收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

人树突状细胞来源的四个新分子的克隆表达和生物学功能研究

张嘉  
【摘要】:继2000年6月人类基因组框架图绘制完成后,2001年2月研究者又宣布人类 基因组共有32亿个碱基对,约3.4万个蛋白编码基因,其数字远远低于最初预计的 14万个基因。这给我国的基因组研究带来了更大的压力,只有加快研究速度,努力 发现新基因,深入研究和探讨新分子的生物学功能以及对疾病诊断、治疗的意义, 我们才能挤身世界生物科学研究的前沿,形成具有我国自己知识产权的学术特色。 树突状细胞(Dendritic cells,DC)是人体内重要的抗原提呈细胞,本研究所对 DC的分化发育及其介导的肿瘤免疫治疗的研究工作己进行多年,并在此基础上建立 了人树突状细胞基因文库,通过大规模随机测序的方法开展了从DC中克隆新分子 的工作,从2万余条EST中发现了许多新的分子。在本课题中,我们选择其中4个 进行了克隆表达和生物学功能研究。 鸟昔酸还原酶(guanosine monophosphate reductase,GMPR)(EC 1.6.6.8)主要催化 鸟嗓吟核苷酸(GMP)向次黄嘌呤核苷酸(IMP)的转化:GMP+NADPH+2H+→IMP+ NH4+NADP+。该酶所催化的反应对维持细胞内腺嘌呤和鸟嘌呤核苷酸的平衡发挥 着重要作用。细胞内鸟嘌呤核苷酸池的含量与前髓性白血病HL-60细胞的分化密切 相关。我们从人树突状细胞cDNA文库中分离到一个新的全长cDNA,编码一个由 348个氨基酸组成的未知蛋白。该蛋白质与人鸟苷酸还原酶在氨基酸水平上有高达 79%的同源性,并暂时命名为GMPR2。Northern杂交分析显示新分子的mRNA广 泛表达于正常人体组织及多数肿瘤细胞系。将构建的真核表达载体pcDNA3.1- GMPR2用脂质体法转染COS7细胞,经瞬时表达获得myc-His融合的重组新分子蛋 白。通过生物化学方法,我们证实新分子蛋白具有催化鸟苷酸还原的酶学活性。用 同样的方法将pcDNA3.1-GMPR2转染HL-60细胞,证实其经佛波脂(TPA)诱导向单 核细胞的分化作用明显增强。因此,通过本课题的研究我们发现了一个新的人鸟苷 酸还原酶分子,并且该分子与HL-60白血病细胞的分化密切相关。 6-磷酸葡萄糖胺异构酶(glucosamine-6-phosphate isomerase,GMII)又名 6-磷酸 葡萄糖胺脱氨酶(glucosamine-6-phosphate deaminase,GMPDA)(EC 5.3.1.10),主要催 化6-磷酸葡萄糖胺分解生成果糖和氨。该反应是N-乙酚-6-磷酸葡萄糖胺分解代谢 二 博」:学位论文 Molecular cloning and characterlzatlon ofnovel proteins derived from human dendrltlc cells. 途径的最后一步,包括6-磷酸葡萄糖胺的醛酮异构和加氨或脱氨过程。人GNPI的 生物学功能尚不明确。有研究者从仓鼠的精细胞中克隆纯化到一种可溶性蛋白 *scillin),该蛋白经微注射入小鼠卵细胞内可诱发钙离子浓度的震荡,这一变化与 卵细胞受精时所发生的变化相同。而Oscillin在氨基酸水平上与细菌的GNPI有高达 53%的同源性。从人树突状细胞基因文库中我们分离到一个新的全长CDNA克隆, 编码一个由276个氨基酸组成的未知蛋白。该蛋白质与人个磷酸葡萄糖胺异构酶和 Oscillin在氨基酸水平上均有高达87%的同源性,暂时命名为GamIZ。Northern 杂 交分析显示新分子的znRNA广泛表达于正常人体组织及多数肿瘤细胞系。其组织表 达谱与GNPI不同。通过与前一分子相同的技术路线,我们表达了GWIZ的重组蛋 白,并通过生化法证实该新分子重组蛋白具有催化6-磷酸葡萄糖胺分解生成果糖的 酶学活性。因此,我们认为该新分子是一个新的人卜磷酸葡萄糖胺异构酶,可能是 与GNPI分布在不同组织和肿瘤细胞,并发挥相同催化作用的同功酶。 脂肪酸在线粒体内的p氧化是细胞能量的主要来源。脂肪酚辅酶A脱氢酶归cyl- coe…e A dehydrogenase,ACDs)主要催化脂肪酸在线粒体内p氧化的第一步,是脂 肪酸氧化的限速酶。特长链酚辅酶 A脱氢酶WLCAD*EC.3.99.13)主要催化含 14 20个碳原子的特长链酚辅酶A的氧化。由于长链脂肪酸是人类心脏、肝脏、骨骼肌 等组织的主要能源,因此,VLCAD的缺陷常导致严重的新生儿原发性心肌病 kardiomyopathyX 不明原因的新生儿碎死、低酮性低血糖、肝功能衰竭等。我们从 人树突状细胞基因文库中分离出一个新的ACDS家族的同源基因,暂时命名为 ACAD习。该基因包含一个 1866 hp的完整阅读框,共编码 621个氨基酸。ACAD习 与VLCAD有65%的同源性。ACAD-9的W优势表达于人的心脏,骨骼肌、 脑、肾脏及肝脏等组织。通过生化方法证实ACAD-9可以催化软脂酚辅酶A和硬脂 酚辅酶A的p氧化。我们推测,ACAD习是ACDS家族的一个新成员,该基因的突变 可能与新生儿碎死及原发性心肌病的发病密切相关。 细胞死亡有两种不同的机制,坏死和凋亡。它们在细胞形态学和生物化学上有 着明确的区分标准。TNF-0既可以诱导小鼠成纤维肉瘤L929细胞发生坏死,也可以 诱导其发生凋亡。据推测,两种不同细胞死亡方式可能分别山不同的TNF抵抗蛋白 进厅调节。我们分离出一个新的CDNA克隆,它


