收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

一组蛋白降解相关分子在肝癌进展中的作用研究

黄磊  
【摘要】:研究背景和目的: 原发性肝癌是发生在肝细胞或肝内胆管细胞的一种恶性程度高、进展快、预后差的恶性肿瘤,其发病率在恶性肿瘤中排名第六,死亡率居第三。全世界半数左右的肝癌病人集中在中国,严重危害我国人民的健康。 近年来,通过高通量蛋白芯片和蛋白质组学等技术,在新的肝癌转移复发标志物的研究方面已经有较大的进展。建立肝癌转移的多分子预测模型,经大量临床标本进一步验证,尤其是前瞻性规模化验证和加速临床应用将是今后的主要趋势和研究重点,对改善预后具有非常重要的临床意义。 真核细胞内的蛋白质主要有两种降解途径:泛素-蛋白酶体途径和溶酶体途径。其中,泛素-蛋白酶体途径能够高选择性地降解那些细胞在应激和非应激条件下产生的蛋白质,对维持细胞正常生理功能具有十分重要的意义。近年研究发现,泛素化与去泛素化的改变和多种肿瘤的发生密切相关,恶性肿瘤多伴随癌基因和抑癌基因产物的表达异常。 基于上述研究背景,我们推测蛋白降解系统中的关键分子,可能通过直接影响与某些癌基因表达相关的蛋白质水平,在肝癌发生发展过程中起重要作用,从而具有作为肝癌预后及治疗靶标的价值。我们与美国的合作实验室利用基因表达谱芯片检测了70例肝癌患者癌和癌旁组织,通过统计分析,我们筛选出了一组与蛋白降解相关的在肝癌中异常表达的基因:PSMD4、UBD和CSTB,并计划深入研究它们的生物学功能。 PSMD4基因编码的蛋白是人26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基4(26S proteasomenon-ATPase regulatory subunit4),该分子含有两段15个氨基酸的泛素相互作用模序(ubiquitin interacting motif,UIM),能够选择性结合泛素化蛋白,介导蛋白质降解。已有研究报道,PSMD4异常表达与炎症性肠病、溃疡性结肠炎等疾病相关,PSMD4在肝癌中的表达及生物学功能尚不十分清楚,与肝癌患者的预后关系也未见报道。国外科研机构和本实验室的前期研究已经发现,与PSMD4同属人26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基的PSMD10,又称癌基因p28GANK,其编码的蛋白Gankyrin与肝癌发生发展关系密切,PSMD4是否也像Gankyrin一样在肝癌发生发展中发挥重要作用,两者之间是否有类似之处,值得我们深入研究。 泛素样蛋白D(Ubiquitin D,UBD)属于泛素样蛋白家族,能够共价结合靶蛋白,使其经蛋白酶体降解。UBD能够通过降解IκBα,调节TNF-α或者LPS诱导的内在免疫激活,并且可能参与了DC细胞的成熟过程,故以往研究局限于其在免疫系统中的作用。UBD在肝癌中的表达情况及其在肝癌发展进程中的具体功能并不清楚,其与肝癌患者预后的关系也未见报道。 Cystatin B简称CSTB,是半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族的一员,可以抑制包括半胱氨酸蛋白酶在内的多种蛋白水解酶的活性。M.J. Lee等人利用基因芯片鉴定了248个基因在HCC和癌旁组织中的差异表达,运用Northern blot以及Real-time PCR证实,在45例HCC样本中,有36例(80%)患者CSTB的水平在癌中明显高于癌旁。更为重要的是,血清中CSTB的水平在HCC患者中明显高于非恶性慢性肝病患者。这些结果提示,CSTB联合AFP可能作为更敏感的HCC分子诊断标志物。然而,CSTB在肝癌中的表达情况及在肝癌中的生物学作用尚不十分清楚,与肝癌患者预后也有待进一步研究。 本课题旨在检测PSMD4/UBD/CSTB在肝癌中的表达,研究其在肝癌细胞中的生物学作用,利用临床随访资料分析PSMD4/UBD/CSTB在肝癌预后判断中的应用前景,探讨其作为治疗靶点的可行性,为后续转化医学研究奠定基础。 研究方法: 1.基因表达谱芯片筛选与确认待研基因; 2.利用Real-time PCR和Western blot分别检测不同肝癌细胞系/肝癌病人中PSMD4/UBD/CSTB的mRNA水平和蛋白水平;运用免疫组织化学染色在人的组织切片和肝癌组织芯片中进一步验证PSMD4/UBD/CSTB表达情况; 3.对103例肝癌组织预后芯片行PSMD4/UBD/CSTB免疫组化染色,并对染色情况进行评分,结合临床病理预后资料,统计分析PSMD4/UBD/CSTB作为肝癌预后及治疗靶标的价值; 4.