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清热祛湿法抗肝纤维化的分子机理研究

文彬  
【摘要】:科研工作来源:广东省中医药局滚动资助项目(303012)。 目的和意义:探讨清热祛湿法抗肝纤维化的分子机制,为清热祛湿法应用于临床提供理论依据,为开发抗肝纤维化的中药奠定坚实的理论基础。 研究方法:以复合因素诱导的肝纤维化模型大鼠为研究对象,观察清热祛湿法(代表方清香散由香薷、地胆草、柴胡、黄芩、白术、茯苓、山楂、丹皮、赤芍等组成)对模型大鼠的影响。 50只Wistar大鼠随机分为5组,即正常对照组(A组)、模型组(B组)、秋水仙碱组(C组)、清香散大剂量组(D组)、清香散中剂量组(E组)。除A组外,其余大鼠于实验第1d每只皮下注射40%(体积分数)CCl_4花生油0.5ml·100g~(-1);以后每3日注射0.3ml·100g~(-1)。各组均以79.5%的单纯玉米粉加20%猪油和0.5%的胆固醇的混合饲料喂养,并以30%乙醇为饮料。A组注射等量花生油,进食普通饲料并自由饮水。各组在造模第2天每日灌胃相应药物,C组每日灌服秋水仙碱0.011mg·100g~(-1),D、E组分别每日灌服清香散2g·100g~(-1)、1g·100g~(-1),B组及A组灌以等量蒸馏水作对照。第6周末,处死动物,取血和肝组织备用。一部分肝组织固定于10%中性福尔马林溶液。肝组织常规脱水,石蜡包埋,切片厚5μm,做光镜观察、原位杂交和免疫组化用;一部分固定于2.5%戊二醛中作电镜观察用。根据试剂盒说明书,分别用赖氏法和比色法测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性;消化法检测肝组织肝组织羟脯氨酸(Hyp)、黄嘌呤氧化酶法测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、硫代巴比妥酸(TBA)法测肝组织丙二醛(MDA)。血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)采用全自动生化


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