收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

DNA疫苗微球给药系统的研究

刘善奎  
【摘要】:DNA疫苗(DNA vaccines)是将含有编码抗原基因的真核表达质粒直接接种体 内,在体内表达相应抗原刺激机体产生针对该抗原的免疫应答,产生保护性免疫。 DNA疫苗是在基因治疗和转基因技术基础上产生的第三代疫苗。然而DNA疫苗是 一个新生事物,目前DNA疫苗大动物实验、人体临床实验结果表明DNA疫苗存在 着给药剂量较大,生物利用度低,免疫效果个体差异大,不够理想的缺点,极大地 阻碍了DNA疫苗的研究进展。除了DNA疫苗本身的免疫原性因素以外,主要原因 是目前DNA疫苗的给药剂型是水溶液和冻干粉针注射剂,常用的免疫给药途径为 肌内注射,由于DNA疫苗是由含2~10Kbp的质粒DNA构成的,分子量达百万,亲水 性强,油水分配系数小,因而肌注给药后,DNA疫苗很难透过细胞膜,转运到组 织细胞内,特别是到达吞噬细胞、树突细胞等抗原提呈细胞(APCs)的转运效率 更低,只有很少量的药物能够转运到APCs内,转染表达,产生抗原,进行提呈, 产生免疫效应,而绝大多数的药物在未转运至细胞前降解,从而导致免疫效果不理 想。另外,同口服给药相比,注射给药方式也存在着不够方便、组织刺激性、成本 高等不足。口服给药能诱导粘膜免疫,对大多数经粘膜感染的疾病防护是极为重要, 但DNA疫苗在胃肠道内易降解,必须通过适宜的给药系统,保护药物、促进粘膜 吸收。如何增强DNA疫苗的免疫效果、诱导产生粘膜免疫等课题是当前DNA疫苗 研究的国际热点。 为了达到提高 DNA 疫苗的细胞内转运效率、提高免疫效果,降低给药剂量;增 加给药途径,诱导粘膜免疫的目的,本文设计采用生物可降解材料海藻酸钠、PLGA 为载体,以口蹄疫 DNA 疫苗为模型药物,制备了 DNA 疫苗海藻酸钠微球和 PLGA 微球,并对微球的处方、工艺、释放特性及影响因素、理化特性、药物稳定性、免疫 增强机理、体内外免疫效果、细胞毒性和组织刺激性等进行了较为系统的研究。 本文采用新型的乳化离子-交联法制备了口蹄疫 DNA 疫苗海藻酸钠微球,解决了 传统的海藻酸钠微球制备方法的粒径大、不易控制的难题。该法无需有机溶剂,制备 条件温和,有利于保持 DNA 疫苗结构和生物活性的稳定性。试验设计采用均匀设计 法,考察制备工艺条件对粒径大小、包封率的影响。统计分析表明,搅拌速度、MC 的用量对微球粒径大小的影响显著(P0.01);理论载药量、搅拌速度对药物包封率的 影响显著(P0.01)。微球的体外释放试验表明,壳聚糖的固化比例高低是影响微球释 1 WP=6 第二军医大学博士学位论文 DNA 疫苗微球给药系统的研究 中文摘要 放速率的主要因素:未壳聚糖固化的微球释放较快;壳聚糖固化后可显著延缓微球的 释放,固化比例越高,释药速率越慢。载药量的高低、释放介质的种类对微球释放特 性的影响较小。电泳分析表明,制备工艺、冷冻干燥工艺较好地保持了 DNA 疫苗的 稳定性。 为了有利于微球产业化,本文进一步采用喷雾干燥法制备了 DNA 疫苗海藻酸钠 微球,该方法具有以下优点:无有机溶剂残留、制备工艺简便、方便产业化生产应用。 试验设计采用正交设计法,对影响微球的粒径大小的处方工艺因素进行了考察并对体 外释放特性及影响因素进行了研究。结果表明,喷嘴的直径大小和海藻酸钠溶液的浓 度对微球粒径大小的影响显著(P0.01)。制备的微球粒径适宜,球形好、分散性好, 具有明显的控制 DNA 疫苗释放的效果。电泳分析结果表明,该制备工艺可以较好地 保持 DNA 疫苗的稳定性。 PLGA 为目前 FDA 已批准应用于注射途径给药的材料,是目前研究和应用最为 广泛的微球材料。本文采用复乳化-溶剂挥发法制备了口蹄疫 DNA 疫苗 PLGA 微球, 进行了微球理化特性的评价,考察影响微球载药量、包封率、粒径大小、DNA 疫苗 稳定性的处方和工艺因素,研究了微球的体外释放特性及其影响因素。结果表明,搅 拌速度对微球的粒径大小有显著影响,随着乳化搅拌速度的增大,微球的平均粒径减 小;二氯甲烷溶液中 PLGA 的浓度增大,形成的微球粒径增大,微球的包封率也随之 增大;药物与 PLGA 比例增加,微球的载药量相应提高,微球的包封率降低;随着 PLGA 平均相对分子量(Mw)和特异性粘度(IV)的增加,微球的粒径增大,微球的 包封率增大。微球中药物的释放速度受 PLGA 的平均分子量大小、微球的平均粒径大 小、F68 的含量以及微球的载药量等因素影响。释放速度随着 PLGA 平均分子量大小 的增大、微球平均粒径的增加而降低;随着载药量的增高、F68 用量的增高,微球的 释放速度明显加快。微球的体外释放规律符合一级释药模型。稳定性研究表明,超声 乳化是导致药物降解的主要因素。采取冰浴措施、缩短超声时间、加入缓冲液、DNA 疫苗的稳定剂、冻干保护剂等措施可以有效减少药物在制备过程中的降解。PLGA 微 球的初步稳定性试验表明,微球在在 4℃、室温条件下贮存 3 个月,外观形态、分散 性能、体外释放和 DNA 疫苗的稳定性较好。 DNA 疫苗海藻酸钠微球的 DNA 酶保护试验,表明了微球对 DNA 酶具有一定的 防护作用;通过体外电穿孔法转染 COS7 细胞试验,小鼠体内肌肉细胞转染试验, 表明微球包裹后的 DNA 疫苗较好地保持了生物活性。小鼠体?


