供体凋亡细胞输注诱导胰岛移植免疫耐受的研究

【摘要】：研究背景:胰岛移植作为一种潜在的可彻底治愈糖尿病的治疗方法,长期以来倍受瞩目,尤其2000年Edmonton方案的成功,为用胰岛移植的方法治愈1型糖尿病开拓了广泛的应用前景。但是,该方案仍需应用免疫抑制剂来抑制移植免疫排斥的发生,长期应用免疫抑制剂必然会给移植病人带来许多副作用和潜在的危险性,如增加感染、肿瘤的发生率,有的免疫抑制剂本身对胰岛细胞有毒性,可引起移植后的糖尿病。诱导胰岛移植免疫耐受则可以避免长期服用免疫抑制剂的毒副作用,有希望成为促进移植后胰岛长期存活的一种有效手段。近年来一些研究表明凋亡细胞能够主动调节机体的免疫功能,并能通过调节机体细胞免疫和体液免疫的途径诱导免疫耐受。凋亡细胞可以抑制DC的成熟,而不成熟DC在向T细胞提呈抗原时不能提供充分的共刺激信号,从而诱导免疫耐受,另外,吞噬细胞在吞噬凋亡细胞的同时分泌抑制性淋巴因子,亦可诱导免疫耐受。因此,我们拟通过凋亡细胞诱导胰岛移植免疫耐受,探求延长移植胰岛存活的方法。 目的:本实验旨在探讨供者凋亡细胞预输注能否抑制受者对供者胰岛移植物的排斥反应,延长胰岛移植物的存活时间,为寻找诱导胰岛移植免疫耐受的新方法提供实验依据。 方法: 1、过氧化氢对体外培养人脾细胞的影响:采用研磨法获得悬浮的人脾细胞,将细胞分组后给予相应的生理盐水或不同浓度的H_2O_2处理,运用四唑盐(MTT)比色法检测线粒体功能,将细胞与Annexin V-FITC/PI混合孵育后使用流式细胞仪检测早期凋亡细胞.; 2、人胰岛细胞的分离纯化:利用半自动化胰岛分离装置消化胰腺,COBE-2991不连续密度梯度法纯化胰岛细胞;