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乙酰肝素酶反义寡脱氧核苷酸对乳腺癌侵袭转移和血管生成的抑制作用

张友磊  
【摘要】: 背景 侵袭和转移是恶性肿瘤的重要特征,是影响肿瘤治愈率的主要因素。在肿瘤的侵袭和转移过程中,细胞外基质(extracellular matrix,ECM)和基底膜(basement membrane,BM)起着重要的屏障作用。乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)是新近克隆出来的一种内糖苷酶,可降解ECM和BM中的硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS),促进肿瘤细胞的侵袭转移和血管生成。迄今为止,HPSE是研究发现的第一个也是唯一一个具有降解HS活性的酶,这使HPSE成为研究抗肿瘤药物的极具吸引力的新靶点。 目的 1、探讨HPSE在人类乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌侵袭转移和血管生成等临床病理特征的关系。 2、探讨乙酰肝素酶反义寡脱氧核苷酸(heparanase antisense oligodeoxy-nucleotide,HPSE AS-ODN)对乳腺癌侵袭转移和血管生成的抑制作用,以探索新的乳腺癌基因治疗手段。 方法 1、对54例乳腺癌病例进行回顾,以HPSE单克隆抗体免疫组化染色检测乳腺癌组织HPSE表达,以Ⅷ因子抗体免疫组化染色检测微血管密度 男二军医丈学博全讼丈君友磊 (mi御vos。。1 donoity, MVD)。 2、设计合成互补于HPSE爪附寸A起始密码区的HPSE AS一ODN,以阳离 子脂质体Lipofectin包埋后转染人乳腺癌MDA435细胞,以逆转录一聚合酶链 反应(Rl’- PCR)检测转染后HPSE IllRNA表达的变化,以W七stem蛋白印迹 检测HPSE蛋白表达的变化,以Matrigel细胞侵袭实验检测MDA435细胞侵 袭力的变化。 3、建立人乳腺癌裸小鼠皮下侵袭模型,瘤内注射HPSE As*ODN,观察 肿瘤的生长情况,并以RT-PCR检测肿瘤组织中HPSE mRNA表达,以HPSE 单抗免疫组化染色和W七stern蛋白印迹检测肿瘤组织中HPSE蛋白表达,以珊 因子免疫组化染色检测肿瘤组织NWD。建立人乳腺癌裸小鼠急性血路转移模 型,通过尾静脉注射HPSE AS一ODN,以解剖显微镜计数裸小鼠肺表面肿瘤转 移结节数目。 结果 1、59.3%(32/54)的乳腺癌组织表达HPSE。转移到腋淋巴结的癌细胞 HPSE染色阳性。HPSE表达与乳腺癌大小、腋淋巴结转移、TNM分期、MVD 和预后密切相关。 2、HPSE AS一ODN各浓度组对MDA435细胞HPSE mRNA和蛋白表达及 侵袭力均有明显抑制作用(P0.01),其抑制效应在不同浓度组间差别显著(P 0.01)。HPSE AS一ODN在终浓度为100nmol几、200nxnoFL和400nmol几时 对MDA435细胞的侵袭力抑制率分别为34.0%、57.8%和79.7%。 3、在肿瘤皮下侵袭抑制实验中,HPSE AS一ODN治疗组的肿瘤生长变慢, ‘彰二军资丈学溥士.讼灵~ 猎友寿 其肿瘤大小、肿瘤组织中HPSE mRNA和蛋白表达及MVD均明显小于或低于 对照组(P0.01)。在急性血路转移抑制实验中,HPSE AS一ODN治疗组的肺 表面肿瘤转移结节数目较对照组明显减少(P0.01),HPSE AS一ODN对肿瘤 肺转移的抑制率为69%。 结论 HPSE表达能够促进乳腺癌的侵袭转移和血管生成,并与乳腺癌的预后相 关。HPSE AS一ODN通过下调HPSE血RNA和蛋白的表达可显著抑制人乳腺癌 细胞的侵袭转移和血管生成。


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