收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

新生隐球菌荚膜相关基因的实验研究

郭秀军  
【摘要】: 根据新生隐球菌多聚糖荚膜成分和生化方面的差异,人们将新生隐球菌分成3个变种,5个血清型,其中新生变种(血清型A、D和AD)存在世界范围的土壤和鸟粪中,与免疫力低下的患者,尤其是爱滋病患者的隐球菌病有相关性,而格特变种(血清型B和C)和上海变种(血清型B),严格局限于热带和亚热带地区,通常引发免疫正常人的隐球菌病,因此研究新生隐球菌不同的血清型与致病性之间的关系是重要的流行病学研究课题。临床上主要用免疫学方法检测抗新生隐球菌荚膜多聚糖的抗体,对其进行血清分型,但是该法有时对某些临床分离株不能鉴定。尽管已有一些分子生物学的技术补充了免疫学方法的局限性,但是临床上仍然需要新的、较准确的和简便的方法来对新生隐球菌进行血清型分型。 June Kwon-Chung和她的合作者利用新生隐球菌DNA文库互补了一些荚膜缺陷株,已经克隆了4个与荚膜合成有关的荚膜基因(CAP59,CAP64,CAP60和CAP10),这些荚膜相关基因是新生隐球菌荚膜合成的必需基因,这些荚膜基因在新生隐球菌荚膜生化合成途径中的作用是不明确的,但是多聚糖荚膜成分是新生隐球菌分型的物质基础,因此它们是找到与分型的物质基础最相关和最可能的地方。 目前,CAP基因与新生隐球菌血清型分型之间的研究并不多,仅发现不同血清型新生隐球菌CAP59基因部分序列有差异性。因此我们根据实验的条件和财力,选择新生隐球菌的CAP59和CAP64基因作为研究对象,来探讨这两个基因在检测新生隐球菌病原体和血清型分型中的意义,以期对临床检测新生隐球菌提供有用的分子生物学工具。 前期的研究发现,无荚膜的突变株和定向的荚膜基因缺失株在动物模型中无致病性,当它们用野生型荚膜基因互补后,菌株形成荚膜,在动物模型中恢复毒性作用,这些研究结果在分子水平证实了荚膜在新生隐球菌毒性方面的重要性,但是人们仍然不清楚CAP基因在荚膜合成途径中的作用。荚膜基因产物的定位研究对探索这一难题是必不可少的步骤,已有的相关研究表明,用常规免疫组织化学的方法定位新生隐球菌CAP基因产物是非常困难的。 绿色荧光蛋白(GFP)在许多生物蛋白质定位研究中已经得到较多的运用,由于不需要固定、洗涤、封闭和染色的步骤,可以直接观察单个活细胞内的基因 h 丫K人TWD一沦大 小UN业 大达;;1”9年,附;;;;。gw等首次将GH’用于新生隐球菌M!‘m产’物的定位研究, 山1技术原山仅仅观察到C川‘则基因产物的细胞位铁t。本课地价内外一十mV姚村深 入研究新’*刘求菌C川‘明和m隅4基因的功能,并将〔TPJ刹。叶为报法0引小爿入 以生隐球13i的美)剧变区【产物的定位研究中。 实验方祛 1.新’*划求的灭血利1x从wC川‘64的克隆和川临测病原体力八川的忠义:根州调卜I; 隐J求菌(咖消)U D)CAP64美映基因的序列设计众多引物则委引物一 如L <j。nB。uk 进计比对,代才叫恃V州山受好的引物进行研究和验j小。随后将设川小引物)/75个 惊彻m.沽W新生踢球菌,已分型和未分型新生隐J求首临床分或采,以及其‘面的致 他真菌,以、J找引物的型特异性。 2.动广*组体内划供材1):某冈(二川。59最大夕卜显厂的序列分析人山。lh测y.如原件人M 的思义:分析C川。59 gi肥缺陷株C八*”基因最大外星于的序列’/(来源村林科厂厂 踢球跑卜3以)【相应序列的差别,以期发现该/斗歹小卜一C川‘切从的功能下门工的你 从·处分迎过分析5个标准则D.清型12f株C川’59)i引人】的最人外Z.又广J、列‘,j厂’刊11山$ ’U新’H辙J求以i(:AI’个)j川I;的最大外显了个歹帅勺差别,来探索利)-I-I(川’19肚I)、I见人 外以一厂序列卜_分5个M人与w新生隐球IYi分于生物学,七MIf卜>补肝川。隐珠他的小卜 系进化大系,升洲小它在】;而风L可行们上 对2()株新生踢球的叩;此分。幼林!X从几 它们而补为进行C八厂59最人爿、显于序歹山沟扩l曾,来研究C川’59的最大外枯广h:斯 十踢球的价测病以休人m川勺思义。 3@新生*田水仙*E*1〕59取IC川)64荚* 缺;为株**忍*又变株的筛选河1鉴定三通工 仆夕上人 W纸组】支术,川大多数地母都敏感的*418基区It雨入到新个隐〕求1为CAI。天以州处僻 缺陷株1二*bU*AS冶】月的特定序列,用电转化将_上述的。公巨片段V入处刀切决地 休,。·Jilt…N人得具有*418抗上*勺ur的突变株。考虑到新1隐珠峋认同的卜,]测地 八个什、K低,找*仆们叫月破除二c酯化学诱变分J,对新’*隐珠的CAI巧9、*AI‘64 川 CAP10灭j份ode除机i为变。 4.h把荧光蛋I0],P从国和(人PJk因融合农达载体的初不构让:以忖化Jc门纠。 明们V的如梭J粒pC州旧们三为分寸土日 将***64丛囚九Cr〕人二】人!从北1二附 卜人;为纤 HKAS.1.引人M则不《厂GAI。7们勾的启动于之卜,构迷了一系列的门】上周U个J则V. 实验结果 .2- “二十队人。了M广沦义 小义伯叱 】.(二*%4从同在检测新生隐球菌病原体