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 林树明,麦适丰;国产与法国产两种狂犬疫苗免疫效果的比较[J];广东医学院学报;1996年04期
2 章兴祥;上虞市新生儿乙肝疫苗免疫效果测定[J];上海预防医学杂志;1996年02期
3 石桂荣;李淑秋;井立臣;张群弟;张宛的;周宝森;时景璞;李晶;肖玉平;胡宗汉;宋珍珠;巩志立;赵铠;;乙肝酵母基因和血源疫苗成人的二年免疫效果比较观察[J];中国公共卫生;1990年03期
4 陈西贵,江德华,刘尚明,宋光荣;ELISA用于人类狂犬疫苗免疫效果现场监测的研究[J];中国卫生检验杂志;1994年05期
5 傅传喜;梁建华;王大虎;王鸣;;疫苗对流行性腮腺炎保护效果的配对病例对照研究[J];中国疫苗和免疫;2008年05期
6 李乐;信爱国;廖得芳;朱明旺;陈九连;李华春;;中和抗体滴度检测口蹄疫疫苗效果的研究[J];中国预防兽医学报;2009年03期
7 刘兴安;吕金艳;杨明娟;陈雪飞;;内蒙古大兴安岭地区人群接种甲型H1N1流感疫苗21~93天的免疫效果分析[J];当代医学;2010年27期
8 张银风,戴红,郭喜玲,刁连东,张庆东,王明荣,姚彤;亚硫酸氢钠对乙型脑炎灭活疫苗免疫效果的影响调查[J];中国人兽共患病杂志;1997年03期
9 朱红卫;万晓萍;钟建平;;2006-2007年南昌县城区秋季入托儿童乙型肝炎表面抗体阳性率分析[J];华南预防医学;2008年06期
10 闫成秀,曹克强;狂犬疫苗免疫效果检测分析[J];中国媒介生物学及控制杂志;1996年05期
11 赵晓刚;杨少福;;影响疫苗免疫效果的几点因素[J];畜牧兽医科技信息;2009年11期
12 岑衍华;;疫苗免疫效果的现场评价[J];华南预防医学;1988年01期
13 姜理平,郑冶平;两种方法检测狂犬疫苗免疫效果的比较[J];中国媒介生物学及控制杂志;1997年01期
14 邵预峰,胡国生,叶仪芳,史宏辉;586例狂犬疫苗免疫效果调查[J];浙江预防医学;1994年01期
15 胡伟;段海清;陈惠鹏;;RNA病毒作为疫苗载体的研究与应用[J];生物技术通讯;2007年03期
16 李励,祝水芬,陈康凯;IFAT与ELISA法检测狂犬疫苗免疫效果的比较[J];中国人兽共患病杂志;1996年04期
17 王大伟,杨月清,李江涛,崔春霞,许向云,郭晓云;572例狂犬疫苗免疫效果的观察与分析[J];内蒙古预防医学;1998年04期
18 赵玮;杨俊;;疫苗免疫效果的影响因素[J];中国家禽;2010年12期
19 刘寿鹏;樊启声;李慧;姜双应;巴卓玛;杜景昌;胡秀珍;;青海省441例乙型肝炎疫苗免疫效果考核[J];青海医药杂志;1988年03期
20 曾锐志,韩学民;番禺市狂犬疫苗免疫效果监测分析[J];广东卫生防疫;1998年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 胡明明;张艳禾;谢芳;李建军;朱晓凯;王春来;;副猪嗜血杆菌菌影疫苗免疫效力评价[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
2 李亚南;乔瑞洁;李红;刘佳;王浩;史晓玲;叶强;谢贵林;;国产b型流感嗜血杆菌PRP-TT疫苗第四剂加强免疫效果评价[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
3 王艳晓;罗满林;;猪α干扰素和γ干扰素对蓝耳病疫苗免疫效果的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
4 毛群颖;郭增兵;郝春生;于丹;李秀玲;梁争论;;EV71疫苗中和试验检测标准病毒候选株的研究[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
5 冯晓燕;王国华;宋晓国;陈堃;修冰水;何竞;杨锡琴;朱翠侠;张贺秋;;狂犬病毒表位区段抗原在疫苗免疫效果评价中的应用价值[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
