急性脊髓损伤后外周血淋巴细胞亚群的改变及其意义

【摘要】： 背景 急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是脊柱外科领域中一种常见的疾病，多由高处坠落、交通事故、工业和建筑业事故以及运动伤所造成。多发于年轻人，可导致患者感觉、运动和植物神经功能的永久性丧失，给患者造成巨大的痛苦，无论对个人或社会都带来巨大负担。一个多世纪以来，在各国神经外科医师和骨科医师的不懈努力下，脊髓损伤的创伤急救水平不断地提高，脊髓损伤患者的死亡率已从20世纪初的50％左右降至目前的6％左右。脊髓损伤直接导致的早期死亡率已明显下降，但创伤治疗后期因感染直接或间接导致的死亡率则相对升高。 人们在上世纪70年代就注意到了创伤后机体免疫反应受抑制的现象，包括白细胞趋化能力减弱，吞噬杀菌功能降低，粒细胞功能下降，单核细胞-巨噬细胞功能减退，B淋巴细胞合成抗体水平下降和T淋巴细胞转化能力降低等。上世纪80年代以后，人们认识到创伤后免疫功能的抑制是导致感染的主要原因。研究表明，急性脊髓损伤后患者的细胞免疫功能受到抑制，脊髓损伤可引起机体非特异及特异性免疫功能障碍，而在特异性免疫中尤以细胞免疫功能受损为重，主要是T细胞的功能及自然杀伤细胞(NK细胞)的功能等受到抑制，表现为机体外周血T淋巴细胞转化作用及活化作用降低、对促细胞分裂剂增殖反应降低、可溶性IL-2受体水平升高、NK细胞的数量及细胞毒活性降低等，这些可能是导致伤后机体容易发生感染的主要原因。此外，另有研究表明，大鼠不完全性脊髓损伤后损伤的脊髓可诱导机 ‘用二军医才学厚全学夕居戈 功戈拥要. 体产生T细胞介导的保护性自身免疫反应，从而减轻损伤后神经元的 退变来促进脊髓功能恢复;若脊髓损伤后机体发生了感染如病毒感 染，则会导致脊髓损伤区淋巴细胞浸润增强，会进一步加重脊髓损伤。 临床工作中还发现，尿道、肺及皮肤等处的机会性感染常见于脊髓损 伤患者。因此，除感染时应用抗生素等药物治疗外，伤后提高机体的 免疫功能以预防、避免感染的发生，对减少患者晚期并发症、降低后 期的死亡率及提高其生活质量具有特别重要的意义。 迄今研究结果表明，脊髓损伤与免疫反应改变密切相关，己引起 学者们的重视，但无定论。因此，更深入地了解脊髓损伤后机体的细 胞免疫反应改变情况、随时间变化的规律及其机理，研究并采取一些 有效的措施来调节伤后机体的细胞免疫受损状况，是一个具有重要意 义并巫待解决的的课题。 目的 我们设计并实施本课题，目的在于研究脊髓损伤后机体T淋巴细 胞亚群、活化抗原及粘附分子的变化情况，探讨SCI与细胞免疫反应 的关系及其机理;在此基础上，研究并探讨传统中药黄茂在急性脊髓 损伤中调节细胞免疫反应的作用，为该药在SCI治疗中的应用提供理 论依据。 方法 1.利用改良Allen’s打击法建立致伤能量不同的大鼠急性脊髓损 伤模型。 2.采用流式细胞仪检测正常对照组、手术对照组(仅行椎板切 除而未损伤脊髓)及致伤能量不同的二组脊髓损伤组大鼠伤后不同时 期外周血T淋巴细胞表型CD;及CD:的表达水平，研究 CD4、CDS、 CD扩CDS比值及CD4+CD:值随时间变化的规律及不同致伤能量对 cD;及cD:表达的影响，进一步了解SCI后大鼠细胞免疫反应的改变 情况。 ‘翩二军医丈学麟全李夕绘戈礴 功戈有萝 3.对二组急性脊髓损伤大鼠，在伤后第12h、36h、sd、6d、7d、 sd及gd分别给予生理盐水注射液和黄茂注射液治疗，通过流式细胞 仪检测治疗后不同时期大鼠外周血T淋巴细胞表型C环和CD:的表 达水平，来观察治疗前后细胞免疫反应改变情况。此外观察胸腺、脾 脏的外观形态、重量的变化及其组织病理学变化，研究黄茂注射液对 急性脊髓损伤大鼠细胞免疫受损的调节作用。 4.采用流式细胞仪检测15例临床确诊的急性脊髓损伤患者外周 血淋巴细胞表型CD:9、CD3、CD4、CDS、CD69、CDS;及CD56的 表达水平，了解脊髓损伤后患者细胞免疫功能的改变情况及其机理。 结果 通过上述实验研究，得出如下结果: 1.术后第36h斜板试验角度:各组比较结果表明，手术对照组 明显低于正常对照组(p0.01)，脊髓损伤组明显低于正常对照组及 手术对照组(p0.01)，而脊髓损伤组中SCI 200gcm组又明显低于SCI 100gem组(p0.01)。此外，SCI 20ogem组双后肢运动、感觉恢复最 慢。 2.CD;值:术后第12h脊髓损伤组及手术对照组该值均明显低 于正常对照组(p0.05)，至术后第36h仍均明显低于正常对照组， 且具有非常显著性差异(p0.01);此外，术后第36h时sel Zoogem 组CD;值明显低于手术对照组，而SCI loogcm组与手术对照组比较 的p值为0.0542，虽无显著性差异，但接近p0.05，表明二者有显著 性差异的趋势。术后第5d各组C珠值仍均明显低于正常对照组 (p0.05)。术后第gd时的eD;值，除sCx Zoogem组仍明显低于正 常对照组(p0.05)外，其余各组则与正常对照组无明显的差异。方 差分析结果表明:手术对照组术后不同的时期的CD;值无明显的差异 (p0·05);sCI 10ogem组及SCI 200罗m组术后不同时期的en;值 间存