收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

抑癌基因PTEN在人原发性肝细胞性肝癌中的表达、突变及其生物学意义

万兴旺  
【摘要】:原发性肝细胞性肝癌(简称原发性肝癌,HCC)是我国最常见、最具有危 害性的恶性肿瘤之一,其发生和发展是一多基因参与和受多因素影响的复杂过 程。由蛋白质酪氨酸激酶和蛋白质酪氨酸磷酸酶精确调控的蛋白质酪氨酸磷酸 化水平在此过程中起重要作用。由于很多蛋白质酪氨酸激酶都是由原癌基因编 码的,因此一直以来有人推论某些蛋白质酪氨酸磷酸酶可能在体内起抑癌基因 的作用,但这个结论直到PTEN/MMACl/TEP1(后简称PTEN)基因发现后才 得到证实。作为一个编码蛋白酪氨酸磷酸酶的抑癌基因,PTEN自1997年3月 被国际上三个研究小组相继独立地克隆后立即成为细胞信号转导、分子生物学 和肿瘤病理学等领域的研究热点,是继p53基因发现之后的又一个“明星分子”。 目前的研究认为,PTEN基因的突变与很多恶性肿瘤如神经胶质母细胞瘤、前 列腺癌、黑色素瘤、乳腺癌等的发生密切相关。然而对于在原发性肝癌发生过 程中是否有PTEN基因的突变目前报道很少,至于是否有表达水平的改变以及 将其转染表达缺失的肝癌细胞后对肝癌细胞生物学行为有无直接影响,目前还 未见文献报道。 本研究课题旨在通过应用PCR-SSCP、Northern Blot、Western Blot、免疫 组织化学技术以及基因转染等技术,分析原发性肝癌组织和肝癌细胞基因组 DNA内是否存在PTEN基因突变,初步探讨PTEN基因突变与原发性肝癌发生 的关系,然后从mRNA和蛋白表达水平研究原发性肝癌发生过程中是否有PTEN 表达水平的改变,进一步推理PTEN基因在原发性肝癌发生过程中的可能作用; 接着采用Northern Blot和Western Blot技术,筛选出一个PTEN表达缺失的肝 癌细胞系,直接观察PTEN基因转染该肝癌细胞系后对其细胞生物学行为(增 互 98级博士毕业论文 抑癌基因PTEN在人原发性肝细胞性肝癌中的表达、突变及其生物学意义 一文行男 殖、软琼脂克隆形成、粘附能力、迁移能力)的影响以及它对p27抑’、MMP上、 TIMP-二等表达的影响,从而阐明PTEN基因在原发性肝癌中的作用及其可能分 子机制。 采用PCRSSCP检测的结果显示:在60例HCC标本中,发现5类共6个 突变位点的存在。其中,出现在外显子内的突变只有一类,即在2例标本的第 4外显子中y坝翼下游u吵处检测到C+T的突变旧903+T人 该突变导 致了PIEN蛋白第84位氨基酸由精氨酸变为赖氨酸。另外四类均位于内含子中, 包括在第 4外显子丁瓜翼下游 67 hp处检测到的一个 G+T点突变柠 25 G— T卜在第 6外显子 3’坝翼下游 58 hp处检测到的一个 T+A点突变厂]0285 T一 N、在第8外显子5’坝翼上游29加处检测到的一个C+T点突变厂 8833 C— T卜在第8外显子5’池翼上游82加处检测到一个A+C点突变门 878o A-q。 对5株肝癌细胞系基因组DNA检测的结果显示无PTEN基因的突变存在。 采用Northern杂交结果显示:PTEN InRNA在肝癌组织内的表达水平均显 著低于对应的癌旁肝组织内表达水平。进一步的分析发现,PTEN 55 kb和 44 kb 的转录子表达水平的降低与血清中AFP水平、有无癌栓、有无卫星灶及病理学 分级呈负相关中<0刀5人 而与年龄、血清HBSAg状态、肿瘤大小、组织类型、 有无肝硬化、有无包膜无显著相关性:二.4kb 的转录子表达水平降低与血清中 HBSAg状态、有无癌栓、有无卫星灶呈负相关中功刀5人 而与病理学分级、 年龄、血清AFP水平、肿瘤大小、组织类型、有无肝硬化、有无包膜无显著相 关性;但对 1.8 kb转录子的分析结果表明其表达水平的降低只与肝癌的病理学 分级呈负相关中<0刀5人 与其它病理学指标无显著相关性。其中,733%的患 者Ph3:N 2.4 kb的tnRNA转录子在癌旁组织内的表达显著高干对应的肝癌组织 中叼刀5卜有突变组***N InKNInKNA平均表达水平与无突变组P hhN InRNInRNA均无 显著性差异中>0刀5卜然而,在第4外显子内检测到突变的两例HCC标本内, PTEN InRNA 5.5 kb的转录子在癌组织内的表达水平显著高于癌旁组织。 PTEN蛋白在肝癌组织中的阳性表达与患者年龄年龄、血清HBSAg状态、 肿瘤大小、组织类型、有无肝硬化、有无包膜等无相关性,但与病理学分级、 有无癌栓和有无突变呈负相关中功刀5人 采用基因转染技术将PTEN基因转染肝癌细胞株Hub7发现:PTEN基因 转染使p7抑‘表达水平显著升高中功刀5人阻滞讪卜7细胞周期进展,抑制HU卜7 298级傅士毕业论文 抑癌基因pcI7N在人原发性肝细胞性肝癌中的表达、突变及其生物学意义 中文打罗 细胞生长增殖和克隆形成能力;而且PIEN显著降低Hub7表达M:Nl,上的水 平,而升高TIMP-2的表达,从而抑制Hub7的浸润迁移能力。另外,PTEN还 可选择性抑制Hub7细胞与特异性粘附底物的粘附作用。 本研究结果表明


