肿瘤微环境中浸润性树突状细胞的表型和免疫学功能的研究及其临床意义

【摘要】：树突状细胞（dendritic cells，DCs）是体内重要的专职抗原提 呈细胞（antigen－presenting cell,APC），可能是表达抗原提呈相关 分子最丰富的细胞之一。CD1a 是人DCs的特异性表达标志，成熟 DCs还高表达MHCⅡ类分子、CD80（B7－1）、CD86（B－2）、 CD54（ICAM-1）等共刺激分子和粘附分子，在机体细胞免疫和体液 免疫调控中均起重要作用；正常成熟DCs表面有较多伸长的突起。 目前对DCs的研究较多，也取得了一些突破性的进展，但对肿瘤微 环境中的DCs的研究还比较少，尤其是对人肿瘤微环境中的DCs 的数量、功能的研究更是鲜见报道。肿瘤微环境中的DCs直接与肿 瘤细胞接触，在研究肿瘤免疫中尤具重要意义。本文旨在研究人肿 瘤微环境中的浸润性树突状细胞即肿瘤浸润性树突状细胞（tumor indiltrating dendritic cells,TIDCs）的数量、表型、免疫学功能及 其临床意义，揭示其在肿瘤免疫逃逸机制方面的作用。 我们采用酶消化、细胞分离和免疫组化S-100蛋白S-P法染色 的方法首次对5例胃癌、9例大肠癌肿瘤组织中的浸润性细胞进行 研究，实验结果表明TIDCs在肿瘤组织中有不同的分布，数量较 少，常规瑞氏染色可以观察到该类细胞多为圆型、短胞浆突起；细 胞涂片结果显示S-100（＋）TIDCs的数量为12．3±3．8个 ／HPF（high-power field，HPF）；其形态也发生变化，主要有两种形 态，一种为圆形，胞体较小，胞浆、胞核阳性着色较深，胞浆无突 起；另一种为短突起细胞，胞体较大，胞浆阳性着色稍淡，胞浆有 短突起，推测这种形态变化对DCs的吞饮能力、摄取抗原能力有一 定的影响；而且S-100（＋）TIDCs的数量多少与肿瘤组织的浸润 程度、分化程度及淋巴结转移程度呈负相关，与肿瘤患者的预后成 正相关。说明S-100（＋）TIDCs具有重要的临床意义，是判断肿 瘤患者预后的一项重要指标，并提示TIDCs与肿瘤的发生、发展 具有密切的联系。 同时我们首次对分离得到的浸润性细胞用流式细胞仪 吓ACS）进行了其表面分子表达的检测并分析了其表面分子异常 表达的原因。检测结果表明14例病例中有10例肿瘤组织分离的浸 润性细胞中有CDla＼CD86”表达的细胞存在，但数量较少，约 占分离得到的浸润性淋巴细胞数的4．62％土2．89％；该群细胞除4 例低表达 MHC 11类分子（HLA－DR）外，余均不表达 MHC 11类 分于（HLA－DR），且CD54（ICAM1卜CD80（B7－l）及CD83等共 刺激分子和粘附分子的表达也很低或不表达，而共刺激分子CD86 旧7毛）有较高的表达。MHC 11类分子在抗原提呈过程中具有重要 作用，外源性抗原经过 MHC＊类途径处理、加工，形成抗原多 肽，与胞内 MHC＊类分子结合后，提呈在DCS表面。MHC＊类 分子的低表达或不表达说明DCS提呈外源性抗原的能力低下，而且 第二军医大学长征医院普通外科4 第二军医大学博士学位论文 中文摘要 DCs对抗原多肽的提呈还需要其表面表达的共刺激分子、粘附分于 的参与，TIDCS表面的共刺激分子CD80（B7l厂 粘附分子 CD54＊CAM＊）的低表达或不表达同样可以导致TIDCS的抗原提呈 能力低下，提示TIDCS可能是一种无功能或功能低下的DCS。另 外我们用 RT－PCR的方法检狈了白细胞介素 10（IL－10）mmA、 血管内皮生长因子（VEGF）mRNA及转化生长因子（TGF－p；） mRNA等三种免疫抑制因子在 14例肿瘤细胞中的表达，实验结果 表明IL一 mRNA的表达率为92．8％，VEGF mRNA的表达率为 7！．4％，TGF’下；mRNA的表达率为 64．3％，说明三种免疫抑制因 子在人肿瘤组织细胞中均有较高的表达水平，而正常胃肠道粘膜组 织中均无上述三种免疫抑制因子的表达，提示肿瘤局部有大量的肿 瘤细胞分泌的上述免疫抑制因子的存在，这些免疫抑制因子单独或 联合作用可能是造成 TIDCs表面的 MHC 11类分子、共刺激分子 CD80团74）和免疫粘附分子CD54（ICAMl）低表达或不表达的原因 之一。 体外实验我们首次通过研究人肿瘤细胞培养上清 TCSkum皿 cells suPernatans，TCS）对树突状细胞表型和功能的影响，来分析 肿瘤微环境中浸润性树突状细胞的表型和免疫学功能变化及其原 因，探讨其与免疫逃逸机制的关系。用外周血分离得到的单核细胞 分别加人IL冲、GM－CSF细胞因子，并加入三种肿瘤细胞（Hela 细胞、Lovo细胞 SMMC7721细胞）培养上清 TCSkumor cells suPernatans，TCS）和对照细胞（人成纤维细胞）培养上清体外培 养树突状细胞；另一实验组分别于第0天、第3天、第5天加入肿 瘤细胞（LW。细胞）培养上清，体外培养树突状细胞。得到的树 突状细胞F’ACS的检测结果表明，实验组DCS和对照组DCS的 MHC 11类分子（HLA—DR）和共刺激分子 CD80（B7—l）乱表 第二军医大学长征医院普通外科5 第二军医大学博士学位论文 中文摘要 达相差显著，而共刺激分子CD86（B7—2）和免疫粘附分子 uCAM—l）的表达无明显差别。且第 0天加人 TCS培养得到的 树突状细胞与第3天、第5天加