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重组小鼠gAcrp30的基因克隆、表达及生物活性研究

王乐媛  
【摘要】: 脂肪细胞补体相关蛋白gAcrp30是已分化的脂肪细胞特异分泌的蛋白质因子,主要作用是促进脂肪细胞新成代谢,分子量25kDa,有文献报导,无论是从血浆中提取的,还是利用基因工程手段从大肠杆菌中表达制备的人不含信号肽的Acrp30——gAcrp30,均能显著地诱导小鼠肌体内游离脂肪酸在肌肉中氧化,并相应降低体重—从而表明gAcrp30是人们梦寐以求的一类激素之一,其作用机理是因为它能将信号从脂肪组织传导至肌肉。促使肌肉组织大量燃烧脂肪产生能量从而减少脂肪的储存。而传统的减肥的方法有两种:一、使肠壁的吸收减少,通过节食来完成,这样就会影响到肠壁正常物质的吸收;二、过加大运动量的方法,并在运动后少量进食,这对于一些患糖尿病和心脏病的病人无疑是不可行的,况且肥胖病人有大多数罹患这些疾病。如何解决这些问题,gAcrp30可为一种好的方法。 本研究通过RT-PCR技术从小鼠脂肪细胞中克隆了不含信号肽序列的全长小鼠gAcrp30 cDNA,序列测定表明本研究已克隆的gAcrp30序列同国外报道的序列一致。将不含信号肽序列的小鼠Acrp30基因克隆至原核表达载体pET-21a中,构建成重组原核表达质粒pET-21a/gAcrp30。将该重组质粒导入宿主菌BL21,经IPTG诱导后获得高水平表达(目标蛋白表达>20%)。经SDS-PACE分析表明:表达产物主要为不可溶性的蛋白质聚集体-包涵体。将已收集的菌体经超声破碎后,2mol/L尿素,1%吐温-80洗涤后,离心收集包涵体。该包涵体经8mol/L尿素溶解变性后,采用透析和稀释二种复性方法进行复性比较,复性样品经阴离子交换层析Q—Sepherose Fast Flow和Q-Sepherose high performance(h.p.)二步阴离子交换层析得到单一条带,分子量为25KDa。免疫印迹结果表明,通过表达和纯化所获得的蛋白为小鼠gAcrp30。上述研究结果将为进一步研究小鼠gAcrp30的理化性质及人gAcrp30的研究奠定基础。 第一军医大学硕1..论文(王乐媛)小鼠gAc甲30的基因克隆、表达及生物活性研究 肥胖症问题不仅在发达国家十分普遍,在发展中国家也是不可忽视 的问题。亚洲人脂肪主要堆积在腹部。有肥胖症的人最容易患糖尿病、 心脏病、高血压及中风疾病,防止和减少体重超重方法就是不要过量 饮食,加强体育运动。中国在国民经济稳步增长的10年间从1990年 到2000年,大中城市中身体超重和患肥胖症人数从9.7%增加到14.9 %,乡村从6.8%增加到8.4%,gAcrp30的开发成功,对我国的肥 胖症患者将是一个福音,从而间接的减少由肥胖而引发的搪尿病和高 血压病,对提高整体的国民健康水平将具有十分重要的意义。


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