收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

肾阴虚证的血浆蛋白组学初步研究

孙晓敏  
【摘要】: 【研究背景与目的】 肾阴虚证是中医学的基本证候之一,历代医家对肾阴虚证的理论与防治研究都颇为重视。特别是近几十年来,众多学者运用酶学、细胞生物学、免疫学以及分子生物学等现代技术和方法研究发现,肾阴虚证与血液流变学、内分泌、免疫、物质与能量代谢、微量元素、生化、酶以及基因表达等多方面异常有关,初步证实其具有现代的病理生理学基础,并部分阐释了其中医理论的某些细节及其科学性,取得了一定的成绩。 本课题组在先前的肾阴虚证相关基因研究过程中,通过西医辨病与中医辨证相结合,从糖尿病、慢性肾炎、狼疮性肾病以及亚健康状态等肾阴虚证入手,应用RNA微量扩增、抑制性消减杂交、基因克隆等技术和方法,成功地构建了肾阴虚证的cDNA文库;继而根据“以药测证”理论,应用基因芯片研究发现有46条基因可能与肾阴虚证密切相关。而基因又要表达为相应的蛋白质才能影响生物功能,其表达类型与表达程度均受外界环境及内在状态变化的影响。蛋白质组研究正是从蛋白质水平的特异性和表达模式上反映了疾病发生时机体的内在变化。运用蛋白质组学技术,对同一证候不同疾病的蛋白质组表达差异和功能的研究,只有通过对这些差异的研究,从而归纳出“证”的一般规律,才能对肾阴虚证有全面的解析。 血浆是取材容易、应用广泛、富含蛋白质的研究样品,其蛋白水平的变化与多种疾病有关。血浆蛋白质组学可以在整体水平上研究血浆蛋白质的表达水平、翻译后修饰、相互作用等,并由此在血浆蛋白水平获得疾病过程和药物干预过程的外在、综合的认识,在医学基础和应用研究中都有着重要意义。 因此,本研究拟在前期肾阴虚证流行病学调查和基因组学研究的基础上,采用“病证结合”,开展肾阴虚证的血浆蛋白质组学研究,寻找肾阴虚证的差异蛋白,探讨肾阴虚证在蛋白质水平可能的发生机制。 【方法】 1、以正常人血浆样品为研究对象,对白蛋白/IgG球蛋白去除后血浆样品、全血浆和热SDS法全血浆样品进行PH梯度双向凝胶电泳分离,凝胶经硝酸银染色后,利用PDQuest软件对2-DE图谱进行重复性分析,并对不同处理方法的全血浆2-DE图像的结果进行比较,以确定后续肾阴虚证双向凝胶电泳方法。 2、采用“病证结合”手段,依据本课题组对肾阴虚证的临床流行病学调查及有关文献调研结果,选取亚健康、慢性肾小球肾炎以及IgA肾病。肾阴虚证患者作为研究对象,确诊为肾阴虚证患者,作为实验组;确诊为肾阳虚证患者,为阳性对照组;选择健康志愿者作为正常对照组。运用双向凝胶电泳技术对其进行血浆蛋白质差异表达双向凝胶电泳分析。 3、结合软件分析和手工筛选,从有或无和表达差异蛋白质点中选取点清晰且表达水平改变明显的蛋白质点作为最终质谱鉴定的对象;采用肽质量指纹图谱(PMF)的方法,并使用国际互联网上的蛋白质数据库(http://www.expasy.org)提供的检索程序对差异蛋白质进行鉴定。 【结果】 1、与全血浆直接上样和白蛋白/IgG球蛋白去除后血浆样品上样双向电泳图谱比较,热SDS法全血浆上样双向电泳蛋白丢失较少,凝胶硝酸银染色显示蛋白质点染色深、分散清楚,并且避免了在白蛋白/IgG球蛋白去除过程中低丰度蛋白非特异性吸附所造成的人为差异。从而建立了热SDS法全血浆上样进行血浆双向电泳的方法,获得分辨率较高且重复性好的人全血浆蛋白质双向凝胶电泳图谱,为分离高质量的蛋白质点进行肾阴虚证血浆蛋白组学研究奠定了良好的工作基础。 