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 何安光,周宝森,姜彦多,朱继江,王恩华;肺癌中癌基因、抑癌基因的分子流行病学研究[J];肿瘤;1995年S1期
2 何渝军;癌基因、抑癌基因与白血病发生[J];国外医学.输血及血液学分册;1999年03期
3 张增锋;抑癌基因p14~(ARF)、p57~(KIP2)与肿瘤关系研究进展[J];广西医学;2003年09期
4 孙学英,王建立,唐波,刘凤军,乔海泉,姜洪池;抑癌基因VHL治疗实体肿瘤的实验研究[J];中华胃肠外科杂志;2005年03期
5 王枫,孙晓江;细胞老化和p53基因的研究进展[J];中国老年学杂志;2005年06期
6 胡宝成;;脆性组氨酸三联体基因研究进展[J];生物技术通讯;2005年06期
7 姜晓华;赵咏桔;;多内分泌腺瘤病1型的研究进展[J];国际内分泌代谢杂志;2005年S1期
8 任琛琛;张连民;边爱平;;P33~(ING1b)、P53与HPV_(16/18)在宫颈癌中表达的相关性[J];中国妇幼保健;2006年08期
9 王玉才;于正洪;陈龙邦;;RASSF1A基因与肺癌关系的研究进展[J];临床肿瘤学杂志;2006年12期
10 王莹;刘曼华;;基因甲基化在卵巢癌中的研究进展[J];国外医学(妇产科学分册);2007年05期
11 余文熙;郑水儿;姚阳;;骨肉瘤分子发病学的研究进展[J];癌症进展;2008年06期
12 戴益琛;林志翔;姜元芹;陈章兴;谢军培;曾伟;傅育卡;;黑斑息肉综合征肿瘤相关基因初步筛选[J];临床军医杂志;2010年05期
13 王亚丽;王红兵;;去甲基化在肿瘤治疗中的研究进展[J];医学综述;2010年22期
14 章静波;癌基因与抑癌基因对细胞分化的调节[J];基础医学与临床;1991年06期
15 顾健人;抑癌基因及人原发性肝癌中抑癌基因研究进展(Ⅱ)[J];肿瘤;1995年03期
16 傅继粱;癌和基因突变与染色体畸变(下)[J];中华医学遗传学杂志;1995年01期
17 白素娟;喉癌抑癌基因的研究进展[J];国外医学.耳鼻咽喉科学分册;1996年05期
18 汪荣泉,周子成,杨建民,房殿春;肝癌患者p53蛋白表达及其临床病理意义[J];重庆医学;1997年05期
19 莫益群;郑树;沈德钧;蔡心涵;曹江;朱丽君;;p53及HSU17714 mRNA在大肠癌及正常肠粘膜中的表达研究[J];癌症;1997年01期
20 徐春,王素菊,李江源;癌基因、抑癌基因与垂体腺瘤[J];武警医学;2000年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 郭双平;于文亮;王丽;李擒龙;王知力;;抑癌基因PTEN在肝细胞肝癌中的异常及其对肝癌细胞增殖和凋亡调控作用的研究[A];中华医学会病理学分会2005年学术年会论文汇编[C];2005年
2 肖自安;张才云;谢鼎华;;癌基因stathmin和抑癌基因Cx26在喉鳞癌中的表达和相关性及临床意义[A];中华医学会第十次全国耳鼻咽喉-头颈外科学术会议论文汇编(上)[C];2007年
3 高飞;张蘋;周垂贤;王群;朱法良;马春红;孙汶生;张利宁;;新抑癌基因PDCD4在胶质瘤中的表达研究[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年
4 肖秀英;周晓燕;颜歌;孙孟红;杜祥;;用比较基因组杂交分析散发性结直肠癌中染色体基因组的变化特征及意义[A];中华医学会病理学分会2006年学术年会论文汇编[C];2006年
5 张贵宇;李璐;张友忠;;抑癌基因PTEN、癌基因MDM2在卵巢癌的表达[A];中华医学会第九次全国妇科肿瘤学术会议论文汇编[C];2006年
6 黄茜;董长垣;陈冬峨;陈华;宋麒;;P16基因5′CpG岛甲基化与原发性肝癌相关性研究的Meta分析[A];2006年度学术研讨会论文摘要汇编[C];2006年
