收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

砷剂对角质形成细胞增殖和凋亡的影响及其致癌机制的研究

毕新岭  
【摘要】: 砷剂对角质形成细胞增殖和凋亡的影响 及其致癌机制的研究 砷剂在临床上曾用来治疗梅毒、银屑病、哮喘、关节炎等,在农业工业上也有较多应用。随着人们对其致癌、致畸等毒性作用的认识,已逐渐少用或不用。近年来,砷剂在国内外得到广泛和深入的研究,主要包括两个方向:①由于三氧化二砷、雄黄治疗早幼粒细胞白血病(APL)具有较高缓解率,并得到国内外公认,而引发的砷剂对多种肿瘤细胞抑制增殖和诱导凋亡作用的研究。②对砷剂致癌机制的研究。 1865年Lissauer首先用Fowler氏液(亚砷酸钾溶液)治疗急性早幼粒细胞白血病(APL),一直到20世纪50年代以后,随着人们对其致癌、致畸作用的认识和多种化疗药物的出现,砷剂在西方国家应用逐渐减少。国内哈尔滨医科大学附属医院血液科用三氧化二砷注射液治疗APL,并获得较高疗效。瑞金医院血液学研究所实验证实三氧化二砷能下调NB4、HL60等白血病细胞株bcl-2基因,诱导细胞凋亡。国内外研究者对砷剂能诱导肿瘤细胞凋亡产生浓厚兴趣,在其他白血病、骨髓瘤等造血来源细胞进而神经母细胞瘤、食管癌、胃癌、肺癌等实体瘤细胞中进行了研究。那么As2O3对角质形成细胞和表皮鳞癌细胞株有无诱导凋亡作用?因为有记载As2O3能蚀疽腐肉治疗皮肤癌,但具体机制尚不明确。 另一方面,砷剂是一种公认致癌物,人一般通过皮肤、消化道、呼吸道等途径接触和摄入砷化物,由于饮水、药物、职业等因素长期接触砷,可引起皮肤、肺和膀胱等组织器官的肿瘤发生。尤其在皮肤的蓄积,出现色素沉着、皮肤角化等相关皮肤病。20世纪60-70年代接受Fowler's液治疗银屑病的病人有较高的上述疾病发生率,但其致癌机制仍不明确。文献报道砷剂能促进成纤维细胞DNA合成,诱导细胞增殖。砷剂可诱导角质形成细胞分泌TGF-(、EGF和GM-CSF等细胞因子,增强AP-1、NFkappaB活性,在炎症和诱导皮肤癌的发病中发挥重要作用。近年来,国外对砷剂的致癌机制做了较多工作,特别是与细胞增殖、转化有关的信号传导是人们研究的热点。 本课题从上述两个方面出发,先以良性角质形成细胞株HaCaT和表皮鳞癌细胞株A431为研究对象,观察As2O3对表皮细胞增殖及凋亡的影响。另外在细胞因 WP=6 子、DNA合成、与角质形成细胞增殖相关的E2F、ERK基因表达等多个方面、不同水平探索砷剂的致癌机制。 第一部分 高浓度As2O3对角质形成细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用 (一) 目的:研究三氧化二砷对不同角质形成细胞增殖的影响,探讨是否有凋亡的发生及其机制。 (二) 方法: 以体外培养的角质形成细胞株为对象,不同浓度三氧化二砷处理细胞后,用MTT比色分析法反映细胞增殖变化,用光镜和电镜观察细胞形态,流式细胞仪测定细胞周期分布及凋亡峰的出现,Annexin-V染色荧光照相证实凋亡的发生。 (三) 结果: 0.5μM-10μM三氧化二砷对良性角质形成细胞株HaCaT细胞有明显抑制作用,并呈时间和剂量依赖关系,而该浓度砷剂对A431细胞无明显影响。光镜及HE染色后观察均显示随浓度升高、时间延长,凋亡细胞增多。高于上述范围HaCaT细胞变性死亡增多,流式细胞仪检测细胞周期分布变化,G2M期细胞比例及亚G1期凋亡峰明显升高,Annexin-V法显示有绿色荧光的阳性细胞。而A431细胞无明显形态和细胞周期分布变化。 (四) 结论: 一定浓度的三氧化二砷可抑制HaCaT细胞增殖,并具有诱导凋亡作用,对皮肤鳞癌A431细胞无明显影响,提示良性表皮角质形成细胞株HaCaT对三价砷的处理比A431鳞癌细胞株更敏感。 第二部分 低浓度As2O3促进角质形成细胞DNA合成和E2F1表达 (一) 目的: 研究砷剂对角质形成细胞DNA合成和相关转录因子E2F表达的影响。 (二) 方法: 以体外培养的角质形成细胞株为对象,不同浓度砷剂处理后,采用3H-TdR实验检测角质形成细胞DNA合成,并用RT-PCR方法研究细胞E2F1表达情况。 (三) 结果: 在0.5至16nmol/L药物浓度范围内,DNA合成加速,促进细胞增殖。但随着砷剂浓度继续升高,3H-TdR掺入量降低,逐渐回到基线水平;RT-PCR结果显示:DNA合成加速的HaCaT细胞组,伴有E2F1 mRNA水平的上调。 结论: 一定浓度范围内的砷剂可促进角质形成细胞株HaCaT细胞的DNA WP=7 (四) 合成加速,增强转录因子E2F1的表达,可能是砷相关皮肤病的病理机制之一。 第三部分 As2O3对角质形成细胞生长和IL-8、TNF-α分泌的影响 (一) 目的: 研究不同浓度砷剂对角质形成细胞生长和IL-8、TNF-α分泌的影响。 (二) 方法:以体外培养的角质形成细胞株为对象,不同浓度砷剂处理细胞后,用MTT比色分析法反映细胞增殖变化。ELISA方法测定培养上清中IL-8分泌,用L929细胞检测上清TNF-α的生物活性。 (三) 结果:0.5μM-5μM三氧化二砷对良性角质形成细胞株HaCaT细胞有明显抑制作用,并呈剂量依赖关系。在1.0至15nmol/L药物浓度范围内,同对照相比细胞增殖加快。 未药物处理的HaCaT细胞可分泌一定水平的IL-8和TNF-α,低浓度砷剂(0.5-15nmol/L)可刺激其分泌增加。 (四) 结论: 低浓度砷剂可促进角质形成细胞株HaCaT细胞的生长,但高浓度能抑制增殖和影响细胞活性。并在一定浓度范围刺激IL-8和TNF


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 Barker C.L. ,McHale M.T. ,Gillies A.K. ,J.H. Pringle,崔荣;体外银屑病模型的发展和特性[J];世界核心医学期刊文摘.皮肤病学分册;2005年04期
2 卢宁;朱平;刘玉峰;王刚;张海龙;赵小东;;实验室条件下人角质形成细胞的培养技术(英文)[J];中国临床康复;2006年01期
3 王凌峰;温丽娟;荣志东;巴特;王宏;胡国林;蒋文杰;严智昌;;含AB型血清培养体系人角质形成细胞培养[J];内蒙古医学院学报;2006年05期
4 罗素菊;郑焱;彭振辉;王国荣;周少娜;李晓莉;;窄谱中波紫外线和/或阿维A对角质形成细胞异维A酸受体α mRNA表达的影响[J];四川大学学报(医学版);2008年03期
5 贺勤;涂亚庭;熊瑛;王京;陈锦辉;徐娟;刘源;陈加媛;;IL-23在寻常型银屑病皮损角质形成细胞中的表达[J];中国麻风皮肤病杂志;2008年04期
6 于宁;王宁;辛畅泰;魏侃;徐媛;张艳;;角质形成细胞和成纤维细胞两步法培养的实验观察[J];实用手外科杂志;2008年01期
7 任晓丽;白莉;潘敏;;维A酸对角质形成细胞增殖影响的实验研究[J];山西医药杂志(下半月刊);2008年11期
8 黄亚琴;王韵;杜文潇;张艺;连小华;杨恬;张宗梁;;TNCB介导角质形成细胞IL-18的表达[J];免疫学杂志;2009年03期
9 杨玲;何威;李颖;张斌;;地塞米松给药及撤药后糖皮质激素受体的表达[J];第三军医大学学报;2009年21期
10 刘明岩;耿会珍;蒋献;黄宁;王伯瑶;吴琦;;角质形成细胞对胞内金黄色葡萄球菌抗菌作用研究[J];四川生理科学杂志;2010年01期