2、应用双向电泳技术对亚健康态、IgA肾病和慢性肾小球肾炎肾阴虚证、肾阳虚证与正常人进行了差异表达血浆双向凝胶电泳和数字化图像分析发现,与正常人相比:(1)在亚健康肾阴虚证血浆中高表达的蛋白质斑点73个,低表达的蛋白质斑点90个,特异出现的蛋白质斑点10个,缺失的蛋白质斑点14个;在亚健康状态肾阳虚证血浆中高表达的蛋白质斑点67个,低表达的蛋白质斑点191个,特异出现的蛋白质斑点17个,缺失的蛋白质斑点19个。(2)在慢性肾小球肾炎肾阴虚证血浆中高表达的蛋白质斑点109个,低表达的蛋白质斑点82个,特异出现的蛋白质斑点36个,缺失的蛋白质斑点9个;在慢性肾小球肾炎肾阳虚证血浆中高表达的蛋白质斑点112个,低表达的蛋白质斑点79个,特异出现的蛋白质斑点39个,缺失的蛋白质斑点14个。(3)在IgA肾病肾阴虚证血浆中高表达的蛋白质斑点122个,低表达的蛋白质斑点120个,特异出现的蛋白质斑点21个,缺失的蛋白质斑点19个;在IgA肾病肾阳虚证血浆中高表达的蛋白质斑点131个,低表达的蛋白质斑点111个,特异出现的蛋白质斑点18个,缺失的蛋白质斑点21个。 3、综合对亚健康、慢性肾小球肾炎、IgA肾病肾阴虚证及肾阳虚证患者与正常人全血浆2-DE图谱定量差异表达分析结果,有29个蛋白质斑点在各肾阴虚证组均较正常组和肾阳虚证组有显著差异。其中在肾阴虚证血浆蛋白质双向凝胶电泳图谱中绝对高表达的蛋白质斑点9个,绝对低表达的蛋白质斑点11个;定性差异表达分析发现肾阴虚证血浆蛋白质双向凝胶电泳图谱中特异出现的蛋白质斑点6个,缺失的蛋白质斑点7个。 4、采用2-DE分离技术结合MALDI-TOP质谱鉴定了7个与肾阴虚证可能相关的蛋白,其中在肾阴虚证患者血浆高表达的有:α1微球蛋白、血浆视黄醇结合蛋白、转甲状腺素蛋白以及热休克蛋白27;在肾阴虚证患者血浆低表达的则是纤维蛋白原重链、α1-抗胰蛋白酶、补体C4-B。差异蛋白的功能主要涉及机体激素调节、免疫应答、氧化应激、信号传导、细胞骨架等。 【结论】 1、热SDS法全血浆上样双向凝胶电泳分析法具有蛋白丢失少、操作简便、重复性好的特性,是证侯血浆蛋白质组学研究的有效手段。 2、采用“病证结合”,开展肾阴虚证的血浆蛋白质组学研究,筛选并鉴定出了可能与肾阴虚证相关的7个血浆蛋白,为探讨肾阴虚证在蛋白质水平的发生机制奠定基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前19条
1 孙晓敏;李晓勇;靳文;王云丹;魏敏;赵晓山;罗仁;;亚健康肾阴虚证的血浆蛋白质组学初步研究[J];四川中医;2008年04期
2 陈宝平,陈清,杨玲,陈玉萍;慢性肾小球肾炎患者血浆血小板激活因子的变化及意义[J];中国综合临床;1999年02期
3 孙晓敏;谭为;罗仁;赵晓山;;慢性肾小球肾炎肾阴虚证血浆蛋白质双向凝胶电泳分析[J];热带医学杂志;2011年04期
4 倪伟波;;血浆探秘[J];科学新闻;2016年04期
5 陈祝俊;张拥黎;卢仁泉;秦晓健;郭林;;血浆氧化型低密度脂蛋白检测在肾细胞癌诊治中的临床意义[J];中国肿瘤;2016年05期
6 费哲颖;孙莉群;王军;;探讨回访在血浆检疫期管理和发展供血浆者中的重要性[J];中国输血杂志;2014年02期
7 杨伟伟;李正全;;血浆报废的常见原因及对策[J];实用医药杂志;2014年04期
8 曾贱高;;血浆输注在临床治疗中的应用[J];中国输血杂志;2012年S1期
9 郭志丽;丁洪强;;血浆速冻机使用效果初步探讨[J];山西医药杂志(下半月刊);2009年04期
