收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

钾通道活性与培养大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡关系的研究

姚小鹏  
【摘要】:目的:低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)是 呼吸系统常见病症,其病理基础是肺小动脉收缩反应增强和结构重建。近 年通过膜片钳技术,发现肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)钾通道在急慢性缺氧时活性降低是导致平滑肌收缩 的重要原因。HPH血管结构重建过程中,PASMCs增殖占有重要地位,而 血管壁的构成由细胞增殖和细胞凋亡之间的平衡决定,因此PASMCs凋亡 的作用同样不可忽视。有作者根据抑制钾通道活性可使膜电位降低、电压 依赖性钙通道开放及Ca2+内流增加,推测钾通道活性降低很可能在 PASMCs增殖过程中起重要作用。一氧化氮(nitric oxide,NO)具有开放 PASMCs钾通道的作用,同时又能影响其增殖和凋亡;胸腺细胞、恶性星 形细胞瘤细胞、皮质神经元细胞等的凋亡都与钾通道活性有关;钾通道开 放剂可以明显减轻HPH的病理改变。是否可以由此推断出钾通道活性改变 在PASMCs增殖和凋亡过程中同样起着重要作用呢?本实验就是想通过观 察钾通道阻断剂、开放剂、NO对培养PASMCs钾通道活性以及增殖和凋 亡的影响来明确这一问题。 方法: (1)分离和培养大鼠PASMCs显微镜下摘取大鼠肺内肺动脉,以含胶 原酶、弹性蛋白酶的无钙Hank's液消化细胞并以10%FCS PRMI-1640进行 培养,免疫组化法鉴定PASMCs纯度。 (2)急性分离和培养的PASMCs钾通道特性及开放剂、阻断剂、NO对 其的作用采用全细胞式膜片钳技术进行研究,各种不同浓度的钾通道阻 断剂、开放剂以及NO供体溶液通过灌流系统以1.5~2ml/min速度给药。 电流记录采用电压钳制(Voltage clamp)方式,维持电位在-70mV,从-40mV 至+80mV,每隔10mV阶跃去极化一次,脉冲时间为250ms,间隔时间为 10s,引出外向钾电流。 (3)钾通道阻断剂、开放剂、NO对PASMCs增殖和凋亡的作用,以及 —— -2- 纫 昙 钾通道阻断剂、开放剂对PASMCs增殖和凋亡作用与钙通道的关系 培养 5叶 0代的 PASMCS加人不同浓度的上述药物后,以非同位素增殖试剂盒测 定 A490历30值反映细胞数,以’H-TdR掺入法测定 cpm值反映 DNA合成, 以流式细胞仪测定细胞周期。培养 5叫 0代的 PASMCS同时加入钾通道阻 断剂和钙通道阻断剂,或同时加入两种通道开放剂,上述相同方法检测细 胞增殖。 培养 5叶 0代的 PASMCs加入不同浓度的上述药物后,以 HE染色、荧 光显微镜、Annexin V凋亡检测试剂盒流式细胞仪方法检测细胞凋亡。培养 5叶 0代的 PASMCS同时加入钾通道开放剂和钙通道开放剂,流式细胞仪检 测细胞凋亡。 结果: 山联合使用胶原酶和弹性蛋自酶可快速获得活力较好的PA S M C S,培 养细胞的纯度经免疫组化法鉴定达98%。 (2)膜片钳实验发现急性分离的PASMCs钾电流(I)在+60mV 时为 2001.90土332.14pA,培养 PASMCS IK在十60*V时为 633* 士sl.47pA,两者 相差非常显著(p<0刀 1人 Kv通道特异性阻断剂 4AP在 smmol几浓度时使 Ix在+60mV时减小为 242*7土33*ZpA,与对照组相差非常显著(p<0*1)。 10mmol/L TEA在+60mV使 Ix减小到302.26土31.20pA,20mmol/L时减小 到 100* 士10.18pA,均与对照组有非常显著差异(p<0*1)。100if h。I几 的钾通道开放剂Pin和NO供体SNAP在+60mV-时分别使IK升高到1223.54 土门 石spA和899玉 土48.63pA,与对照组有非常显著差异(p<0.of)。 u)Kv通道阻断剂个*P浓度在>2.smm*几时有明显的细胞毒性作用, 而<2.smmol几时其A490历30和cpm值与对照组无显著差异。TEA在3 10mmol/L时其 A490/630和 cpm值均高于对照组(p<0.05或 0*1),但当 其浓度>25mmol几时,出现与4-*P类似的细胞毒性作用,只是程度稍轻。 25 umol/L—500 umol儿的 Pin和 SNAP呈剂量依赖性地减少 10 %FCS培养 PASMCS的A490/630和CpC值,与对照组比较相差非常显著(p<0刀1)。 500 umol几的nn和 SNAP非常显著地增加 GVG;期细胞比例,减少 S期和 G。/M期细胞比例。TEA和钙通道阻断剂Nif同时使用时,除20mmol/L组 使DNA合成显著增加外,其余浓度与对照组均无差异。钙通道开放剂Bay —— -3- 绚 昙 一 可以明显抑制 Pin对 PASMCs增殖的作用 巾<0.01人 HE染色和荧光显微镜检查经Nn和SNAP处理的PASMCs,均观察到 典型特征的凋亡细胞。流式细胞仪检?


