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病理性瘢痕形成的相关基因筛选和分析的实验研究

胡振富  
【摘要】:一、研究目的 增生性瘢痕和瘢痕疙瘩是临床上常见的病理性瘢痕,是创伤过度愈合的结果。虽然经过长期、大量的研究,异常瘢痕的发生机制目前仍不清楚,寻找病理性瘢痕形成中的相关特异性基因已显得十分迫切。以往只能对单基因或少许基因进行检测和分析,资料零碎而不系统,加之受传统生物学技术的限制,不能全面反映各基因间的相互关系和实时检测。寻找一种系统、快速、方便、准确且高产出的基因分析方法是解决这一难题的关键。以基因序列为分析对象的基因芯片技术以其高通量、简便、缩微、多参数、集约化、平行化等优点,已成为目前基因表达分析的最有力工具。因此,本研究应用基因表达谱芯片检测病理性瘢痕组织的基因差异表达情况,筛选出各组间的差异表达基因,建立和研究病理性瘢痕的差异基因表达谱。以RT-PCR对部分差异表达基因进行检测,验证芯片结果。应用文献轮廓的数据挖掘技术对差异表达基因行聚类分析研究,从而全面了解与病理性瘢痕形成相关的基因,验证并深化对单个基因的研究成果,发现新的相关基因,有望通过筛选和分析,找到特异性的相关基因及其调控机制,为病理性瘢痕形成机制研究的进一步突破及瘢痕过度增生的防治提供有力的理论及实验依据。 二、材料与方法 1.应用表达谱芯片检测病理性瘢痕组织基因表达变化情况 实验分三组,增生性瘢痕组3例,瘢痕疙瘩组3例,正常皮肤组10例,其中正常皮肤组为多个正常组织样本混合而成的正常对照组,作为增生性瘢痕组和瘢痕疙瘩组的共同参照物。术中留取新鲜组织标本,液氮冻存。含有8,064个人类靶基因的基因表达谱芯片由深圳微芯生物公司提供。按Trizol一步法提取样品组织总RNA,经质量检测后,将各组的RNA样品等量混合,进行反转录荧


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