10 赵光虎;姜明花;;急性呼吸窘迫综合征血浆脑肽钠及内皮素水平的变化[J];中国医疗前沿;2009年16期
11 任路平;刘娜;章冬梅;陈树春;刘国良;;DR患者血浆血管内皮生长因子的变化[J];实用糖尿病杂志;2009年04期
12 陆卫;;血浆输注的临床分析[J];临床和实验医学杂志;2009年12期
13 姬新才;郭伟;时晔;徐博;刘丹萍;孙励;王菊兰;;急性一氧化碳中毒患者血浆神经元特异性烯醇酶的动态变化及评估预后的意义[J];中国急救医学;2007年02期
14 杨华强;张荣环;章正华;万楚成;夏云金;;急性淋巴细胞白血病患儿血浆血管内皮生长因子及组织因子的测定及其临床意义[J];中国当代儿科杂志;2007年06期
15 付饶;凃茜;;血浆速冻机影响血浆速冻的几个因素探析[J];重庆医学;2006年12期
16 毕诗成;;挣扎在悖论漩涡中的血浆经济[J];南风窗;2006年13期
17 呼志西;张建耕;葛文利;;西安地区临床血浆使用情况调查及分极[J];延安大学学报(医学科学版);2006年02期
18 姜正华,吕元文,朱湘平,朱慕云,丁平,汤艳;慢性阻塞性肺疾病患者血气分析与血浆纤维蛋白降解产物的相关性研究[J];医师进修杂志;2005年09期
19 杨海波,王英,董明敏;老年阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者血浆超敏C反应蛋白浓度的研究[J];中国老年学杂志;2004年12期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 任静;李晨睿;蒋学华;;绿原酸在不同血浆中蛋白结合率测定[A];第八次全国药物与化学异物代谢学术会议论文摘要[C];2006年
2 高兰兴;章广远;刘继鹏;顧景范;;血浆維生素C高铁还原測定法的探討[A];中国生理科学会第二届全国营养专业学术会议论文摘要汇编[C];1979年
3 黄桦;张峻;王韵;王晶晶;郑巧玲;姚勤;周琼;;超快速液相色谱-串联质谱法测定人血浆中的丙戊酸[A];第四届全国治疗药物监测学术年会资料汇编[C];2014年
4 段小涛;陈笑艳;钟大放;;液相色谱-串联质谱法测定人血浆中的利培酮[A];中国有机质谱学第十三届全国学术大会论文集[C];2005年
5 朱玉成;张德荣;张玉敏;;血浆置换联合血浆吸附治疗中不良反应探讨[A];第一届全国疑难重型肝病大会、第四届全国人工肝及血液净化学术年会论文集[C];2008年
6 彭宏凌;张广森;;Ⅱ型遗传性出血性毛细血管扩张症血浆血管内皮生长因子水平测定及意义[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年
7 彭丹;刘云华;朱珊;李贞;;不同血浆量在血浆置换中的临床研究[A];第一届全国疑难重型肝病大会、第四届全国人工肝及血液净化学术年会论文集[C];2008年
8 靳凤丹;陈笑艳;钟大放;;液相色谱-串联质谱法测定人血浆中左旋氨氯地平[A];中国有机质谱学第十三届全国学术大会论文集[C];2005年
9 谢攀;彭侃夫;赵洪雯;;枸橼酸抗凝在血浆净化治疗高危出血患者中的临床研究[A];中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会2018年学术年会论文摘要汇编[C];2018年
