收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

小鼠STO细胞植入无免疫抑制成年大鼠肝脏的异种移植研究

张明军  
【摘要】:目的:我们将建株于正常成年“大鼠”肝脏的肝始祖细胞(LPCs)3(8)#21-EGFP经脾脏植入二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)缺失的德国Fischer 344实验大鼠肝内,以诱导并探明LPCs在体内多向分化的潜能。 方法:该实验动物模型的一个最大益处是:DPPⅣ阳性的供体细胞很容易在受体DPPⅣ阴性的背景下被检测出来。理论上受体大鼠DPPⅣ的缺失发生在蛋白质翻译阶段,因为在转录阶段仍可以检测到正常的3.3及5.6-kb信使RNA。为了追踪的便利,我们还同时将增强绿色荧光蛋白(EGFP)与新霉素抗性基因(neo~R)通过逆转录病毒导入供体细胞。 结果:初期的体外实验表明,LPCs在特定的诱导培养条件下,能够向肝系分化并表现成熟肝脏细胞与胆管细胞某些特性。然而,当我们成功地进行了第一轮体内实验,在受体肝脏内找到了存活并已向肝系分化的LPCs的同时,开始发现供体“大鼠”3(8)#21-EGFP细胞核型异常,并与培养体系中源于“小鼠”的滋养细胞STO核型相似(STO建株于小鼠胚胎细胞)。此后,经过一系列大鼠及小鼠特异性基因分析,确认该株“大鼠”LPCs细胞实际上来源于经γ射线照射后存活的“小鼠”滋养细胞STO。因此,为了消除γ射线照射,EGFP及neo~R逆转录外源DNA可能带来的实验误差,在第二轮体内实验中,我们直接将未经γ射线照射,未经基因工程改造的“小鼠”STO细胞经脾脏植入DPPⅣ缺失的德国Fischer 344“大鼠”肝内。与第一轮体内实验相似,第二轮实验亦未使用任何免疫抑制剂。结果发现异种植入物STO细胞经脾快速入肝;四周后,1%的入肝细胞长入肝实质,形成胆小管,并共表达DPPⅣ,葡萄糖六磷酸酶(G-6-Pase)及胆小管ATP酶(ATPase)。在整个12周的实验阶段中,我们在不同的时间点抽取标本,标本经过PCR,RT-PCR,SOUTHERN印记杂交及cDNA序列分析,均发现“小鼠”特异性的线粒体细胞色素C氧化酶1(COX1)DNA及白蛋白信使RNA,证实了异种移植物的存活及分化。 为了排除受体DPPIV缺失可能带来的实验误差,在第三轮体内实验 中,3(8)# 21一EGFP及sTo以相同的实验方法在未使用免疫抑制剂的情 况下植入DPPIv阳性野生型Fiseher 344大鼠。4一9周后,同样检测到 “小鼠”CaY7 DNA。在所有的体内实验中,空白对照标本及供体细 胞DNA植入标本均为阴性。 结论:基于(1)供体细胞在体外培养中,于对数生长初期不表 达,而在对数生长后期表达肝细胞标志物DPPIv与G一6一Pase;(2) 供体细胞不表达小鼠主要组织相容性(MHc)I类H一ZKQ,H- ZDQ/LQ,H类I一A抗原;不表达大鼠MHcl类RT IA抗原;且经Y干扰 素诱导后亦未表达MHC抗原;(3)上述体内实验结果;我们认为: “小鼠”STO细胞不仅能够越过异种MHC障碍,在Fiseher 344大鼠 肝脏内存活;而且具有向肝细胞系方向分化的能力。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 黄平,姚榛祥,魏正强,杨光伦,杜成友,董蒲江;一氧化氮(NO)合酶和NO在延迟性异种移植排斥反应中的作用[J];中华实验外科杂志;2001年05期
2 沈九红;延长幼年狒狒原位心脏异种移植的存活时间[J];国外医学.心血管疾病分册;1994年04期
3 晓林;生命的延续——重组人体[J];知识就是力量;1999年11期
4 张雷,单世光,崔云甫,孙岩,齐忠权;FK506与来氟米特预防异种胰岛移植排斥反应的效果[J];中华实验外科杂志;2003年05期
5 万艺;以猪为供体的异种移植[J];日本医学介绍;1995年09期
6 卞文;异种移植[J];国外科技动态;1998年08期