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 肖欣荣;低氧性肺血管收缩反应研究进展[J];国外医学.呼吸系统分册;1998年03期
2 金肆,王迪浔,孙秉庸;K~+通道在正常与慢性低氧大鼠低氧性肺血管收缩反应中的作用[J];中国病理生理杂志;2001年09期
3 肖欣荣,陈文彬,程德云;慢性缺氧抑制肺动脉平滑肌细胞钾通道活性[J];中华结核和呼吸杂志;1998年11期
4 陈文彬!610041成都,程德云!610041成都,杜国清!610041成都;低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞钾通道基因表达的研究[J];中华内科杂志;2000年06期
5 黎俊;罗和生;何小谷;;维生素K_3通过钙依赖钾通道影响豚鼠结肠平滑肌收缩[J];中华医学杂志;2006年28期
6 开丽,王中峰;钩藤碱对大鼠肺动脉平滑肌细胞钙激活钾通道的影响[J];中国药理学与毒理学杂志;1999年01期
7 余国膺;Ang Ⅱ通过AT_2受体及钙活化的钾通道(Bkca)松弛微血管[J];中国心脏起搏与心电生理杂志;2001年03期
8 洪志刚,金肆,孔炜,王迪浔,陈琪玲,孙秉庸;慢性缺氧对大鼠肺内动脉平滑肌细胞Kv1.3、Kv2.1、Kv3.1钾通道基因在急性缺氧时表达的影响[J];中国病理生理杂志;2002年10期
9 马虹,何建桂;钾通道开放剂在心血管疾病中的应用进展[J];临床内科杂志;1996年03期
10 程德云,陈文彬,肖欣荣;Cromakalim 阻断内皮素-1介导肺动脉高压的研究[J];华西医科大学学报;1998年01期
11 沈建中,郑秀凤;血管平滑肌钙激活钾通道及其调节机制[J];中国药理学通报;1998年06期
12 范梦柏,赵进明,王子林,秦建平;缺血预处理中ATP敏感性钾通道的作用[J];山西临床医药;1998年03期
13 李明华,刘龙,张贵卿;钾通道阻滞剂及Ⅲ类抗心律失常药[J];新乡医学院学报;1998年02期
14 王唯,王逸平,孙伟康;钾通道开放剂尼可地尔和钾通道阻断剂氯化铯对缺氧引起离体大鼠肺动脉收缩反应的影响[J];中国药理学通报;1999年06期
15 郭连峰,王雯,张立克;钾通道阻滞剂对缺血/再灌注室性心律失常的影响[J];首都医科大学学报;1999年02期
16 洪志刚,王迪浔,胡清华,陈琪玲,孙秉庸;钾离子通道在大鼠慢性低氧所致肺血管低反应中的作用[J];中国病理生理杂志;2001年10期
17 叶春玲,沈兵,吕艳青,钟玲,熊爱华,蒋家华;链脲佐菌素诱导的糖尿病早期小鼠胸主动脉钾通道变化[J];中国病理生理杂志;2003年05期
18 樊再雯,张珍祥,徐永健;钾通道对大鼠肺动脉平滑肌细胞[Ca~(2+)]_i的调节[J];中国病理生理杂志;2004年02期
19 杜以梅,唐明,刘长金,洪志刚,柯琴梅,狄久芳,骆红艳,胡谋先,胡新武,席姣娅,唐碧,Jurgen Hescheler;Kv1.2、Kv1.5、Kv2.1钾通道在缺氧性肺血管收缩中的作用[J];中国病理生理杂志;2004年09期
20 张标;佟琳;曾晓荣;刘智飞;杨艳;周光纪;张兆强;;心房颤动患者心房肌钾电流的研究[J];中国循环杂志;2005年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 魏晓莉;孙洪良;华南;张诚;闫海涛;郑建全;;ZC88阻断HERG钾通道抑制肿瘤细胞增殖[A];2011医学科学前沿论坛第十二届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2011年
2 贾大林;齐国先;曾定尹;;ATP敏感性钾通道开放剂克罗卡林、JTV和KRN对大鼠冠状动脉流量及心功能的影响[A];中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2004年
3 张少华;;不同剂量4-AP对气道反应性的影响[A];湖北省暨武汉市病理生理学会第十二届学术年会论文汇编[C];2004年
4 周逸;唐其柱;史锡滕;王滕;付金容;;葛根素对豚鼠心肌线粒体ATP敏感性钾通道的作用[A];中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2004年
5 赵鸿;;大电导钾通道(BK)在创伤性脑损伤神经细胞钙超载机制中的作用[A];中华医学会急诊医学分会第十三次全国急诊医学学术年会大会论文集[C];2010年