7 周祥福;温机灵;张涛;王林;周琦;;抑癌基因RUNX3在膀胱癌T24细胞株中的表达以及对凋亡的影响[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
8 温机灵;陆佳荪;温晓飞;仇广明;陈兴屹;陈卫华;王学雷;王跃闽;;转染RUNX3抑癌基因对膀胱癌T24细胞株凋亡的影响[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
9 郭永连;周四维;张小平;;PTEN依赖其磷酸酶活性诱导膀胱癌细胞株BIU-87凋亡[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
10 甘勇;;抑癌基因甲基化的检测方法[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王亚柱;DCC基因缺失促使表达P230~(Bcr/Abl)造血细胞恶性转化的研究[D];中国医科大学;2004年
2 张延平;细胞凋亡及其相关基因在鼻腔鼻窦恶性肿瘤中表达的临床意义的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2004年
3 冯骆;抑制人食管癌细胞系恶性生长的DNA序列的分离与鉴定[D];中国协和医科大学;1989年
4 王大庆;NES1基因在眼睑基底细胞癌中的表达及其外显子3甲基化状况的实验研究[D];四川大学;2006年
5 马裕;IGFBP-rP1与结直肠癌、Ⅱ型糖尿病关系的研究[D];浙江大学;2008年
6 朱玲;异鼠李素体内外抗肿瘤作用及其机制的研究[D];四川大学;2005年
7 刘付宝;胆道癌全基因组杂交分析的研究[D];浙江大学;2006年
8 赵美蓉;抑癌基因产物Rb蛋白在乳腺癌中的表达及其意义[D];吉林大学;2006年
9 高飞;新的抑癌基因PDCD4在人神经胶质瘤中的缺失及其机制研究[D];山东大学;2008年
10 姚庆君;细胞增殖负性因子p16和Op18在烧伤愈合及疤痕形成中作用及机理[D];第四军医大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 苏富琴;复合多糖抗肿瘤增效减毒作用的实验研究[D];黑龙江中医药大学;2004年
2 章烨;乳腺癌中抑癌基因p33~(ING1b)的研究[D];第二军医大学;2004年
3 卢德成;肿瘤增殖抗原(Ki67)和抑癌基因(P16)在肾上腺皮质肿瘤组织中的表达及意义[D];广西医科大学;2004年
4 陈心锐;抑癌基因P27在肝癌的表达及意义[D];青岛大学;2001年
5 黄裕兵;弱碱性抑癌液调控癌细胞生长及消亡的作用研究[D];重庆医科大学;2013年
6 赵海岩;膀胱移行细胞癌微卫星分析及相关抑癌基因的研究[D];山西医科大学;2004年
7 王旭光;微卫星分析在膀胱癌抑癌基因杂合性丢失中的应用[D];天津医科大学;2004年
8 孙文斌;p12~(doc-1)蛋白抗原肽抗体制备及应用[D];第四军医大学;2004年
9 胡少为;胃癌发生过程中Hp感染与错配修复基因及抑癌基因表达关系的研究[D];大连医科大学;2004年
10 刘娜;抑癌候选基因NDRG2在某些肿瘤细胞系与乳腺肿瘤组织中表达降低的原因分析[D];第四军医大学;2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 金振蓉 通讯员 郝成涛;我国科学家发现干扰抑癌基因新型蛋白质[N];光明日报;2009年
2 通讯员 郝成涛 特约记者 吴志军;可选择性干扰抑癌基因蛋白质被发现[N];健康报;2009年
3 记者 张建琛 通讯员 李静;激活“警察”决定细胞“生死”[N];科技日报;2009年
4 记者 邰举;抑癌基因p53活性调控机制有新说[N];科技日报;2009年
5 毛可斌 陈旻;基因检测可早期发现肺癌[N];健康报;2002年
6 北京大学临床肿瘤学院 北京肿瘤研究所 柯杨;癌基因/抑癌基因研究进展[N];科技日报;2002年
7 记者 林世雄 通讯员 李静;厦大癌症研究取得突破[N];福建日报;2009年
8 张中桥;卵巢癌与抑癌基因缺失相关[N];健康报;2000年
9 赵强;杨声瑞;抑癌基因P73可能是致癌基因[N];中国医药报;2004年
10 施晓慧;人类距攻克癌症还有多远[N];科技日报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978