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李筠,叶雪玲;鸡心线粒体辅酶Q-细胞色素c还原酶的分离及性质研究[J];Acta Biochimica et Biophysica Sinica;1984年05期
2 范映辛,吴嘉炜,周筠梅;二氢叶酸还原酶结合底物的去除[J];生物化学与生物物理进展;1996年05期
3 俞秀玲,朱忠勇;猪肝微粒体NADH-细胞色素b_5还原酶的纯化及特性分析[J];生物化学与生物物理学报;1994年03期
4 徐建兴,古练权;3-硝基-N-甲基水杨酰胺抑制琥珀酸细胞色素c还原酶的动力学特征[J];中国生物化学与分子生物学报;1987年01期
5 王树立,赵勤,黄郁,郭成才;菊花等中药水煎剂对离体大鼠肝细胞微粒体羟甲基戊二酰辅酶A还原酶的作用机理[J];中国生物化学与分子生物学报;1988年06期
6 余国滔;异化亚硫酸盐还原酶desulfoviridin中的sirohydrochlorin有色素是一个双阳离子的证据[J];光散射学报;1997年Z1期
7 李子超;肖娜;李昀锴;王丽娜;虞英杰;徐明芳;;沼泽红假单胞菌对亚硒酸盐还原脱毒的研究[J];微生物学通报;2011年05期
8 张耀平;严清明;;恒河猴原发性心肌病伴有肝癌死亡一例[J];实验动物与比较医学;1987年02期
9 濮元洪;;鸟苷产生菌的选育和发酵条件(译文综述)[J];发酵科技通讯;1981年04期
10 濮元洪;;鸟苷产生突变株的筛选[J];发酵科技通讯;1985年Z1期
11 杨晓峰,申鹏飞;5α还原酶对前列腺调控的分子生物学研究[J];中华泌尿外科杂志;1997年03期
12 惠荪;台湾筛选异构酶高产菌株[J];工业微生物;1994年01期
13 曹雪涛;免疫新分子的发现及其研究进展[J];中国免疫学杂志;1999年06期
14 刘万臣,董朝辉;HMG-CoA还原酶及其抑制剂[J];中国兽医学报;1995年02期
15 糜蓉娟,吴海珍,叶江,张惠展,叶勤;大肠杆菌guaC基因的克隆及高效表达[J];华东理工大学学报;2003年03期
16 陈策实,尹光琳;从葡萄糖一步发酵生产维生素C的前体2-酮基-L-古龙酸研究进展[J];生物工程进展;2000年05期
17 肖亚中,伍传金,崔涛;木糖异构酶的结构及蛋白质工程[J];生物工程进展;1994年03期
18 董朝辉,张玉静,刘万臣,崔建华,欧阳红生,赵建军,汪玉松;鸡肝脏β-羟-β-甲戊二酸单酰辅酶A还原酶的提纯和性质[J];中国兽医学报;1997年03期
19 刘剑;;pH值对鸟苷发酵的影响[J];科技风;2010年14期
20 De Vries WC;黄桦;;全人工心脏的临床应用(摘译)[J];暨南大学学报;1985年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 阮密密;刘光明;蔡秋凤;曹敏杰;;白鲢肌肉中葡萄糖-6-磷酸异构酶的基因克隆及序列分析[A];中国食品科学技术学会第八届年会暨第六届东西方食品业高层论坛论文摘要集[C];2011年
2 阮密密;刘光明;蔡秋凤;曹敏杰;;白鲢肌肉中葡萄糖-6-磷酸异构酶的基因克隆及序列分析[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
3 于益芝;曹雪涛;章卫平;刘书逊;张明徽;唐玲;;一种TNF-a家族新分子对树突状细胞分化发育的影响[A];西部大开发 科教先行与可持续发展——中国科协2000年学术年会文集[C];2000年
4 王晓健;李楠;陈涛涌;孙红颖;王宝梅;王青青;夏大静;张立煌;曹雪涛;;来源于人骨髓基质细胞的新分子PEBP5的克隆与生物学功能的初步研究[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
5 李楠;章卫平;万涛;陈涛涌;曹雪涛;;来源于人骨髓基质细胞的新分子PHDP的克隆与生物学功能的初步研究[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