11 朱元杰;顾菊林;陈江汉;赵瑾;仇芸;温海;;新生隐球菌对角质形成细胞活力的作用研究[J];中国真菌学杂志;2011年01期
12 廖文俊,刘彦仿,刘玉峰;β-半乳糖苷酶基因转染角质形成细胞的瞬时表达检测[J];临床皮肤科杂志;1999年02期
13 赵春霞,夏隆庆;正常人与人肿瘤角质形成细胞的增殖能力与p63的关系[J];国外医学.皮肤性病学分册;2000年06期
14 周洪,沈佰华,李宁丽,郑泽铣,周光炎;IL-10的表达和调控在角质形成细胞诱导免疫抑制中的作用[J];细胞与分子免疫学杂志;2001年06期
15 唐玲,于益芝,阎明,郭志丽,李泉,郑茂荣;银屑病患者角质形成细胞培养上清液对单核细胞形态、表型的影响[J];中国皮肤性病学杂志;2002年06期
16 ;皮肤科学基础[J];中国医学文摘.皮肤科学;2002年03期
17 周爱民,冯捷,马慧群,徐汉卿;Toll样受体4在人体角质形成细胞中的表达[J];中华皮肤科杂志;2004年01期
18 毕新岭;赵海生;顾军;;砷剂对角质形成细胞CDK2、CDK4和Cyclin-E蛋白表达的影响[J];中国麻风皮肤病杂志;2007年01期
19 汪群;诸焕颖;孙红英;;人口腔扁平苔藓角质形成细胞的体外培养及生物学鉴定[J];复旦学报(医学版);2007年05期
20 杨壮群;王正辉;屠军波;张铁良;虎小毅;李国光;宋勇;;体外构建色素化皮肤类似物模型[J];南方医科大学学报;2007年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张妲;顾军;毕新岭;;FY-10及阿维A酸对角质形成细胞维A酸受体表达的影响[A];中华医学会第十二次全国皮肤性病学术会议论文集[C];2006年
2 ;抗体搭桥角质形成细胞/单一核白细胞粘连实验与抗银屑病中药平必清的研制[A];中华中医药学会皮肤科分会学术会议、全国中医药防治皮肤病成果与技术交流大会、全国中西医结合皮肤科治疗新技术临床推广应用高级研修班文献汇编[C];2004年
3 陈辉;李筱芳;沈永年;吕桂霞;刘维达;;角质形成细胞与红色毛癣菌共孵育体系中角质形成细胞TLR2及其信号通路中下游分子的表达[A];2006中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2006年
4 李承新;刘瑛;高天文;刘玉峰;;Hedgehog信号转导通路在角质形成细胞增殖性皮肤病中的激活状态及其对角质形成细胞增殖与凋亡的影响[A];中华医学会第十二次全国皮肤性病学术会议论文集[C];2006年
5 王懿娜;方红;彭国平;吴炜;;人不同角质形成细胞株对UVB照射的衰老和凋亡反应[A];华东六省一市第八次皮肤性病学术会议论文汇编[C];2007年
6 陈斌;毕志刚;;UVB辐射前后角质形成细胞蛋白质组双向电泳图谱的差异分析[A];中华医学会第十二次全国皮肤性病学术会议论文集[C];2006年
7 李孝建;沈雁;张志;李延仓;杨小红;曾耀英;;鼠表皮干细胞与角质形成细胞蛋白质组差异表达的初步研究[A];第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛论文汇编[C];2009年
8 苏明;陈洵礼;吴黎明;沈斌;程浩;;NF-κB和c-myc在尖锐湿疣患者角质形成细胞中的表达和意义[A];中华医学会第十二次全国皮肤性病学术会议论文集[C];2006年
9 徐丽敏;高琴;;中药对角质形成细胞增殖和细胞周期的体外调控研究[A];中华医学会第十五次全国皮肤性病学术会议论文集[C];2009年
