收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

乙酰肝素酶在腹主动脉瘤发病中的作用

吴建秋  
【摘要】: 目 的: 1. 提出腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)发病的一个新机制,即乙酰肝素酶(heparanase)参与腹主动脉壁结构损伤与重构,促进腹主动脉局限性扩张及破裂。 2. 建立一种新型可靠的大鼠AAA模型,突出其优越性,为深入AAA体内研究提供基础;同时进一步证实免疫炎症损伤与AAA形成和发展相关性。 3. 在新型AAA模型基础上,探讨heparanase在异种移植血管反应中的作用以及与AAA发病关系。同时经过heparanase抑制剂治疗,进一步从反面和体内证实heparanase在AAA发病中的作用,并为AAA防治提供新思路。 方 法: 1. 选取人体肾下AAA、正常腹主动脉(NA)及原发性肝细胞癌组织标本,采用heparanase其底物硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparan sulfate proteoglycan,HSPG) cDNA探针与抗体,以及Von Willebrand Factor抗体,利用Northern杂交、原位杂交、免疫组化及计算机图像分析技术,定性、定位或半定量heparanase及HSPG蛋白与mRNA表达水平、微血管增生水平,以及它们在AAA发病中的病理意义。 2. 根据异种组织移植排斥反应原理,选取种间差异较大的兔科和鼠科动物为研究对象,利用显微血管吻合技术,建立一种新型AAA大鼠模型。同时利用免疫组化、HE及血管特殊染色、电镜观察及计算机图象定量分析技术,对模型组织形态学特征作一较系统研究,并与目前最为常用的弹力蛋白酶灌注AAA大鼠模型进行了比较。 3. 利用新型AAA模型,采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)、免疫组化及血管特殊染色等技术,在硫酸寡聚糖复合物(sulfated oligosaccharide phosphomannopentaose sulfate, PI-88)治疗前后,动态观察和比较异种移植血管反应中血小板聚集、heparanase表达、HSPG丢失、新血管形成以及它们之间的关系。同时观察 PI-88治疗后腹主动脉(瘤)形态学变化。 WP=5 结 果: 一、heparanase及HSPG在人体AAA组织中的表达及临床病理意义 1. 在AAA组织中,heparanase mRNA及蛋白水平表达明显高于NA;heparanase蛋白分别以增生的内外膜为主;heparanase mRNA表达与炎性细胞浸润程度和瘤体直径呈显著正相关,但与中膜平滑肌细胞减少无显著相关性。 2. AAA壁HSPG阳性蛋白分布以内外膜为主,但表达水平明显低于NA;并且在heparanase蛋白表达水平较高的部位,HSPG明显减少。HSPG mRNA在AAA及NA组织中表达无显著差异。增生的微血管阳性染色以明显增厚的外膜为主,微血管密度(microvessel density, MVD)与heparanase mRNA水平呈显著正相关。 二、新型AAA大鼠模型病理形态学特征 1. 术后4周内异种移植组腹主动脉直径随时间逐渐增大,扩张率88.2%,腔内血栓形成率24.1%。HE染色显示,明显增生的内外膜存在大量免疫炎性细胞浸润和新生血管形成;中膜明显变薄,平滑肌细胞排列紊乱,密度明显降低。 2. 移植AAA特殊染色可见,中膜弹力蛋白明显纤细、僵直,横切面上以前周相断裂最为严重。平滑肌层明显变薄,部分撕裂。计算机图像进一步分析显示,移植AAA内外径随时间逐步明显增加,血管壁各层虽有增减,但全层厚度明显增加,并且管腔面积仍有显著增大,弹力蛋白含量与外径呈显著负相关。 3. 移植AAA超微结构显示,各层结构广泛破坏。内膜以幼稚型血管平滑肌细胞(smooth muscle cells, SMC)为主,部分为泡沫细胞,内皮细胞大部分坏死脱落,基底膜不完整,内膜下有脂质样沉积。中膜SMC大部分变性坏死或凋亡;弹力纤维纤细,断裂成碎片。外膜以淋巴细胞和单核巨噬细胞浸润为主。 4. 免疫组化和TUNAL检测发现,移植AAA凋亡细胞明显高于对照组,其中阳性SMC凋亡占30%以上,与移植物外径间呈显著正相关。 5. 与传统弹力蛋白酶灌注AAA大鼠模型比较发现,AAA形成率(62%)低于异种移植组(88%),并且瘤体直径、中膜SMC密度降低及炎性细胞浸润均以移植AAA程度更明显,但弹力蛋白破坏与减少又以灌注AAA更显著。 三、移植AAA组织heparanase表达及PI-88的抑制作用 1. RT-PCR结果显示,术后4周内移植AAA heparanase mRNA表达水平随时间有显著意义的递增,而术后1周内HSPG mRNA显著增加,接近最高水平,此后至实验结束处于一平台期。 2. 