血管内皮生长因子在不同肿瘤中的表达及低血红蛋白和辐射调节

【摘要】： “肿瘤的生长依赖于新生血管的形成”这一假设为众多的实验研究所支持，基因学研究也证实了该假设的正确性。血管形成表型的启动（Switch）是肿瘤进展的关键步骤，在肿瘤生长的无血管期，肿瘤体积不会超过1～2mm3，而至血管期，肿瘤内出现了新生毛细血管并获得进一步生长的能力。研究人员发明了用于定量检测新生微血管壁中癌细胞的技术，实验证明人结肠癌小鼠模型癌组织中有15%的血管壁内皮细胞间嵌合有癌细胞，其数量可占到血管腔总面积的4%。 由于VEGF具有强烈的促血管内皮细胞有丝分裂和增加血管通透性作用，因而在血管形成过程中起关键作用。鉴于血管形成在肿瘤增殖、转移中的地位已确立，VEGF的检测手段简便易行，国内外众多学者将目标集中在肿瘤组织中VEGF表达与病理分期以及肿瘤诊断、治疗的临床应用研究。目前国内的研究报道主要集中在VEGF表达与肿瘤的临床病理关系及针对VEGF的抗血管形成治疗肿瘤等方面，检测血清VEGF在肿瘤中的临床意义的报道也是近两年中的事，有关VEGF表达调节及影响因素等方面的研究报道甚少，为此，我们从1999年开始采用ELISA方法、免疫组织化学染色技术、反义核苷酸抑制法观察了几种常见肿瘤组织、肿瘤患者血清中VEGF蛋白的表达，研究VEGF表达与肿瘤转移、复发及预后的关系，低血红蛋白及辐射对VEGF表达的影响，VEGF反义核酸对辐射所致肝癌细胞VEGF高表达的抑制作用，为抗血管生成治疗肿瘤提供理论支持。 目的：1.研究肿瘤组织VEGF蛋白表达与临床病理和肿瘤抑制基因p53蛋白表达之间的关系。2.研究血清VEGF测定在肿瘤诊断、病理分期、手术和放射治疗疗效监测中的临床意义。3.探讨低血红蛋白（缺氧）、辐射、VEGF反义 WP=5 硫代寡核苷酸（As-ODNs）对肿瘤细胞VEGF表达的调节作用。 内容：1.标本及其来源：手术切除的结直肠癌组织石蜡标本77例。收集下列患者血清标本：初诊结直肠癌85例（其中13例有术后1周对照），结直肠癌手术后半年到4年21例；初诊肺癌96例及部分（35例）术后1周自身对照，肺炎34例；胃癌患者20例；接受放疗的4例肺癌、1例肝癌患者；以上均为我院1999～2001年收治的住院病人。正常对照30例。 VEGF反义硫代寡核苷酸由中国科学院上海生物化学研究所金由辛教授惠赠。肝癌细胞7721由我院医学实验科刘民培教授惠赠。 2.内容及方法：① 分别用抗VEGF和抗p53蛋白抗体对肿瘤组织石蜡切片标本进行免疫组化染色，同时常规HE染色。② 85例结直肠癌患者根据病理结果分为高分化腺癌组（8例）和中等分化腺癌（77例）组，后者又根据Duke's分期分为A期（24例）、B期（29例）、C期（20例）和D期（4例）。96例肺癌患者中35例有手术前后自身对照。探讨了VEGF蛋白表达水平与肿瘤病理分期、淋巴结转移、远处转移及肿瘤复发的关系。动态检测了5例放疗患者血清中VEGF含量变化，分析放射治疗对VEGF蛋白表达的影响。③ 在测定肿瘤病人血清VEGF浓度的同时测定病人血红蛋白浓度，探讨缺氧（低血红蛋白浓度）对肿瘤细胞VEGF蛋白表达的影响；将肝癌细胞7721分为三组：对照组，X线照射组，X线照射+As-ODNs组，照射剂量16 Gy，培养时间至48小时，探讨辐射对肝癌细胞VEGF蛋白表达的影响及反义硫代寡核苷酸对肝癌细胞VEGF蛋白表达的抑制效应。 结果：1.VEGF及p53基因在肿瘤组织中的表达:VEGF蛋白主要位于细胞浆中。免疫组化中细胞浆显示棕黄色为阳性。VEGF在结直肠癌组织中有较高表达率（63.6%，49/77），其表达率在Duke's分期各组间（A期：10/14；B期：18/29；C期：17/20）差异有显著性（P 0.001）,在有远处脏器转移的肿瘤组织中，表达率更高（D期：4/4）。p53基因突变蛋白表达与肿瘤细胞VEGF表达显著相关（P 0.01）。 2．结直肠癌早期患者（Duke's A期）血清VEGF浓度（297.8±148.8 pg/ml）较正常对照组（178.4±115.0pg/ml ）显著升高（P＜0.01）。Duke's A、B期 WP=6 两组之间血清VEGF浓度差异有显著性（P＜0.05），有淋巴结转移组（Duke's C期：689.9±417.0 pg/ml）较无转移组（Duke's B期：420.2±214.8 pg/ml）的血清VEGF浓度显著升高（P ＜0.01），有远处脏器转移组的血清VEGF浓度 （1430.0±681.2 pg/ml）较淋巴结转移组也显著增高。高分化腺癌组血清VEGF（171.1±98.0 pg/ml） 与对照组间差异无显著性（P＞0.05）。术后半年到4 年的患者，复发组血清VEGF（1161.4±526pg/ml）较未复发组（252.2±119.2 pg/ml）显著升高（P ＜0.01）。肺癌患者血清VEGF浓度（636.0±499.1 pg/ml）较正常对照组明显升高，两组差异非常显著（P ＜0.001），肺炎患者血清VEGF浓度（431.4±239.2 pg/ml）也有一定的升高，但较之肺癌组低，两者间差异有显著性（P＜0.05）。肺癌术后一周血清VEGF浓度升高的患者在短期内易发生癌转移（12/21，P ＜0.01）。结直肠癌患者术后一周血清含量结果表明，部分患者也有血清VEGF浓度升高的情况。3．Hb浓度小于平均值（(x = 123.5g/L）的肿瘤患者血清VEGF平均含量（695.3(572.4pg/ml）与Hb浓度大于平均值的肿瘤患者VEGF含量（423.7(357.5pg/ml）相比，两组间差异有显著性（P 0.05），肿瘤患者Hb浓度与血清VEGF含量间的相关分析表明