6 薛春宜;陈娴娴;马军;陈峰;毕英佐;曹永长;;核蛋白NP对H5N1亚型禽流感病毒样颗粒疫苗免疫效果的影响[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
7 薛春宜;陈娴娴;马军;陈峰;田国斌;毕英佐;陈化兰;曹永长;;核蛋白NP对H5N1亚型禽流感病毒样颗粒疫苗免疫效果的影响[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
8 周碧君;毛君婷;史开志;王开功;文明;;PRRSV特种野猪分离株NSP2基因序列分析和疫苗免疫效果[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(下册)[C];2010年
9 李建军;熊良铨;王登峰;辛秀婷;玛利亚姆;王治才;;不同白油佐剂制备新城疫、禽流感疫苗免疫效果的比较研究[A];兽医药品学——2010第三届中国兽药大会论文集[C];2010年
10 曾瑞红;杨晨涛;魏林;;IL-23、IL-27对RSV重组蛋白疫苗免疫效果的影响[A];河北省免疫学会第六次免疫学大会资料汇编[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 李禹涛;人参茎叶皂甙提高口蹄疫和新城疫油佐剂疫苗免疫效果的研究[D];浙江大学;2012年
2 胡杰;广西种猪场猪瘟监控方法的建立及其应用[D];南京农业大学;2009年
3 吕树娟;HBV-CpG诱导抗乙型肝炎病毒免疫应答[D];中国科学技术大学;2014年
4 李俊;猪圆环病毒2型遗传演化及含CpG基序的核酸疫苗研制[D];山东师范大学;2012年
5 贺番;基于伪型病毒的猪瘟中和抗体检测方法的初步建立及猪瘟病毒E2蛋白的细胞定位研究[D];内蒙古农业大学;2010年
6 李长岭;PfCP-2.9疟疾疫苗候选抗原系列突变体的构建及其表位和免疫学分析[D];第二军医大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王瑞;禽网状内皮增生症病毒感染对蛋鸡生产性能和疫苗免疫效果的影响[D];西北农林科技大学;2013年
2 靳小攀;以菌蜕为载体的双重靶向DNA疫苗的初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
3 熊炜;猪肺炎支原体疫苗免疫效果的研究[D];四川农业大学;2011年
4 许志成;盐城地区口蹄疫防控情况及疫苗免疫效果分析[D];南京农业大学;2012年
5 付亚成;加州鲈嗜水气单胞菌灭活疫苗免疫效果及免疫学评价[D];湖南农业大学;2010年
6 董立强;甘莲玉屏风散对鸡传染性喉气管炎疫苗免疫效果的影响[D];河北农业大学;2012年
7 邹镇;日本血吸虫23KD膜蛋白的原核表达与纯化及双价膜锚定型和分泌型表达疫苗抗感染效果的比较研究[D];华中科技大学;2009年
8 李双;“卫气补”对新城疫疫苗免疫效果的影响[D];河北农业大学;2013年
9 芦丽淦;柚皮素及聚乙二醇增强乙肝DNA疫苗免疫效果的研究[D];河南大学;2010年
10 赵丹萍;猪圆环病毒2型感染影响猪瘟弱毒疫苗免疫效果的机制[D];河北农业大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 郑灵巧;国产“甲流”疫苗免疫效果好[N];健康报;2009年
2 记者 刘虹;动物疫苗揭开价值“盖头”[N];医药经济报;2011年
3 白毅;流感疫苗的研发历程[N];中国医药报;2003年
4 方菲 浩天 青山 于晴 晓昭 云霓;鸡球虫免疫[N];河南科技报;2005年
5 王文;鸡群接种疫苗三不宜[N];中国畜牧报;2005年
6 刘军;我国口蹄疫基因工程研究获突破[N];农民日报;2001年
7 陕西省长安县畜牧兽医中心站 每小平;影响鸡免疫效果主要因素[N];中国畜牧水产报;2001年
8 孙占田 刘志敏;家禽免疫失败找原因[N];农民日报;2003年
9 刘延年;母猪繁殖障碍症防治中的问题[N];中国畜牧报;2002年
10 记者 宁启文;研究部署抓好重大动物疫病防控[N];中国畜牧兽医报;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978