10 连小华;杨恬;;表皮角质形成细胞中TNF-α对PAI-2表达的调节[A];中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 朱健伟;UV调节角质形成细胞VEGFRs表达和激活及其功能和机制研究[D];浙江大学;2013年
2 谢晓韵;F1F0-ATP(合成)酶在角质形成细胞分化过程中的表达及其功能研究[D];中南大学;2012年
3 陈旭;紫外线致皮肤成纤维细胞和角质形成细胞中的自噬研究[D];北京协和医学院;2012年
4 于晓丽;羧胺三唑对角质形成细胞增殖与分化的影响及其作用机制的初步研究[D];北京协和医学院;2012年
5 张洪英;白芍总苷对角质形成细胞增殖及血管内皮生长因子和IL-23表达的影响[D];山东大学;2011年
6 张曦;角质形成细胞源性蛋白因子在增生性瘢痕形成中的作用研究[D];第四军医大学;2008年
7 张江林;砷剂对皮肤角质形成细胞P53功能的影响及其机制研究[D];中南大学;2008年
8 谢韶琼;灵芝多糖抗皮肤衰老及相关基因表达的研究[D];第二军医大学;2007年
9 陶春蓉;白疕软膏治疗银屑病的机理研究[D];成都中医药大学;2008年
10 周建大;原代成体皮肤角质形成细胞、成纤维细胞的培养和转基因研究[D];中南大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李嘉珮;5-氨基酮戊酸光动力疗法对正常人角质形成细胞的影响[D];暨南大学;2010年
2 徐巧瑜;不同代次角质形成细胞构建组织工程皮肤的比较研究[D];第三军医大学;2013年
3 张宇恒;一氧化氮作用前后角质形成细胞差异蛋白的筛选与分析[D];大连医科大学;2011年
4 毕新岭;砷剂对角质形成细胞增殖和凋亡的影响及其致癌机制的研究[D];第二军医大学;2002年
5 董香艳;TLR2对角质形成细胞与不同皮肤癣菌共孵育时的影响研究[D];华中科技大学;2013年
6 索丹凤;他克莫司对黑素细胞和角质形成细胞的作用研究[D];天津医科大学;2010年
7 涂盛安;TLR2在皮肤癣菌感染中对角质形成细胞分泌γ-IFN和IL-8的影响[D];华中科技大学;2011年
8 楚菲菲;调节角质形成细胞中的Notch信号对成纤维维细胞活性的影响[D];第四军医大学;2013年
9 许若颀;血红素氧合酶对长波紫外线导致人体皮肤角质形成细胞损伤作用的初步研究[D];重庆大学;2012年
10 李冰;调节Notch信号对角质形成细胞及成纤维细胞活性的影响[D];第四军医大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 谢明霞;破解疑难皮肤病之谜[N];健康报;2010年
2 廖联明编译;“吃醋”:老疗法有新用途[N];健康报;2009年
3 胡亚莹;治银屑病有新药[N];健康报;2003年
4 张中桥;含黑素细胞的表皮替代物构建成功[N];中国医药报;2005年
5 主任医师 玉华;四害促衰老[N];保健时报;2004年
6 刘文山;药物可辅助毛发再生[N];大众卫生报;2005年
7 通讯员刘远桥高晓莉记者冯竞;给创面植上新型人造皮肤[N];科技日报;2002年
8 倪黎冬 整理;银屑病发病新“元凶”:链球菌DNA[N];健康报;2009年
9 记者熊学莉 通讯员吴刘佳;芳维A酸乙酯可缩短银屑病疗程[N];健康报;2010年
10 吴刘佳;三军医大新桥医院首用芳维A酸乙酯治疗银屑病[N];中国医药报;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978