6 王晓健;李楠;陈涛涌;王宝梅;孙红颖;王青青;夏大静;张立煌;曹雪涛;;来源于人骨髓基质细胞的新分子IPP—2的克隆与生物学功能的初步研究[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
7 赵贞;彭艺;郝淑凤;曾宗浩;王志珍;;二聚化作用赋予分子伴侣和异构酶活性[A];中国蛋白质组学第二届学术大会论文摘要论文集[C];2004年
8 刘世熠;叶蕴华;;促醒新分子和老年脑萎缩性疾病[A];中国睡眠研究会第二届学术年会论著汇编[C];2001年
9 朱菁萍;曾志雄;周明;周宜开;赵开弘;;藻红蓝蛋白连接异构酶对几种脱辅基藻胆蛋白的催化作用[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年
10 万涛;李楠;王闻雅;周向阳;杨峰;吴艳峰;曹雪涛;;树突状细胞来源的热休克蛋白新分子的发现及其免疫佐剂功能研究[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张嘉;人树突状细胞来源的四个新分子的克隆表达和生物学功能研究[D];第二军医大学;2001年
2 黄超群;人类SCDR10B、LHFPL1和CYPJ基因的克隆及其编码蛋白的特征与功能研究[D];复旦大学;2004年
3 程丽芳;解纤维热酸菌L-阿拉伯糖异构酶的克隆表达、性质研究及分子改造[D];江南大学;2010年
4 薛丽君;p53-p21/p27通路调节人核糖核苷酸还原酶和吉西他滨抗癌耐药机制的研究[D];浙江大学;2004年
5 李楠;人树突状细胞来源的新分子Siglec-10和人骨髓基质细胞来源的新分子PHDP的克隆与功能研究[D];第二军医大学;2002年
6 伍学焱;雄激素受体结合分析和5α-还原酶活性测定方法的建立及初步临床应用[D];中国协和医科大学;1998年
7 李群睿;玉米类胡萝卜素异构酶和番茄红素ε-环化酶基因的克隆与鉴定[D];东北师范大学;2010年
8 孙红颖;来源于人树突状细胞和骨髓基质细胞的两个新分子CRL2和CLM的克隆与功能的研究[D];浙江大学;2004年
9 刘学端;海底及污染环境中微生物群落分子多样性研究[D];湖南农业大学;2003年
10 唐大年;人肝癌细胞耐药性与醛糖还原酶相似基因-1关系的实验研究[D];中南大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李鋆;5’-鸟苷酸二钠结晶工艺的研究[D];华南理工大学;2010年
2 刘琦;表达D-甘露糖异构酶的重组大肠杆菌的构建及酶学性质的研究[D];北京化工大学;2010年
3 姚健;灵芝异戊二烯焦磷酸异构酶基因的克隆及其表达特性的研究[D];南京农业大学;2011年
4 童煜;HMG-GoA还原酶基因多态性与冠心病的相关性研究[D];四川大学;2003年
5 高小倩;大肠杆菌甘露糖异构酶(MI)基因克隆及功能研究[D];河北科技大学;2010年
6 张留权;联合β-半乳糖苷酶和L-阿拉伯糖异构酶酶法合成D-塔格糖的研究[D];华东理工大学;2012年
7 张雪玲;胆固醇合成抑制剂洛伐他汀对HL-60细胞增殖和凋亡的影响及机制研究[D];第三军医大学;2002年
8 杨欣;大肠杆菌DH10B甘露糖-6-磷酸异构酶表达与功能鉴定及转cry3A基因马铃薯抗性表达分析[D];山西大学;2010年
9 吴坤;弓形虫1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶(DXR)基因的克隆、表达及生化特性研究[D];南京农业大学;2010年
10 周海燕;多巴反应性肌张力障碍患者鸟苷酸环化水解酶Ⅰ基因突变研究[D];天津医科大学;2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张骁;束梅英;治疗BPH新药度他特利[N];中国医药报;2005年
2 叶书宏;墨西哥合成可开发治疗老年痴呆症药物的新分子[N];医药经济报;2004年
3 于峰;当心!感冒会“伤心”[N];保健时报;2004年
4 本报记者 赵晴晴;年纪轻轻为何老脱发?[N];健康时报;2004年
5 冯丹龙;王勋彪;研发开始:寻找“正确化合物”[N];中国劳动保障报;2002年
6 齐继成;2001年度美国FDA批准的新分子本体(NMEs)[N];医药经济报;2002年
7 李山;分子伴侣和异构酶合作机理揭开[N];科技日报;2009年
8 中南大学湘雅三医院医疗美容中心毛发移植室 陈铁夫;男性脂溢性脱发的治疗[N];大众卫生报;2005年
9 张良怡;鸡精和味精差别不大[N];大众科技报;2006年
10 健康时报记者  杨锐;脱发要从“根儿”上找原因[N];健康时报;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978