10 武亚艳;李甜;薛静;梁恒;;毛细管电泳电致化学发光检测血浆中布比卡因[A];第二届全国微全分析系统学术会议论文摘要集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孙晓敏;肾阴虚证的血浆蛋白组学初步研究[D];南方医科大学;2008年
2 赵慧;冠心病患者血浆高密度脂蛋白组分功能与机体炎症状态的相关性研究[D];北京协和医学院;2015年
3 魏敏;肾阴虚证和肾阳虚证基因表达谱的比较研究[D];南方医科大学;2009年
4 阿里木江·克里木;基于代谢组学平台的胶质瘤患者血浆代谢标志物研究[D];新疆医科大学;2016年
5 赵晓山;肾阴虚证相关基因的初步研究[D];第一军医大学;2004年
6 刘林;中药含药血浆与血清有效成分比较及血浆药理学方法研究[D];湖南中医药大学;2016年
7 张琴;血浆人组织激肽释放酶的含量与中国人群心脑血管疾病的临床研究[D];华中科技大学;2010年
8 詹华奎;通心络治疗慢性肾小球肾炎临床研究[D];成都中医药大学;2005年
9 张勇;糖蛋白质组学新方法及其在IgA肾病中的应用研究[D];军事科学院;2018年
10 王倩;肾小管上皮细胞sEH介导IgA肾病肾间质巨噬细胞浸润及极化的机制研究[D];郑州大学;2018年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郑亚斌;血浆单采机软件的设计与实现及抗凝剂精确控制的研究[D];电子科技大学;2016年
2 蒋明;冠状动脉粥样硬化性心脏病所致心力衰竭患者血浆血管活性肠肽的变化及其临床意义[D];重庆医科大学;2011年
3 陈秋霞;急性脑梗死患者血浆内源性硫化氢的变化[D];重庆医科大学;2015年
4 贾伟;血浆和肽素对心力衰竭诊断及预后判断的临床意义[D];大连医科大学;2013年
5 郑清月;血浆血管内皮生长因子及其受体与急性高原病相关性的研究[D];辽宁医学院;2013年
6 李巧;2型糖尿病视网膜病变患者血浆与房水中VEGF、IL-6的含量分析[D];山东大学;2007年
7 黄文祯;乳腺癌患者手术及化疗前后血小板和血浆中VEGF、bFGF水平的变化及其意义[D];南昌大学;2016年
8 杨丽军;糖尿病合并高血压患者血浆尾加压素、肾上腺髓质素水平的变化及临床意义[D];佳木斯大学;2007年
9 赵晓丽;慢性充血性心力衰竭患者血浆支链氨基酸水平的临床研究[D];第四军医大学;2014年
10 李燕;冠心病患者血浆单核细胞趋化蛋白-1的变化[D];郑州大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 实习记者 代小佩;注射年轻血浆真的不能抗衰[N];科技日报;2019年
2 王迪 编译;经济越困顿,血浆越红火[N];医药经济报;2009年
3 张荣;太原2000单位血浆连夜送灾区[N];山西经济日报;2008年
4 ;哪些因素可引起血浆HDL-C低下[N];健康报;2006年
5 退休职员 郝如一;不能让“血浆经济”恶果重现[N];健康报;2014年
6 孟庆普;原料血浆供应减少原因何在[N];健康报;2007年
7 本报记者 孙梦;血浆制品持续紧缺[N];健康报;2015年
8 本报记者 张昊;“救命药”告急背后的血浆短缺[N];健康报;2011年
9 本报记者 孟庆普;捐献血浆三大误区待消除[N];健康报;2012年
10 本报特约撰稿人 李健陈昆;打通血浆紧张“血脉”[N];医药经济报;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978