7 张伟;异种移植免疫排斥反应中天然抗体的研究[J];解剖与临床;2000年04期
8 邱仁宗;高新生命技术的伦理问题[J];医学与哲学;2000年11期
9 郭应禄,杨建林;肾移植的临床进展[J];中华医学信息导报;2003年03期
10 解志杰,吴军;异种移植中的排斥反应及其对策研究进展[J];中华烧伤杂志;2003年05期
11 杨勇贤;马玉媛;章金刚;;小型猪在异种移植中的应用前景[J];中国实验动物学报;2008年05期
12 李平;;血管内皮细胞在异种移植中的作用[J];国外医学情报;1996年12期
13 王祥慧,凌桂明,周佩军;第五届亚洲移植大会纪要[J];国外医学.泌尿系统分册;1998年03期
14 高倬,陈向阳,包群,徐敬,王祝仙;猪胰岛移植物制备与异种移植治疗糖尿病[J];云南医药;1999年05期
15 王坤杰,李幼平!移植工程与移植免疫实验室,杨宇如;异种移植中的移植物抗宿主病[J];中国修复重建外科杂志;2000年03期
16 刘全达;异种胰岛移植的免疫耐受诱导[J];免疫学杂志;2001年S1期
17 李志洪,黄信孚,李吉友,柯扬,杨兰桂,王永信,姚丽华,吕允威;人乳腺癌裸鼠异种移植的研究(英文)[J];Chinese Medical Journal;2002年02期
18 张建文,陈言汤,刘林嶓;辐射处理后猪软骨异种移植的实验研究[J];中国美容医学;2004年04期
19 朱珉;谢林;陈栋;陈刚;陈实;;异种移植研究刍议[J];医学与哲学(临床决策论坛版);2006年03期
20 任元鹏;;异种移植的法律问题思考[J];医学与哲学(临床决策论坛版);2007年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 童琼娟;邢晓为;叶征;黎淑娟;王维;;猪内源性逆转录病毒移植免疫抑制异种受体内跨种系感染的研究[A];中华医学会第十三届全国放射学大会论文汇编(下册)[C];2006年
2 杜晓菲;吴春福;丁世荣;;合用红参酸性多糖与匹多莫德对小鼠细胞免疫调节的协同作用[A];中国药理学会第九次全国会员代表大会暨全国药理学术会议论文集[C];2007年
3 谭雷涛;常维山;;中药对免疫抑制雏鸡淋巴细胞培养上清IL-2及淋巴细胞转化率影响的研究[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
4 张玲娟;刘杰;成子强;刁秀国;王桂花;朱国;;禽白血病病毒J亚群(ALV-J)免疫抑制特性的初步研究[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会论文集[C];2005年
5 葛以跃;张改;王勇;胡伟;谭明娟;吴江平;;弓形虫感染小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞的变化[A];中华医学会热带病与寄生虫学分会机会性感染学术研讨会论文汇编[C];2007年
6 陈俭;姜中其;唐一鸣;金良;王康平;;灵芝和虫草多糖对免疫抑制实验小鼠的免疫调节作用研究[A];中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会论文摘要集[C];2009年
7 欧德渊;许乐仁;田兴贵;付学志;;黄芪多糖对免疫抑制仔猪小肠肥大细胞的影响[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十五次、中国病理生理学会动物病生专业委员会第十四次学术讨论会论文集[C];2007年
8 贺喜;杨小军;张炳坤;呙于明;;日粮添加不同油脂对环孢酶素A诱导免疫抑制肉仔鸡生长性能和免疫功能的影响[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集[C];2008年
9 雷志明;阮明;邱飞婵;魏雪涛;李雪婷;贾凤兰;尚兰琴;张宝旭;;二甲基苯蒽对金属硫蛋白基因敲除小鼠免疫功能的影响[A];2003年全国免疫毒理学术交流会论文集[C];2003年
