收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

睾酮对心脏老化过程中心肌纤维化的干预研究

刘新强  
【摘要】: 背景和目的: 随着衰老,心脏发生了与衰老相关的生物化学以及细胞生物学的变化从而导致了病理生理学状况的改变。心脏老化的过程中,心肌细胞以及心肌成纤维细胞也逐渐衰老,同时心肌胶原含量逐渐增加,异常聚积在心肌间质和血管周围,形成了心肌纤维化。心肌纤维化不仅是高血压、冠心病及心力衰竭等疾病心脏重构发生、发展的重要机制之一,也是心脏老化的重要特征。心肌的纤维化则对心脏产生不利的影响,引起心肌结构紊乱,僵硬度增加,心脏顺应性降低,心律失常以及顽固性心衰的发生率增高。因此急需开展心肌纤维化发病机制及防治对策的研究。 对于在心脏老化的过程中心肌纤维化机制的研究首先涉及的是衰老机制问题。目前有关衰老机制的学说有数十多种,总体来说最终归结为两大类型:一类是以活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)、糖基化、线粒体受损等损害为代表的环境伤害衰老理论,另一类是以端粒缩短、衰老基因、细胞周期调控因子等为代表的遗传因子程序化衰老理论,这两大类理论从不同角度阐述了机体衰老的可能机制,使衰老的研究不断向细胞、分子和基因水平深入。在关于心脏老化的众多衰老学说中,以ROS为基础的氧化应激学说最被广泛认同。因此对于心肌纤维化的发病机制的研究我们可以以此为线索展开。 在衰老过程中,除了心脏衰老本身因素之外,老年人易发心肌纤维化的另一个具有显著特点的危险因素是体内随年龄增加而发生的性激素平衡的改变。在增龄过程中,体内性激素发生相应变化,其中性激素水平在更年期后发生的变化显示出性激素对机体作用的重要性。男性睾酮水平随年龄的变化与男性心脏结构随年龄增长发生的变化之间有无一定的联系呢?目前研究还较少。睾酮对心脏老化过程中心肌成纤维细胞的影响,目前还没有文献报道。其可能的作用机制也还没有明确。 因此,我们使用低浓度H_2O_2诱导心肌成纤维细胞衰老,通过观察测定心肌成纤维细胞在ROS的作用下各种衰老指标(细胞增殖能力、β-半乳糖苷酶的表达)、细胞内氧化应激水平、细胞周期、a平滑肌肌动蛋白(a SMA)以及TGF-βlmRNA以及P16mRNA,cyclnD1 mRNA表达变化,以探讨心肌成纤维细胞衰老的机制,并予睾酮及其受体拮抗剂干预,探讨生理浓度睾酮对活性氧诱导心肌成纤维细胞早衰的干预作用及其可能的作用机制,为明确睾酮在干预心脏老化过程中心肌纤维化的作用,及其作用机制提供新的理论和实验依据,或许能为心脏老化过程中心肌纤维化的防治提供新的靶点。 方法: 1、培养心肌成纤维细胞,采用第4~6代细胞。使用60μmol/L H_2O_2作用72h诱导心肌成纤维细胞发生衰老。 2、分组:(1)A组(对照组):低血清培养液(2%FCS)培养细胞;(2)B组:用含60μmol/L H_2O_2的完全培养液作用细胞72 h;(3)C组:在H_2O_2刺激组基础上,在H_2O_2刺激前1h先用睾酮30nmol/L刺激;(4)D组:在睾酮作用组基础上,在睾酮刺激前30 min先用氟他胺1μmol/L刺激。 3、用β-半乳糖苷酶染色检测细胞的衰老,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞术分析细胞周期,DCF荧光显色检测细胞内活性氧水平。a平滑肌肌动蛋白(aSMA)免疫化学染色反映细胞的表型转化,RT-PCR法检测TGF-βlmRNA以及P16mRNA,cyclinDl mRNA表达。 统计处理 实验结果以均数±标准差表示,数据处理采用SPSS13.0统计软件,各组间均数比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA),满足方差齐性的多重比较采用LSD法,不满足方差齐性的多重比较采用Dunnett's T3法。