免疫组化结果显示,移植AAA 明显增加的heparanase 蛋白以内外膜表达为主,伴有管腔密集的血小板沉积,MVD显著增加,但中膜、基底膜及内皮表面有明显HSPG丢失。 WP=6 3. PI-88治疗后移植物扩张率与移植物直径均有显著降低,移植物全层破坏、炎性细胞浸润和新血管增生程度均明显减轻。heparanase水平明显降低的同时,伴有基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)2,9表达降低和弹力蛋白的增加,但减少的heparanase与MMP2,9间无显著相关性。 结 论: 1. 乙酰肝素酶通过HSPG降解和促进新血管形成,在基质和细胞水平参与腹主动脉结构损伤与重构,促进AAA形成与发展。 2. 免疫炎症损伤介导的豚鼠—SD大鼠异种移植性AAA是一稳定可靠的新型动物模型,适于AAA发病机制和防治的体内研究。 3. 免疫炎症可通过异种移植血管反应中血小板聚集激活与heparanase表达增强来介导移植腹主动脉损伤,诱


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 刘争,李恩君,僧靖静,安志强;乙酰肝素酶在胃癌中表达的临床意义[J];河南肿瘤学杂志;2005年02期
2 袁劲进,刘玉,丁彦青;乙酰肝素酶与妇产科疾病关系的研究进展[J];中国妇幼保健;2001年05期
3 周世庆,王云霞,刘倩;乙酰肝素酶与恶性肿瘤[J];国外医学.肿瘤学分册;2004年07期
4 李燕杰,李吉学,凌焱,汤国营,宋子博,林艳丽,朱厚础;肿瘤转移关键酶:人乙酰肝素酶氨基端亚基的表达纯化及鉴定[J];军事医学科学院院刊;2005年03期
5 任小龙;乙酰肝素酶与肿瘤血管生成及肿瘤转移[J];国外医学.生理.病理科学与临床分册;2002年05期
6 陈俊强,詹文华,何裕隆,彭俊生,汪建平,陈正煊,黄奕华,蔡世荣;乙酰肝素酶基因表达与胃癌临床病理特点的关系[J];中华肿瘤杂志;2004年10期
7 任小龙,朱任之,王丽京,张明立,李东海,邓肖群;乙酰肝素酶mRNA表达和血管生成与胃癌发展的关系[J];中华肿瘤杂志;2003年04期
8 杨玉捷,张亚历;乙酰肝素酶——癌细胞浸润、转移的一个关键酶[J];肿瘤;2004年01期
9 陈奎生,张建文,张岚,高冬玲,张云汉,郭克民,温洪涛;乙酰肝素酶反义寡核苷酸对裸鼠食管癌uPA蛋白表达影响[J];医药论坛杂志;2004年22期
10 周世庆,汪素文,曲春梅,刘倩;乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响[J];山东大学学报(医学版);2005年03期
11 凌焱,汤国营,陈惠鹏;乙酰肝素酶的生物学特性的研究进展[J];生物技术通讯;2005年01期
12 蔡净亭,张怡;乙酰肝素酶与妇科肿瘤[J];国外医学.妇产科学分册;2005年01期
13 吴文澜,时开网;乙酰肝素酶与肿瘤转移[J];国外医学.外科学分册;2005年01期
14 宗利丽,马骊,王小宁,张进华,何援利;乙酰肝素酶基因在子宫内膜异位症患者在位与异位子宫内膜组织中的表达[J];中华妇产科杂志;2004年01期
15 蔡永国,杨仕明,房殿春;乙酰肝素酶在肿瘤发生、发展、转移及康复预后中的作用[J];中国临床康复;2003年14期
16 曹厚军,方勇,张行,吴金民;乙酰肝素酶在胃癌组织中的表达及临床意义[J];中华消化杂志;2005年03期
17 周世庆,汪素文,张淑红,真岩波,朱靖宇,张伯新;乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人胃癌细胞株SGC7901表达bFGF的抑制作用[J];胃肠病学和肝病学杂志;2004年06期
18 刘超,唐芙爱,郑鹏远,程香普,李振峰;乙酰肝素酶在大肠癌的表达及其意义[J];医药论坛杂志;2005年07期
19 吴建秋,景在平;乙酰肝素酶在腹主动脉瘤发病中的作用[J];中华医学杂志;2002年20期
20 魏慎海,高辉,刘桐林,陈鸿义;乙酰肝素酶在食管癌中的表达及其与食管癌浸润、转移、血管生成和PCNA指数之间的相关性[J];中国现代医学杂志;2003年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 顾小曼;黄峰;杨祥良;;乙酰-L-肉碱(ALC)抗氧化活性研究[A];第五届全国自由基生物学与自由基医学学术讨论会论文摘要汇编[C];2000年
2 李平利;王凤山;;肝素类似物合成方法的研究进展[A];山东省药学会2010年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2010年
3 孙永福;王凤山;;肝素酶及其研究进展[A];2007年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2007年
4 黃醒亞;莫琳瑛;薛祚紘;;謝切諾夫抑制與乙酰胆鹼的關係[A];中国生理科学会学术会议论文摘要汇编(生理)[C];1964年