10 薛剑;袁向亮;李美星;张通通;赵燕;沈立松;;Foxp3基因在胃癌的表达及其意义[A];全国临床免疫检验研讨会暨第六届全国临床免疫学术会议论文汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张明军;小鼠STO细胞植入无免疫抑制成年大鼠肝脏的异种移植研究[D];第一军医大学;2004年
2 梁晨;干扰素-γ与骨髓间充质干细胞免疫调节协同作用机制研究[D];中国协和医科大学;2010年
3 胡鑫;两型TNF-α对荷瘤小鼠MDSC免疫抑制功能的影响[D];华中科技大学;2010年
4 唐传玲;环孢素A缓解人滋养细胞氧化应激损伤的分子机制[D];复旦大学;2012年
5 杨光伦;NF-κB信号传导途径在延迟性异种移植排斥反应中的作用[D];重庆医科大学;2003年
6 程琰;14-3-3 tau蛋白对滋养细胞生物学行为影响的研究[D];复旦大学;2009年
7 孟强;天然抗体、补体及c-myc基因在异种移植超急性排斥反应中的作用[D];中国协和医科大学;1999年
8 刘浩;类纤维蛋白原蛋白在异种移植中的作用[D];中国医科大学;2002年
9 关兆杰;抗凝治疗对延迟性异种移植排斥反应的作用[D];汕头大学;2003年
10 李志伟;人肝门部胆管癌裸鼠肝门移植模型的建立及CD、HSV-tk双自杀基因治疗实验研究[D];山东大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 聂华;胎盘部位滋养细胞肿瘤一例[D];武汉大学;2004年
2 胡寒;环孢素A对体外培养的正常人早孕滋养细胞白细胞介素10和γ-干扰素分泌的影响[D];四川大学;2003年
3 薛丽荣;CLEC-2与podoplanin在人早孕期母—胎界面的表达与调控[D];苏州大学;2010年
4 孙谕;调节性T细胞在再生障碍性贫血发病机制中的作用[D];苏州大学;2007年
5 胡菁;甘草系列多糖的制备及生物活性研究[D];华中科技大学;2007年
6 陈花;CTLA4-Ig对同种肝细胞移植大鼠T细胞亚群的影响[D];山西医科大学;2005年
7 王云;低氧诱导因子-1α表达与妊娠期高血压疾病滋养细胞侵袭关系的初步研究[D];第三军医大学;2005年
8 王宗权;苏木免疫抑制活性部位筛选及化学成分的研究[D];黑龙江中医药大学;2006年
9 赵明;苏木乙酸乙酯提取物对同种异位心脏移植大鼠外周血中IL-6水平的影响[D];黑龙江中医药大学;2006年
10 潘爱春;食管癌患者围手术期外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞变化及其影响因素的研究[D];山东大学;2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;猪免疫抑制性疾病的病因与防控对策[N];中国畜牧兽医报;2008年
2 山东农业大学 朱瑞良教授;家禽免疫抑制性疾病[N];中国畜牧兽医报;2005年
3 ;猪免疫抑制性疾病的病因与防控对策[N];中国畜牧兽医报;2008年
4 广西大学 韦平 阳秀英;家禽免疫抑制性疾病的危害及其防制策略[N];中国畜牧兽医报;2006年
5 蔡志玲;北京协和医院 采取“集束化策略”改善免疫抑制人群重症感染的预后[N];中国医药报;2009年
6 ;夏季怎样提高养鸡效益[N];中国畜牧兽医报;2008年
7 ;夏季怎样提高养鸡效益[N];中国畜牧兽医报;2008年
8 薛汶;鸡群免疫抑制的表现[N];陕西科技报;2009年
9 广东省农科院 黄忠 博士;猪群健康生产要靠什么?[N];中国畜牧兽医报;2006年
10 记者 龙军 特约记者 禹爱华;《长沙宣言》将推动国际异种移植发展[N];光明日报;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978