和293细胞培养基中，2d后测它们的MTT值， 比较它们之间的的统计学差异。 3.含B侧田7腺病毒载体的构建。取含重组人骨形态发生蛋白7的伴D不，。 质粒进行酶切，将之连于钾如般扰Mv上。 【结果】 1.伯MSCs接种于PLGA培养1周后，可见细胞成长梭形，随材料表面 特征一定方向排列，材料并出现部分降解，细胞表面微绒毛丰富，有多个细 长突起，细胞之间有交互连接 2.培养液中加入四环素的骨髓间充质干细胞和293细胞的增殖有统计学 上的差异。 3.将B州田7自伴D不，。切下后，连接于伸血侧沈MV上后，行单酶切及 双酶切鉴定后，得到理想的电泳带。 【结论】 1.未经诱导分化的伯Mscs与PLGA支架复合生长良好，它不仅具有良 好的增殖能力，而且具备很好的支架亲合和生长能力，是骨组织工程较为理 想的种子细胞。 2.低温高压法制作的PLGA支架材料复合MSCs用于骨缺损修复具有可 行性。 3.盐酸四环素对骨髓间充质干细胞的自身增殖有负影响。 4.BMp7腺病毒载体的穿梭质粒构建成功。