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睫状神经营养因子mRNA在脊髓损伤中的表达及其对脊髓损伤的保护作用的研究

许斌  
【摘要】:睫状神经营并因于mRNA 在脊髓损伤中的表达 及其对脊髓损伤的保护作用的实验研究 脊髓损伤是一类后果严重的常见损伤,给社会和家庭带来沉重的精神和经济负 担。脊髓损伤后如何恢复其神经功能一直是医学专家努力探索的重点。近年来研究 发现,睫状神经营养因子(Ciliary Neurotrophic Factor, CNTF)对体外培养的多种神 经元具有营养作用,可以促进多种神经元的存活,包括感觉,运动,交感和副交感 神经元。周围神经损伤后,睫状神经营养因子对多种神经元具有不同程度的保护和 促进其再生作用。但对其在脊髓损伤中的作用如何研究甚少。本课题在这一方面作 了一些研究。 本研究应用多种实验技术和方法,旨在阐明二个问题:(1)CNTF是否介入了 脊髓损伤,其在脊髓损伤后的InRNA表达变化如何?(2)CNTF是否能够保护脊 髓神经元,其可能作用机制是什么?最终目的是从整体、细胞和分子水平探讨CNTF 对实验性脊髓损伤大鼠脊髓神经元的保护作用及机理,为临床应用外源性神经营养 因子治疗脊髓损伤提供一定的实验依据。 本实验的主羹珐果和结论: 1.动物模型的建立 采用较接近人类脊髓损伤的模型-Aellen氏重物坠落(Weight Drop,WD)法脊 髓损伤模型致大鼠脊髓T8中度损伤。脊髓损伤成功后,采用Yaksh法行蛛网膜下 腔置管。各组于术后同时间注入等体积的CNTF或生理盐水,按实验设计定期处死 动物,进行各项指标测定。 2.损伤大鼠脊髓CNTFmRNA表达的变化 按试剂盒说明书对标本进行RNA抽提和RT-PCR扩增,扩增产物进行凝胶电 泳,最后行计算机扫描密度定量。结果发现,对照组大鼠脊髓CNTFmRNA呈现低 表达,在脊髓损伤后CNTFmRNA的表达持续增高,至伤后3天,其表达达到高峰, -2- _——%———— 与对照组相比均有显著性差异。 3.CNll7对损伤脊髓神经元数目、乙 碱酯酶及酸性磷酸酶含量的影响 取伤段脊阮组织行Ni881染色检查,将尼氏染色切片进行计算机扫描,用电阉 和图像分析软件进行囹像采集和处理,测量神经元的数目。将冷冻伤段脊瞩组织匀 浆后,按试剂盒说明书进行AchE和ACP含量测定。结果显示:损伤后脊回神经元 数目显著减少、As含量持续下降、ACP含量升高;给予外源性Ci后神经元 数目显著增加、AchE含量下降援慢、ACP含量上升较缓,与正常对照组及生理盐 水组相比,均有显著性差异。 4.CNTF对损伤脊鹏组织含水量、局部离子含量的影响 取伤段脊回组织称取湿重,#后将标本置于烘箱中烘于并称取干重,按mott 公式计算脊鹏含水量。将干燥标本消化后,稀释并测定溶液中Na、K+、Caf\Mgl” 浓度(呶Inl人再换算成每克干重脊瞩组织中离子含量(p切口叱drywt人结果表明: 损伤组伤后伤区脊问组织含水量较对照组增加非常显著,Na+、CaZ“含量均显著增加, K+、p含量均降低(p< 0刀1入给予外源性 C灿后伤区组织含水量明显下降(p< 0刀1人M、CaZ”含量较伤后有明显下降,同时,K+、Mgl”含量也有明显回升(卜0刀1人 但仍明显高于对照组。 通过对大鼠脊回损伤前后组织中的CNyMA含量的测定,发现其在脊回损 伤后呈现高表达,表明CNIT在脊瞩损伤的修复过程中具有重要的作用;给予外源 性的CNTF后,能够反应脊囚神经功能状态的乙酞胆碱酯酶和酸性磷酸酶的含量及 脊瞩创伤性水肿均较损伤组有显著性改菩,说明CNTF对脊回神经元具有保护作用; 进一步研究表明CNTF可能踞过稳定损伤局部细胞内外离子平衡来起到保护脊回 神经元的作用的。


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