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系统性红斑狼疮患者雄激素受体基因表达的研究

邹俊杰  
【摘要】:系统性红斑狼疮(SLE)为一种原因不明的累及多脏器的自身免 疫性炎症性结缔组织疾病,多见于女性,男女比例为8~13:1。动 物实验已证实性激素在SLE疾病发展中的作用,将SLE样综合征新 西兰大鼠卵巢切除、或给予雄激素治疗后症状均有减轻。在人类,SLE 多发生于育龄期妇女,而且也见于雄激素不敏感性Klinefelter’s综 合征患者。说明雄激素及其受体在SLE的发生发展中可能起到一定 作用。Lahita等检测了SLE患者与正常人性激素水平的差异,发现 SLE患者血清雄激素水平显著下降。而有关SLE患者雄激素受体基 因mRNA表达尚无报道。我们以外周血白细胞为材料研究雄激素转 录激活因子AR的mRNA表达情况,以确定人外周血白细胞是否存 在AR及SLE患者AR mRNA改变及意义。 实验方法选择健康成年人,进行体检明确无心、肺、肝、肾及 内分泌疾病,抽取静脉血20毫升,分离白细胞,采用异硫氰酸胍- 苯酚-氯仿一步法抽提总RNA,毛细管转移法将RNA转移至尼龙膜 上,交联固定。α-~(32)PdATP随机引物法标记全长572bp ARcDNA探 针,杂交后放射自显影,Northern Blot测定结果显示,所有样品均 有约9.4kb 大小的杂交带,与Lubahn 等报道的人前列腺组织 ARmRNA大小相同,证实人白细胞存在AR并有mRNA表达,表 明雄激素通过AR对白细胞的功能有一定影响。 Northern Blot方法分析 AR基因的表达,特异性强,敏感性相 对低一些,所需细胞总RNA量约30ug左右,用血量较大,约20ml, 摘要-2- 不容易为志愿者所接受,使其研究受到一定限制。我们建立了RTPCR 方法检测人外周血白细胞N InRN A表达,并进一步研究了巩E患 者外周血白细胞AJlillKNA与正常对照组的差异。选择8例活动期SLE 患者,且未用糖皮质激素等药物治疗。患者均符合 1982年美国风湿 病学会(ARA)SLE分类标准。均为女性,年龄范围 17~43岁。对 照组 10例,均为女性,年龄范围 18~42岁。分离白细胞,抽提总 RNA。 进行逆转录DNA聚合酶反应,SLE患者和正常对照组均存在390hp 的目标 ARCmA片段。建3 RTPCR反应产物与 M InRNA线性关 系,比较孔E患者和正常对照组PCR产物的激光光密度值,SLE 患者白细胞 AR InRNA表达显著高于对照组。 No仙ern Blot、RT.PCR检测外周血白细胞 AR基因表达,实 验材料的收集比较方便(需用静脉血,且用量较少,RTPCR方法 敏感度高,仅需6叫 毫升),该方法的建立,对研究病理状态下雄 激素及AR的作用机制有着很重要的临床应用价值,对其它笛体激 素受体的临床研究也有重要的参考价值。 SLE患者白细胞AR InRN A表达显著升高,推测可能为AR对 血清雄激素水平降低的上调反应。Strand等根据SLE患者存在雄激 素缺乏的情况,提出用小剂量双氢睾酮(DHEA)治疗。固为长期 肾上腺皮质激素替代治疗将导致肌肉无力、萎缩及坏死,糖尿病, 向。C性肥胖,骨质疏松,血管坏死,容易发生感染等副作用;另外 大剂量肾上腺皮质激素可抑制ACTH的合成,从而影响肾上腺源雄 激素的分泌,加剧了SLE患者雄激素缺乏;利用雄激素取代肾上腺 皮质激素可避免上述情况的发生,并取得了一定的临床疗效,但还 摘要-3· 需进一步证实。有学者提出SLE所表现出来的免疫功能紊乱是由于 T辅助细胞功能过强,引起免疫调节障碍而产生大量自身抗体所致。 雄激素能够增强辅助性T细胞的功能,白细胞M InRNA表达增强 可能为 T细胞功能增强的反映,并且雄激素可能参与 SLE患者体内 大量自身抗体的形成,但缺乏更进一步的实验数据,需在以后的J 作中继续探讨。


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