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应用二步法预定位技术对荷人肝癌裸鼠模型进行MR免疫成像的实验研究

刘岘  
【摘要】:目的 通过制备生物素化抗人肝癌单克隆抗体(HAb18-Bt)和Gd-DTPA标记的链霉亲和素(Gd-DTPA-SA),探讨Gd~(+3)标记DTPA-链霉亲和素的最佳反应条件,并利用生物素-亲和素系统的靶向定位效应和生物放大作用,提高MR分子免疫成像的敏感性。 材料和方法 1.生物素化单克隆抗体的制备 将纯化的抗人肝癌单克隆抗体HAb18置于碳酸氢盐缓冲液中,4℃透析过夜,并用该缓冲液调节抗体浓度至1mg/ml。活性生物素酯NHS-LC-Biotin溶于无水二甲亚砜(DMSO)中,按生物素酯:抗体的摩尔比为30∶1进行反应,室温下持续轻轻摇晃1小时,使抗体与生物素充分交联。 采用HABA/Avidin试剂盒、直线外推法对抗体的生物素化程度及其活性进行测定。 2.选择不同pH值的碳酸氢钠反应体系(pH值分别为5、6、7、8)及不同DTPA-SA摩尔比率(1000、500、200、100),测定不同反应条件下的每个链霉亲和素分子所结合的Gd~(+3)数目及Gd-DTPA-链霉亲和素的结合活性。 3.动物实验部分 20只荷人肝细胞癌裸鼠,分为三组,其中二步法预定位组8只,先 静脉注射生物素化单克隆杭体600雌,24小时后腹腔注射8即gAV,30 分钟后再静脉给予Gd一DTPA一SA;单克隆杭体一Gd-DTRA组6只,经尾静 脉注射Gd一DTPA一HAb18; Gd一DTPA对照组6只,静脉注射Gd一DTPA。 对实验动物行MR扫描,汉lJ量SE TIWI平扫及增强后10,、30,、60‘、3h、 6h、12h、24h、48h图像内肿瘤、肝脏及肌肉的信号强度,绘制时间一信 号强度曲线,并计算强化率、瘤/非瘤组织信号强度比及瘤组织与背景的 对比度噪声比. 4.MR扫描完成后,腹腔注射过量戊巴比妥钠处死实验动物,将肿 瘤、肝脏、’肾脏、脾脏等组织取出冷冻,按照几mat方法,选择342.249nm 的Gd原子发射光谱,进行电感藕合高频等离子体发射光谱(ICP一AEs) 酸消化法测量。组织对Gd的摄取量以注射对比剂剂量的百分比(%D) 表示。 结果 1.HAb18单克隆杭体经生物素化后,每个杭体分子平均可结合15 个分子的生物素,其杭体结合活性约为91%。 2.随着反应体系pH值的增高,每个链霉亲和素分子所结合的Gd+, 数目增高;当DT队一SA摩尔比率低于500时,SA一DTPA联结Gd的数 目随着DTPA一SA摩尔比的增高而增高;而当摩尔比率为1000时,则出 现下降,其中在pH 8.0 NaHCO3缓冲体系内,cDTPA与链霉亲和素的摩 尔比为500:1的条件下,每分子链霉亲和素平均结合15.6个分子的 Gd一DTPA,与其它各组有显著性差异。各实验组Gd一DTPA一SA复合物的 生物素结合活性无明显差异。 3.二步法预定位组中,肿瘤信号强度缓慢升高,在增强后第6小时, 肿瘤的强化率、肿瘤一肌肉信号比值及CNR达到最大值,与其它两组有 显著性差异。肝脏和肌肉表现为轻度强化,约在注射对比剂1小时的强 化程度最大,与平扫有差异。 注射单克隆抗体一Gd一DTPA后,肿瘤表现为缓慢轻度强化。24小时 后,肿瘤强化率达13 .5%,肿瘤一肌肉信号比、CNR与平扫信号强度有统 计学差异(p0.05)。单克隆抗体对照组的肝脏和肌肉表现为轻度强化。 Gd一DT队对照组内,肿瘤、肝脏、肌肉均表现为快进快出特点。 4.ICE一AEs显示二步法预定位组中肿瘤摄取Gd+3的含量最高,与 一3- 其它各组有显著性差异. 结论 1.单克隆杭体在结合一定数量的生物素分子后,仍可保持较高的活 性。 2.链霉亲和素分子所结合的Gd+,数目依赖于反应体系的pH值及 DTPA环醉一蛋白的摩尔比值,而Gd.DTPA一SA的生物素结合活性与反应 条件无关。 3.二步法预定位技术对肿瘤有特异性增强作用和信号放大效应,可 提高靶瘤内Gd+3的浓聚,优于杭体直接标记法,为单克隆抗体MR分子 免疫显像提供了新途径.


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