构建过表达质粒,包装慢病毒,通过瞬时转染实验和建立稳定细胞系,初步探讨PSMD4/UBD/CSTB在肝癌细胞恶性生物学行为中的作用; 具体包括:利用CCK8试剂测定细胞增殖情况;利用transwell检测肝癌细胞迁移能力的变化;用Spheroid成球实验检测肝癌干细胞表型的变化;利用常规化疗药物5-氟尿嘧啶,用Annexin V Kit流式检测细胞凋亡情况。 研究结果: 1.本科室前期研究中利用基因表达谱芯片检测了70例肝癌患者癌与癌旁组织中基因的表达差异,筛选出了三个在肝癌中异常表达的基因:PSMD4、UBD和CSTB; 2. PSMD4/UBD/CSTB在肝癌临床样本中mRNA水平和蛋白水平的表达均是癌中高于癌旁; 3. PSMD4/UBD/CSTB在肝癌组织中的表达与肝癌病人的无瘤生存期和总体生存期有关,可以作为肝癌预后指标; 4. PSMD4和UBD均能促进细胞增殖,并能显著抑制细胞凋亡;而CSTB可能更多地影响细胞的增殖能力,对抑制凋亡不起作用; 5. PSMD4促进肝癌细胞的自我更新能力和转移潜能; 6. PSMD4在正常组织中不表达或表达很低以及其在多种肿瘤中高表达,提示PSMD4在肿瘤治疗中的应用前景。 结论: 本课题利用基因表达谱芯片筛选出一组在肝癌中异常表达的与蛋白质降解相关的基因PSMD4/UBD/CSTB,高通量检测PSMD4/UBD/CSTB在肝癌中的表达并利用大样本验证;联系临床随访资料分析PSMD4/UBD/CSTB作为肝癌预后靶标的价值,初步探讨了PSMD4/UBD/CSTB在在肝癌细胞中的生物学作用,并将我们的研究重点锚定在与Gankyrin同属人26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基的PSMD4,深入研究PSMD4对肝癌恶性表型的影响,探讨其作为肝癌治疗靶点的可行性。目前正在建立PSMD4肝细胞条件性基因敲除小鼠,下一步将深入研究PSMD4在肝癌发生发展中的作用及分子机制。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 艾尔;;深度揭露肝癌的众多“伪装”[J];肝博士;2009年04期
2 王成恩;李国材;;肝癌外科治疗的一些经验[J];广东医学;1979年02期
3 何力;;TNFα、IL-2在肝癌冷冻免疫中的作用实验分析[J];海南医学;2007年10期
4 范林军;何振平;;肝癌侵袭转移的相关因素[J];中华肝胆外科杂志;2001年11期
5 ;肝癌病人及肝癌高、低发区居民血清IgG、IgA、IgM含量测定[J];广西医学;1981年05期
6 朱科伦;马佩球;李建强;谢丽娥;赖建红;;肝癌病人免疫功能检测[J];广州医药;1984年01期
7 叶超平;陈骥;;48例肝动脉阻断后综合征的临床分析[J];福建医科大学学报;1992年02期
8 王艳菊;;肝癌病人介入治疗的护理体会[J];齐齐哈尔医学院学报;2010年16期
9 蔡觅;贺福初;周钢桥;;胰岛素样生长因子系统与肝癌[J];中国生物化学与分子生物学报;2011年05期
10 赖树云;刘美玉;吴永强;刘爱武;孙君洁;周明非;杨海珉;;原发性肝癌癌细胞及其附近肝细胞超微结构的立体学分析[J];昆明医学院学报;1988年04期
11 ;肝癌病人免疫功能检测[J];广州医学院学报;1983年04期
12 储佛年;王绍猷;田春林;刘由庚;;氘标记胸腺嘧啶核苷释放微量细胞毒法测定肝癌病人细胞免疫功能[J];广西医科大学学报;1985年04期
13 李国材;;提高肝癌远期疗效的分析[J];实用肿瘤学杂志;1988年01期
14 董思钰;戴希真;苗会;徐帮宁;赵敏;王跃;;原发性肝癌心脏转移(附3例报告)[J];中日友好医院学报;1989年01期
15 孟昭鹏;;采用确证性试验诊断肝癌病人的丙型肝炎病毒感染[J];传染病信息;1994年03期
16 王阳,王桂芳;戊型肝炎及肝癌病人外周血T淋巴细胞亚群的分析[J];中华肝脏病杂志;1996年02期
17 吴桂荣,周益盛,吴小超,王晓春;肝癌病人血清中的补体检测及临床意义[J];中华普通外科杂志;1999年05期
18 陈泽民,李泽浩,江建平,胡宏年,潘新年;肝癌病人舌质与微循环的关系——附100例临床分析[J];中西医结合肝病杂志;1999年03期
19 钟丽;莫新少;游雪梅;陈似霞;陈德凤;刘倩;;肝移植病人生存质量及影响因素的研究[J];护士进修杂志;2007年23期
20 陶才华;;肝癌患者血脂和载脂蛋白代谢水平分析[J];河南预防医学杂志;2008年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 余林欢;;肝癌病人的心理分析及对策[A];全国外科护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2002年
2 徐克成;牛立志;;肝癌经皮微创消融治疗[A];肝脏病防治学术研讨会及新进展学习班专刊[C];2005年