P<0.05(双侧)表示差异有显著性。 结果 1、各组细胞增殖率的比较与A组比较,B组可以引起心肌成纤维细胞增殖率明显下降(P=0.000)。生理浓度(30nmol/L)的睾酮具有增加H_2O_2诱导的心肌成纤维细胞增殖率的趋势,与B组比较均有显著差异(P=0.000)。Flu却可以增加H_2O_2诱导的心肌成纤维细胞增殖率,差异也具有显著性(P=0.000)。 2、各组SA-β-半乳糖苷酶(SA-β-galactosidase)染色阳性率比较与A组相比,B组阳性细胞率增多具有显著性意义(P=0.000);而生理浓度(30nmol/L)的睾酮能干预H_2O_2的作用(P=0.000);而Flu即可阻断睾酮的保护作用,差异也具有显著性(P=0.000)。 3、各组细胞内活性氧(ROS)水平的比较与A组相比,B组的细胞内ROS水平显著上升(P=0.000);而生理浓度(30nmol/L)的睾酮能干预H_2O_2的作用(P=0.000),而Flu即可阻断睾酮的保护作用,差异也具有显著性(P=0.000)。 4、各组细胞的a SMA免疫化学染色 4.1 A组心肌成纤维的a-SMA免疫化学染色部分细胞轻度着色,无明显的结构定位特征。B组a-SMA免疫化学染色出现明显强阳性,虽然不同细胞的染色强度不完全一致,但结构定位明显,呈丝状分布。C组生理浓度的睾酮仅有部分细胞轻度着色,无明显的结构定位特征。D组细胞出现阳性,着色的结构定位不甚明显。 4.2与A组相比,B组的细胞内a SMA含量显著上升(P=0.000);而生理浓度(30nmol/L)的睾酮能使细胞内a SMA含量下降(P=0.000),而Flu即可阻断睾酮的保护作用,差异也具有显著性(P=0.000)。 5、各组细胞周期分析与A组相比,B组细胞大部分处于G_0/G_1期,细胞生长停滞,细胞增殖能力明显下降;与B组相比较,C组减少G_0/G_1期比例,具有统计学意义(P=0.000);D组较C组作用减弱,具有统计学意义(P=0.000)。D组与B组相比较,无统计学差异(P=0.393) 6、各组TGF mRNA、P16mRNA、cyclinD1 mRNA的表达及分析。与A组的P16mRNA、cyclinD1 mRNA、TGF mRNA相比,B组的细胞表达的mRNA显著升高(P=0.000)。而生理浓度(30nmol/L)的睾酮能抑制H_2O_2的作用(P=0.000);而Flu即可阻断睾酮的保护作用,差异也具有显著性(P=0.000)。 结论 1、60μmol/L H_2O_2作用72 h能够诱导心肌成纤维细胞发生提前衰老。 2、生理浓度的睾酮能够抑制活性氧诱导的早衰的心肌成纤维细胞β-半乳糖苷酶的表达。 3、生理浓度的睾酮使早衰的心肌成纤维细胞内活性氧水平下降。 4、生理浓度的睾酮能够抑制氧化应激诱导的心肌成纤维细胞的TGF mRNA、P16mRNA、cyclinD1 mRNA的表达。 5、生理浓度的睾酮能够抑制氧化应激诱导的心肌成纤维细胞周期的停滞。 6、生理浓度的睾酮能够抑制心脏老化过程中心肌成纤维细胞向心脏肌成纤维细胞转化。 7、睾酮的以上所有效应都是通过其受体实现的。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 黄晓斌;;尿酸可以作为升主动脉扩张中氧化应激的一种标志物[J];中华高血压杂志;2011年07期
2 刘志娟;郝青林;;氧化应激在OSAHS并代谢综合征作用机制研究进展[J];临床肺科杂志;2011年09期
3 王彦江;谢席胜;冯胜刚;;氧化应激与糖尿病肾病足细胞损伤的研究进展[J];中国中西医结合肾病杂志;2011年07期
4 黄英;李雪兰;蒋凤荣;;白藜芦醇对非酒精性脂肪肝大鼠的作用机制研究[J];南京中医药大学学报;2011年04期
5 孙莉;陈玉华;周琴;;帕金森病患者血尿酸水平的检测及相关性分析[J];数理医药学杂志;2011年02期