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 陈江汉,温海,赵瑾,徐红,廖万清;黑色素与新生隐球菌性脑膜炎的关系[J];第二军医大学学报;2000年03期
2 李安生;;几种隐球菌酶扩增核糖体DNA图谱及快速基因鉴定[J];国际皮肤性病学杂志;1991年06期
3 李安生,吴绍熙;新生隐球菌的酚氧化酶及用于菌种鉴定的研究[J];微生物学报;1995年02期
4 陈裕充,温海;新生隐球菌毒性因子与宿主的相互作用[J];国外医学.皮肤性病学分册;2000年02期
5 朱红梅,温海;脑脊液对新生隐球菌和念珠菌的抗真菌活性研究[J];国外医学.皮肤性病学分册;2000年04期
6 莫凌;;新生隐球菌致T细胞免疫反应的抗原——甘露糖肽素的纯化和性质[J];国外医学(微生物学分册);2003年04期
7 顾菊林!200003上海,廖万清!200003上海,柴建华;新生隐球菌的PCR指纹分析[J];中华皮肤科杂志;1998年05期
8 陈伟;用尿素肉汤微量稀释法进行新生隐球菌药敏试验[J];国外医学.皮肤性病学分册;1999年02期
9 马廉兰;新生隐球菌形态学实验方法的改进[J];赣南医学院学报;2000年03期
10 ;全身性新生隐球菌病一例及其病理解剖报告[J];北京医学;1966年02期
11 王久武;新生隐球菌脑膜炎临床误诊分析[J];临床军医杂志;2004年03期
12 李安生,吴绍熙,郭宁如,吕桂霞,沈永年;首次由自然环境分离尿素酶阴性新生隐球菌及其鉴定方法[J];中国医学科学院学报;1996年02期
13 沈永年;墨西哥城鸟粪、水果和蔬菜中分离的新生隐球菌及其变种[J];国外医学.皮肤性病学分册;1996年03期
14 陈裕充,温海,李志刚,陈江汉,廖万清,钟江,尹隽;新生隐球菌临床分离株热休克反应的差别及其临床意义[J];第二军医大学学报;2002年04期
15 顾菊林,廖万清,温海,陈宏,张玲珍;流式细胞术用于新生隐球菌的快速药敏试验[J];第二军医大学学报;2002年11期
16 郭秀军;瘳万清;;新生隐球菌的荚膜多糖合成研究进展[J];国外医学(微生物学分册);2003年03期
17 秦振宇;新生隐球菌刺激人外周血单个核细胞所致淋巴细胞增殖及细胞因子分布型动态变化[J];国外医学.皮肤性病学分册;1998年03期
18 温海,廖万清,吴建华,陈江汉;几株新生隐球菌聚合酶链反应指纹分型的观察[J];中华医学杂志;1997年10期
19 李和莲;墨西哥隐球菌脑膜炎患者中新生隐球菌格特变种的首次报导[J];国外医学.皮肤性病学分册;1997年06期
20 刘卫兵,温海,岳喜昂,廖万清;氟康唑对新生隐球菌酚氧化酶活性的影响[J];第二军医大学学报;2002年08期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 龙敏;曹虹;黄胜和;;艾滋病机会感染——新生隐球菌脑炎发病机制研究[A];新发和再发传染病防治热点研讨会论文集[C];2010年
2 郭秀军;廖万清;任大明;王荫榆;兰和魁;霍克克;;新生隐球菌整合型质粒pTUG418的构建[A];2003中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2003年
3 桑红;邓德权;孔庆涛;王雪连;王高峰;吕桂霞;刘维达;;新生隐球菌致头皮和颅骨损害国内首例报道1例[A];2010全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2010年
4 潘炜华;;国内新生隐球菌临床株分子流行病学及药敏研究[A];2010年中国菌物学会学术年会论文摘要集[C];2010年
5 潘炜华;;非新生隐球菌引起的酵母感染性脑膜炎[A];2011全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2011年