3 张道平;沈宇清;张爱凤;缪凤琴;张建琼;;ARL-1在肝癌中表达模式的初步研究[A];江苏省遗传学会第八届会员代表大会暨学术研讨会论文集[C];2010年
4 吴倩;;1例91岁肝右前叶肝癌病人在CT引导下射频消融术的心理护理[A];2010中华医学会影像技术分会第十八次全国学术大会论文集[C];2010年
5 刘彦青;刘圆;;肝癌病人的饮食及心理护理[A];全国传染病护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2007年
6 郑树森;;肝癌的诊治进展[A];2009年浙江省外科学学术年会论文汇编[C];2009年
7 王红军;;肝癌病人的出院指导[A];河南省肿瘤全科护理学术交流会暨专科护士培训班资料汇编[C];2006年
8 殷志荣;;肝癌病人饮食护理的重要性[A];全国肿瘤护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2008年
9 陆益钱;;肝癌病人的健康教育体会[A];第一届全国肿瘤护理学术会议论文集[C];2001年
10 罗鸿萍;张秀芝;;216例肝癌病人行射频消融治疗的护理体会[A];全国第三届重症监护护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 严俊;肝癌多光子光学诊断及肝移植术后索拉菲尼早期干预的实验研究[D];复旦大学;2012年
2 宋培明;氨基酸同位素标记技术在肝癌疾病蛋白质组学研究中的应用[D];上海交通大学;2009年
3 徐永锋;肝癌局部免疫微环境状态以及PEBP1分子表达影响肝癌复发转移的相关研究[D];复旦大学;2010年
4 孙海香;缺氧诱导因子(HIF-2α)通过TFDP3诱导肝癌细胞凋亡分子机制及临床研究[D];复旦大学;2011年
5 惠博;自噬溶酶体通路及泛素蛋白酶体通路在肝癌药物干预中的相关作用研究[D];复旦大学;2011年
6 戴陈新;HIF-1α对肝癌复发转移及肝癌内外相关微环境的影响[D];复旦大学;2010年
7 岳攀;脱-γ-羧基凝血酶原促进肝癌增殖与转移机制研究[D];山东大学;2011年
8 王拱辰;γ-干扰素在肝癌免疫逃逸中的作用与机制的研究[D];大连医科大学;2010年
9 黎江;肝癌干细胞新型培养体系的建立以及治疗靶点筛选[D];第二军医大学;2012年
10 金成兵;高强度聚焦超声在肝癌综合治疗中的应用及低强度超声对CD133~+多药耐药肝癌细胞SMMC-7721的影响[D];重庆医科大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李振宇;CD147、MMP9在肝癌表达及临床意义[D];浙江大学;2010年
2 郭媛媛;肝癌中RACK1对JNK通路的调控作用及机制探讨[D];河南大学;2011年
3 徐赟;LINE-1甲基化与肝癌临床病理和预后关系[D];第二军医大学;2010年
4 胡捷;血浆循环DNA变异在预测肝癌肝移植预后中的价值研究[D];复旦大学;2010年
5 张萦斐;GRP78在原发性多结节肝癌中的表达及意义[D];广西医科大学;2010年
6 杨平华;多发性肝癌肝切除术指征的探讨[D];第二军医大学;2011年
7 李丁;抑制自噬与抗血管联合治疗肝癌的实验研究[D];第二军医大学;2011年
8 赵瑞杰;紫草素诱导肝癌细胞凋亡及其机制的初步探讨[D];西北农林科技大学;2010年
9 朱峰;Bax通路在mfn2诱导肝癌细胞凋亡过程中作用的研究[D];浙江大学;2010年
10 孙鼎强;甘氨双唑钠在肝癌介入治疗中的应用及临床对照研究[D];泸州医学院;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 李荔;周钢桥:易得肝癌的基因[N];北京科技报;2010年
2 镇江市第三人民医院肝胆外科 主任医师 李宏欣;不同临床分期肝癌病人治疗方法的选择[N];镇江日报;2010年
3 副主任医师 周德瑞;肝癌病人能生育喂奶吗[N];卫生与生活报;2007年
4 本报记者 喻京英;提高抗癌意识最重要[N];人民日报海外版;2011年
5 本报记者 苗蓓 本报通讯员 李兆玉;托马斯·肯瑟勒:为了友谊而来[N];南通日报;2011年
6 庄庆平;识破肝癌的“伪装”[N];家庭医生报;2006年
7 本报记者 许琦敏 陈青 实习生 李婷;病人“逼”我创新[N];文汇报;2006年
8 第二军医大学附属东方肝胆外科医院副院长 教授 张柏和;肝癌,重在病因预防[N];家庭医生报;2005年
9 印高乐;干扰素降低肝癌病人开刀后复发几率[N];医药经济报;2002年
10 孙理 本报记者 赵宇清;别让肝癌偷袭生命[N];黑龙江日报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978