6 杨瑞丽;李武;施用晖;乐国伟;;生长抑素与代谢综合征相关生化及抗氧化指标的关系[J];卫生研究;2011年04期
7 杨云静;王东;;氧化应激与β细胞损伤研究进展[J];医学综述;2011年10期
8 张婕;刘光陵;;氧化低密度脂蛋白与肾小球硬化的研究进展[J];临床儿科杂志;2011年08期
9 张浩;张国艳;牛效清;;氯沙坦对糖尿病肾病患者氧化应激的影响研究[J];当代医学;2011年24期
10 夏磊;张贤生;;男性更年期与代谢综合征[J];中国男科学杂志;2010年10期
11 杨婕琳;赵东强;冯丽英;;硫氧还蛋白、硫氧还蛋白相互作用蛋白与消化系疾病的关系[J];世界华人消化杂志;2011年18期
12 余国膺;;成纤维细胞重编程为心肌细胞[J];中国心脏起搏与心电生理杂志;2011年03期
13 钱晟;程新富;谭宗德;张志强;;重型脑外伤术后早期维生素C治疗对氧化应激标记物的影响[J];中国实用神经疾病杂志;2011年16期
14 刘亚锋;;氧化应激与肝脏保护[J];胃肠病学和肝病学杂志;2011年07期
15 刘同刚;韩洪林;孙景玲;;造影剂对2型糖尿病患者氧化应激的影响[J];包头医学院学报;2011年03期
16 马敏;江振洲;阮金兰;张陆勇;;黄药子二萜内酯类成分对肝细胞毒性的实验研究(英文)[J];中国天然药物;2011年04期
17 姚濛;武凤鸣;罗利;郭开华;卢英红;徐杰;;过氧化氢对大鼠血小板线粒体功能的影响[J];解剖学研究;2011年03期
18 张莉;刘晓晖;齐刚;;红景天苷对吊尾应激小鼠睾酮水平的影响[J];中华男科学杂志;2011年08期
19 邹冠玉;季朝能;沈琪;薛京伦;陈金中;;FHC和Bim相互作用抵抗细胞凋亡(英文)[J];生物化学与生物物理进展;2011年09期
20 钟林娜;黄国良;冯敏;张莹;;缬沙坦对人肾小球系膜细胞糖基化终产物受体表达的影响[J];中国应用生理学杂志;2011年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 钱令嘉;弓景波;宋学立;程素琦;;线粒体膜渗透性转换(MPT)的变化在氧化应激心肌细胞凋亡发生中的作用[A];第七届全国生物膜学术讨论会论文摘要汇编[C];1999年
2 刘静;刘李超;宋杨;;多氯联苯醌介导氧化应激及抗氧化防御的研究[A];中国活性氧生物学效应学术会议论文集(第一册)[C];2011年
3 简乐;;CS_2接触者的脂质代谢与氧化应激水平研究[A];新世纪预防医学面临的挑战——中华预防医学会首届学术年会论文摘要集[C];2002年
4 黄园;陈志庆;邱卓君;丘卫;林燕;;运动对血液氧化应激态的影响[A];2002年第9届全国运动医学学术会议论文摘要汇编[C];2002年
5 任振义;叶健;;COPD过氧化应激所致的骨骼肌功能障碍[A];2006年浙江省呼吸系病学术年会论文汇编[C];2006年
6 刘峰;江米足;章许平;陈洁;楼金玕;陈飞波;黄晓磊;李中跃;吴秀英;陈肖肖;欧弼悠;;氧化应激在小儿反流性食管炎黏膜损伤中作用机制的研究[A];2007年浙江省消化系疾病学术会议论文汇编[C];2007年
7 王海霞;侯云龙;潘洪志;;番茄红素抗大鼠心肌缺血作用的研究[A];中国营养学会第十次全国营养学术会议暨第七届会员代表大会论文摘要汇编[C];2008年
8 赵雅君;张伟华;李鸿珠;吴博;李宏霞;李全风;高秀香;徐长庆;;鸟氨酸脱羧酶(ODC)/多胺系统在大鼠氧化应激预适应心肌保护中的作用[A];第七届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2009年
9 曾宪成;马璟;常艳;刘全海;;实验动物应激后氧化应激状态的监测[A];第九届中国实验动物科学年会(2010新疆)论文集[C];2010年