6 邹先彪;廖万清;温海;吴建华;仇芸;;新生隐球菌基因组DNA不同油提方法的比较[A];2003中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2003年
7 滕敏昌;;兔脑—沙保培养基的研究[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
8 陈江汉;;多巴产黑培养基在快速鉴定新生隐球菌中的作用[A];2002中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2002年
9 邹先彪;廖万清;温海;吴建华;仇芸;杨金水;;新生隐球菌的AFLP分析[A];2003中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2003年
10 邹先彪;廖万清;温海;吴建华;仇芸;;新生隐球菌线粒体DNA的快速抽提和电镜观察[A];2001年中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郭秀军;新生隐球菌荚膜相关基因的实验研究[D];第二军医大学;2003年
2 潘炜华;新生隐球菌分子重组操作系统的建立及其荚膜相关基因的研究[D];第二军医大学;2000年
3 陈裕充;巨噬细胞对新生隐球菌活力和基因表达的影响[D];第二军医大学;2004年
4 邹先彪;新生隐球菌分子生物学分类方法的研究[D];第二军医大学;2001年
5 侯幼红;药物和化学试剂对致病酵母细胞表面疏水性和粘附性的影响[D];中国协和医科大学;1994年
6 汪晓军;蛋白质组学技术筛选新生隐球菌侵袭血管内皮细胞相关蛋白质及其表达研究[D];第二军医大学;2007年
7 赵志宇;新生隐球菌荚膜相关基因CAP10调控机制研究[D];第二军医大学;2005年
8 王溪涛;新生隐球菌穿越血脑屏障脑微血管内皮细胞机制及其对中枢神经系统的影响[D];第二军医大学;2006年
9 姚智荣;隐球菌病的基础与临床研究[D];第二军医大学;2003年
10 柏涌海;氯喹抗新生隐球菌作用的研究[D];第二军医大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孔庆涛;氧含量对新生隐球菌形态学及毒力因子影响的初步研究[D];南京大学;2012年
2 贾红玲;新生隐球菌生物膜外分泌蛋白初步分析的研究[D];第二军医大学;2012年
3 曹瑞华;新生隐球菌胞外磷脂酶检测及其抑制剂的研究[D];第二军医大学;2002年
4 曹艳云;不同新生隐球菌菌株对人脐静脉内皮细胞损伤的初步研究[D];第二军医大学;2006年
5 贾祎鹏;STE12α基因对新生隐球菌毒力的影响研究[D];第二军医大学;2009年
6 黄晨;通过RT-PCR检测rRNA判定新生隐球菌活力的研究[D];第二军医大学;2012年
7 陈裕充;热休克反应在新生隐球菌致病中的作用[D];第二军医大学;2001年
8 桑红;新生隐球菌产黑素野生株与白化突变株酚氧化酶结构基因(CNLAC1)的比较研究[D];第二军医大学;2000年
9 赵卓;新生隐球菌ISC10基因的克隆及其表达的研究[D];第二军医大学;2008年
10 涂宏钢;应用RNA干扰技术对新生隐球菌CNLAC1基因功能的初步研究[D];第二军医大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 王小龙;新生隐球菌自我保护机制揭开[N];科技日报;2009年
2 英讯;英国:发现卵巢癌相关基因[N];医药经济报;2003年
3 记者刘谨;男性不育相关基因研究取得进展[N];人民日报;2003年
4 特约通讯员钱勇、特约记者姚春雨;成功发现并克隆肺癌转移相关基因[N];解放军报;2003年
5 记者何德功;慢性骨髓性白血病相关基因被发现[N];人民日报;2003年
6 艳红;养鸽谨防脑膜炎[N];中国妇女报;2003年
7 金利;深入研究冠心病相关基因[N];科技日报;2006年
8 新子;美国发现自体免疫疾病相关基因[N];医药经济报;2002年
9 许军;人类第13\19号染色体被破译[N];中国医药报;2004年
10 胡跃进;南京发现四个世界首报肾上腺脑白质营养不良相关基因突变[N];医药经济报;2004年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978