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骨髓源干细胞在损伤脑组织中迁移和分化的研究

邹西峰  
【摘要】:研究证实骨髓内除造血干细胞外,还存在间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)或骨髓基质细胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs)、多潜能成体先祖细胞(Multipotent adult progenitor cells,MAPCs)和内皮细胞先祖细胞(Progenitor of endothelial cells,PECs)。因此,骨髓内的干细胞是一个混合干细胞群,目前有关文献用骨髓源干细胞(Bone Marrow-Derived Stem cells,BMDSCs)来称谓这群细胞。BMDSCs在体内能迁移并分化为造血系统细胞、骨骼肌、心肌以及肺和肝脏的上皮细胞。但对其能否迁移至正常脑组织并分化为神经胶质或神经元仍有争议。由于损伤可以增加血液“旁系细胞”在受损组织中的转分化,故本研究拟用Y染色体和绿色荧光蛋白作为细胞标记,经尾静脉同种异体移植BMDSCs。用Y染色体荧光原位杂交法检测脑损伤灶周围Y染色体阳性细胞,探讨BMDSCs进入损伤脑组织的可能性。用免疫组织化学方法确定绿色荧光蛋白阳性细胞的性质,从而判断进入损伤脑组织的BMDSCs的分化趋势。 第一部分 小鼠Y染色体探针的标记和应用 目的 标记小鼠Y染色体RNA探针,检验该探针在检测外周血涂片和脑组织切片Y染色体阳性细胞的效率。 方法 以小鼠Y染色体重复序列pY353/B cDNA为模板标记RNA探 针。以C57BL/6雌性小鼠为对照,用原位杂交法检测C57BU6雄性小鼠 外周血涂片Y染色体阳性细胞;用荧光原位杂交法检测C57BL/6雄性小 鼠脑组织切片Y染色体阳性细胞。 结果在雌性小鼠外周血涂片和脑组织切片未发现Y染色体阳性细 胞,雄性小鼠的外周血涂片100%细胞核为Y染色体阳性,雄性小鼠的 脑组织切片85.67%细胞核为Y染色体阳性。 结论在外周血涂片和脑组织切片,应用小鼠Y染色体RNA探针原 位杂交和荧光原位杂交法检测Y染色体阳性细胞有较高的灵敏度和特异 度。 关键词Y染色体;原位杂交;荧光原位杂交;骨髓源干细胞 中图分类号Q189 第二部分小鼠骨髓源千细胞向损伤脑组织迁移的可能性 目的探讨骨髓源干细胞向损伤脑组织迁移的可能性 方法按致死剂量照射C57BL/6雌性小鼠后,使之接受月龄相配雄 性小鼠的骨髓移植(B one Marrow Transplantation,BMT)。BMT后2个月 制作脑损伤模型,脑损伤后1、2、4和6周分批处死存活动物。分别在 外周血涂片和新鲜脑切片上用荧光原位杂交法检测Y染色体阳性细胞。 结果在致死剂量照射、BMT后2个月,BMT受体小鼠的外周血涂 片Y染色体阳性细胞核占所有细胞核的100%;在脑损伤后6周,损伤 病灶周围有集中分布的Y染色体阳性细胞。 结论成功制作了血系嵌合小鼠;植入的BMDSCs可以迁移至损伤 脑组织。 关键词Y染色体;原位杂交;荧光原位杂交;绿色荧光蛋白;骨髓 源干细胞;骨髓移植;脑损伤;小胶质细胞 中图分类号Q189 第三部分大鼠骨髓源干细胞在损伤脑组织中的分化趋势 目的进一步探讨迁移至损伤脑组织的BMDSCS的分化趋势。 方法将制作好的雌性sprague一Dawlcy大鼠脑损伤模型(24小时后) 经尾静脉植入GFP标记的雄性SPrague-DaWlcy大鼠的BMDSCs。在植 入后2周、4周和8周分批取脑。用CDllb和GFAP荧光免疫组织化学 方法检测GFP阳性细胞的性质。 结果在移植GFP标记的BMDSCs后1周,植入的GFP阳性BMDSCs 占外周血白细胞总数的3.53%;移植BMDSCs后4周和8周的脑损伤病 灶周围有集中分布的GFP阳性细胞,分别表达CDllb和GFAP, 结论经尾静脉成功移植了GFP标记的BMDSCs;GFP标记的 BMDScs能迁移至脑损伤病灶周围;BMDsCs能迁移至损伤脑组织并有 向小胶质细胞和星形胶质细胞分化的趋势。


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