6 王宁波;汪溪洁;马璟;;新型酪氨酸酶抑制剂PA1106对hERG钾通道电生理功能的影响[A];中国毒理学会第三届中青年学者科技论坛暨2011年全国前列腺药理毒理学研讨会论文集[C];2011年
7 潘红阳;高琴;陆源;夏强;;钙激活钾通道的开放参与葛根素的心肌保护作用[A];中国生理学会第五届全国心血管、呼吸和肾脏生理学学术会议论文摘要汇编[C];2005年
8 王中峰;施玉樑;;对钾通道的阻遏与抗肉毒效应[A];2003’离子通道、受体与信号转导专题研讨会专辑[C];2003年
9 罗兴林;杨艳;李秀芹;;主动脉平滑肌钙激活钾通道增龄变化的实验研究[A];第七届全国老年医学学术会议暨海内外华人老年医学学术会议论文汇编[C];2004年
10 李璐;李建国;;酮色林阻断Kv1.3钾通道和HERG钾通道的作用机制研究[A];第三届重症医学大会论文汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 姚小鹏;钾通道活性与培养大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡关系的研究[D];第二军医大学;2001年
2 孙洪良;4-氨基哌啶类化合物ZC88抗肿瘤活性及机制的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
3 杨林杰;ClC-3氯通道和IK1钾通道在细胞容积调节和迁移中的作用[D];暨南大学;2012年
4 康劲松;淋巴细胞钾通道在应激引起的神经免疫调节变化中的作用[D];吉林大学;2005年
5 胡红玲;线粒体膜ATP敏感钾通道在缺氧性肺动脉平滑肌细胞增殖/凋亡失衡中的作用[D];华中科技大学;2007年
6 徐仁德;CD4~+CD28~(null)T细胞钾通道作为急性冠状动脉综合征患者免疫调节靶点的研究[D];华中科技大学;2012年
7 张丽平;稀土离子对NIH3T3和MC3T3细胞增殖及细胞膜钾通道的作用研究[D];山西大学;2010年
8 田苗;大鼠视网膜无长突细胞上离子通道的表达及其调制[D];青岛大学;2005年
9 张雅兰;中枢钾通道亚型的表达及脑功能的研究[D];中国协和医科大学;1999年
10 邹安若;心肌萎缩对大鼠心肌移植细胞钾通道的影响[D];华中科技大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 庄宁宁;氧化苦参碱对心室肌细胞膜钠、钾、钙离子通道电流影响的研究[D];暨南大学;2003年
2 胡平;缺血预处理保护严重脑缺血对大鼠海马CA1锥体细胞的损伤并抑制大电导钙依赖性钾通道活动[D];第一军医大学;2002年
3 卢安东;内毒素对新生大鼠延髓呼吸中枢神经元ATP敏感钾通道的影响及其机制研究[D];第二军医大学;2010年
4 牛晓立;钾通道开放剂预处理对兔离体基底动脉缺氧—复氧损伤的保护作用[D];南京医科大学;2003年
5 毛讯;氟康唑对hERG钾通道电生理功能的影响[D];郑州大学;2010年
6 郭丽芬;急性冠脉综合征患者淋巴细胞电压依赖性钾通道的变化[D];华中科技大学;2007年
7 刘昀;ATP敏感性钾通道与可卡因成瘾的相关性及埃他卡林作用的研究[D];南京医科大学;2003年
8 宋静;三甲基氯化锡引发大鼠低血钾症的分子机理探讨[D];山西医科大学;2005年
9 汪溪洁;铅对大鼠海马神经元钾离子通道毒性作用的电生理研究[D];南京医科大学;2005年
10 胡蕾;西地那非逆转高肺血流肺高压大鼠肺血管重构和Kv1.5mRNA表达的机制[D];浙江大学;2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王雪飞;钾通道太“活跃”导致痴呆[N];健康报;2004年
2 升华;新法治疗肺动脉瘘获成功[N];大众卫生报;2000年
3 中国医科大学附属第一医院介入科副主任 张曦彤 阎红整理;肺动静脉漏可介入治疗[N];健康报;2009年
4 记者 郭丹 通讯员 邓进;首例全腔静脉与肺动脉引流术成功实施[N];团结报;2008年
5 记者 衣晓峰;凋亡机制参与肺动脉结构改建[N];健康报;2000年
6 周建辉;谢明霞;一罕见肺动脉畸形患者在湘获治[N];中国医药报;2004年
7 ;钾离子通道药物作用的新靶点[N];中国医药报;2003年
8 本报实习记者 陈铮;“一站式”复合手术成为先心治疗新模式[N];中国医药报;2008年
9 余志平;新研究推动神经学发展进程[N];中国医药报;2003年
10 孟晶;让“贵族药”进入寻常百姓家[N];中国化工报;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978