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端粒酶在脑胶质瘤中的研究

刘平  
【摘要】:目的:研究分析端粒酶活性在脑胶质瘤中的表达,通过兔疫组化检测 肿瘤的增殖标记Ki-67,初步探讨端粒酶活性水平与脑胶质瘤生 物特性的相关性及临床意义;研究端粒酶相关结构基因在不同 级别脑胶质瘤中的表达变化,分析其在脑胶质瘤发病机制中的 意义及端粒酶调控机制中的作用;分析不同级别脑胶质瘤细胞 端粒长度的变化,探讨脑胶质瘤发病机理与细胞端粒变化的关 系。 方法:采集不同级别的脑胶质瘤手术切除标本、正常脑组织及胶质瘤 细胞株,通过半定量端粒重复序列扩增(Telomere Repeat Amplification Protocol TRAP)-银染方法检测端粒酶活性 水平;通过免疫组化检测胶质瘤标本的增殖活性标记Ki-67;通 过半定量逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测端粒酶相关 结构基因,包括:人端粒酶催化亚基(Human Telomerase Catalytic Subunit,hTRT)、人端粒酶 RNA 模板(Human Telomerase RNA,hTR)、人 端 粒 酶 相 关 蛋 白 (Telomerase-associated Protein,TP1)基因表达水平;通过抽 提组织细胞的DNA,用人的端粒序列特异性探针(TTAGGG) 3进行Southern杂交,检测细胞的端粒长度,并进行比较分析。 结果:在所有胶质瘤细胞株及40例胶质瘤标本的33例(82.5%)中均 检出端粒酶活性,而在正常脑组织中无端粒酶活性的表达,不 同级别胶质瘤之间端粒酶活性水平有明显差异,端粒酶活性的 高低与Ki-67的表达呈显著正相关,脑胶质瘤端粒酶活性水平与 hTRT基因的表达呈显著正相关,而与TP1、hTR的表达无明 显相关性;在恶性胶质瘤细胞中端粒的长度明显比正常胶质细 胞缩短,端粒的长度与端粒酶活性的水平有着显著的负相关。 二 l 0 结论:端粒酶活性在脑胶质瘤中有异常表达,其活性的高低与肿瘤的 恶性程度相关,提示端粒酶活性可以作为脑胶质瘤的恶性标记 之一,hTRT基因是一个端粒酶的正调控结构基因,hTRT的表 达与细胞永生化和恶性肿瘤形成过程中的端粒酶的激活机制有 关,hTR基因是端粒酶活性必须的组分,但不影响端粒酶活性 的高低;端粒的缩短可能是脑胶质瘤进展的重要因素,端粒的 修复机制对于维持端粒的稳定性和肿瘤细胞的增殖潜能具有十 分重要的意义。


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