10 康玉凡;李德发;陈洪亮;;氧化应激、抗氧化微量营养素和基因表达[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第六届全国会员代表大会暨第八届学术研讨会论文集(下)[C];2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 姚晓华;新杀虫剂啶虫脒对旱地土壤微生物生态影响及其降解研究[D];浙江大学;2005年
2 符跃强;氧化应激下肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡和JNK的调控机制[D];重庆医科大学;2008年
3 赵海金;维生素D_3上调蛋白1(VDUP1)参与哮喘氧化应激的作用及分子机制研究[D];南方医科大学;2008年
4 李坚;血管内皮细胞在放射性肺损伤中的作用及茶多酚放射防护的实验研究[D];广西医科大学;2009年
5 张骑鹏;硫胺素缺乏对β-淀粉样多肽前体蛋白加工和Aβ生成的作用及机制研究[D];复旦大学;2008年
6 李霖;雄激素受体在波动性高糖致人脐静脉内皮细胞损伤中的作用及其机制研究[D];浙江大学;2012年
7 武桂新;运动性低血睾酮与睾酮合成的酶及血液中睾酮分布特点[D];北京体育大学;2000年
8 傅求真;氧化应激导致多巴胺能细胞死亡的机制研究[D];第一军医大学;2002年
9 李芸;a-硫辛酸对氧化应激下人视网膜色素上皮细胞的保护作用及机制研究[D];中南大学;2010年
10 刘莹;氧化应激对内皮祖细胞作用的蛋白质组学分析[D];吉林大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘新强;睾酮对心脏老化过程中心肌纤维化的干预研究[D];南方医科大学;2009年
2 董丽;暴露于二噁英、五氯酚(钠)的男工氧化应激指标、维生素A和生殖激素水平的改变及二噁英对表皮细胞增殖的影响[D];天津医科大学;2005年
3 谢南;丙烯酰胺对雄性小鼠生殖系统毒性的研究[D];吉林大学;2007年
4 刘涛;阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者血清性激素的变化与分析[D];新疆医科大学;2008年
5 王晓晨;白细胞介素-10、睾酮与冠心病相关性临床分析[D];安徽医科大学;2009年
6 李钊;男性骨质疏松症与内皮素的相关性研究[D];广州中医药大学;2005年
7 邹飞;聚精丸对生精功能障碍大鼠的作用及相关因素研究[D];成都中医药大学;2005年
8 张敏;复方壮阳中药对训练大鼠红细胞及EPO、T含量影响的研究[D];曲阜师范大学;2006年
9 曹占伟;睾酮对心力衰竭雄性大鼠心肌组织Fas和SERCA2a转录水平的影响[D];郑州大学;2007年
10 杨颖;中药治疗对干眼症疗效及性激素水平影响的临床研究[D];山东中医药大学;2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;预防疾病,进入“氧化应激”时代[N];中国医药报;2009年
2 灵诺;身体异常与“氧化应激”有关[N];中国医药报;2009年
3 记者 项铮;氧化应激干扰有望成为预防疾病新手段[N];科技日报;2008年
4 郭枫;知未来 治未病[N];中国医药报;2009年
5 熊昌彪;氧化应激研究与中医治未病“不谋而合”[N];中国医药报;2008年
6 ;远离疾病,科学家找到新方法[N];中国医药报;2009年
7 本报记者 王璐;男人“不惑”谨防睾酮缺失[N];保健时报;2009年
8 刘海英;氧化应激是基因突变的主要潜在致因[N];科技日报;2009年
9 北京煤炭总医院泌尿外科主任医师 钟伟;睾酮:我打造了男人[N];健康时报;2003年
10 褚晓明;老年痴呆与氧化应激有关联[N];健康报;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978