5 殷文治;吳樂君;杜瑚;;離體鸽小腸的運動及其對乙酰胆礆的抑制反應[A];中国生理科学会学术会议论文摘要汇编(生理)[C];1964年
6 李穆丰;许彤辉;施玉樑;;单乙酰川楝素对小鼠运动神经末梢快K~+和慢Ca~(2+)通道的抑制[A];中国生理学会第21届全国代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2002年
7 陈莉;李姝玉;张清富;邱雪杉;;乙酰肝素酶、bFGF与乳腺癌微血管密度及预后的关系[A];中华医学会病理学分会2006年学术年会论文汇编[C];2006年
8 宋作庆;周乃康;张鹏;;肝素酶在非小细胞肺癌中的表达及意义研究[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年
9 付洁;董周寰;栾好飞;高新;李灵珍;宋海峰;;肝素酶DNA疫苗经电穿孔免疫在小鼠体内表达和基因组整合研究[A];第九届全国药物和化学异物代谢学术会议论文集[C];2009年
10 李姝玉;邱雪杉;王恩华;;不同转移潜能肿瘤细胞肝素酶的表达情况研究[A];中华医学会病理学分会2006年学术年会论文汇编[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈晓鹏;乙酰肝素酶及相关基因与原发性肝癌侵袭转移的关系[D];浙江大学;2002年
2 李燕杰;乙酰肝素酶的基因分离,蛋白表达及其相互作用蛋白的筛选[D];郑州大学;2003年
3 杨玉捷;人结肠癌细胞中eIF-4E对乙酰肝素酶表达调控的分子机制研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
4 刘玉;乙酰肝素酶与大肠癌肝转移分子机制的实验研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
5 吴建秋;乙酰肝素酶在腹主动脉瘤发病中的作用[D];第二军医大学;2002年
6 张友磊;乙酰肝素酶反义寡脱氧核苷酸对乳腺癌侵袭转移和血管生成的抑制作用[D];第二军医大学;2003年
7 陈奎生;乙酰肝素酶与食管鳞癌浸润转移的关系及体内外抑制乙酰肝素酶蛋白、基因表达的实验研究[D];郑州大学;2004年
8 尹光明;肝素酶、b-FGF及uPA在膀胱癌中的表达及意义[D];中南大学;2003年
9 肖中平;肝素质量控制及新型酶法制备低分子量肝素研究[D];中国海洋大学;2010年
10 李淑慧;N-乙酰-5-甲氧色胺的镇痛作用及其机制研究[D];第三军医大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 闫妍;肾病综合征外周血白细胞乙酰肝素酶基因表达与尿蛋白的相关性研究[D];四川大学;2002年
2 郭文治;乙酰肝素酶2和微血管密度与原发性胰腺癌浸润、转移关系的研究[D];郑州大学;2004年
3 凌焱;重组人乙酰肝素酶的克隆表达及其生物学特性的初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
4 李妙鱼;乙酰胆碱酯酶抑制剂的合成、表征及其对电鳗AChE抑制活性的研究[D];山西大学;2004年
5 杜丽;乙酰胆碱酯酶抗体酶的制备及应用研究[D];内蒙古农业大学;2001年
6 仇灏;多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2,E.C.2.4.1.4)的基因克隆、表达及组织表达谱研究[D];苏州大学;2003年
7 朱虎;精子发生相关基因的克隆及功能研究[D];南京医科大学;2002年
8 曹娟;抗性和敏感性棉蚜的乙酰胆碱酯酶和酯酶的比较研究[D];南京农业大学;2004年
9 孙淑云;血小板活化因子乙酰水解酶基因突变(Val~(279)→Phe)与脑血管病的相关性研究[D];青岛大学;2003年
10 张金振;应用家蝇乙酰胆碱酯酶进行农药残留快速检测的技术研究[D];南京农业大学;2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 余志平;改“头”换“面” 对付肿瘤[N];医药经济报;2002年
2 闻声;N—乙酰葡萄糖胺可改善自身免疫病[N];中国医药报;2007年
3 记者 石磊;英国副首相访问扬子江乙酰[N];中国石化报;2000年
4 傅倩;N-乙酰半胱氨酸有效治疗间质性肺纤维化[N];医药经济报;2004年
5 董以爱;养鸡慎用乙酰甲奎[N];中国畜牧兽医报;2006年
6 王明毅;中石化BP成立乙酰醋酸合资企业[N];中国石油报;2005年
7 记者 鹿慰 帝尔;调味品行业标准日趋完善[N];消费日报;2004年
8 解放军302医院 魏振满 黄显斌;关注药物引起的肝肾损害[N];健康报;2005年
9 常森;醋酸市场整体平稳[N];中国化工报;2006年
10 施健 谢渭芬;左旋卡尼汀可有效治疗多种疾病[N];中国医药报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978