收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

Fas Ligand 基因修饰的骨髓树突状细胞在同种移植中的作用

张传永  
【摘要】:[背景] 器官移植的成功往往依赖于毒性、非特异性免疫抑制剂的应用。而这类药物常常导致机会感染、恶性肿瘤等并发症的发生,根本的解决出路之一就是寻找诱导抗原特异性耐受或实现抗原特异性抑制的治疗方法和策略。器官移植物的基因治疗和基因修饰的耐受性树突状细胞(dendritic cell,DC)诱导免疫耐受的相关进展为临床器官移植提供了极具潜力的治疗方法。尝试应用免疫抑制性调节分子基因修饰移植器官进行局部免疫调控或基因修饰树突状细胞诱导免疫耐受已成为移植研究领域的热点。 树突状细胞(dendritic cells,DC)作为一类具有最强抗原提呈功能的细胞群体,在识别和递呈抗原启动免疫应答、诱导移植排斥中起重要的作用。近年来的研究表明,DC是一类异质性细胞群体,具有不同的亚群和不同的功能状态,不但在增强免疫反应上具有特别重要的作用,也具有诱导特异性免疫耐受的作用。DC提呈抗原方式的免疫性或耐受性决定了DC既可以启动免疫反应也可以诱导中枢性或外周性免疫耐受。目前已有研究表明通过免疫抑制分子的基因如vIL-10、TGF-β、和CTLA4-Ig等基因修饰可能会使得DC潜在的耐受原性得以放大和增强,因此,DC在诱导免疫耐受中具有相当重要的作用及潜在的应用价值。 Fas/FasL是介导细胞凋亡的重要的免疫活性分子,它不仅参与了胸腺选择、免疫豁免(immune-privilege)协调平衡免疫反应等许多重要的生理过程,而且与一些肿瘤的发生发展、器官移植耐受和排斥反应、自身免疫性疾病的产生以及感染、炎症等许多病理生理反应密切相关。研究发现FasL在睾丸、Sterotil细胞 Fas Ligand基因修饰的骨做树突状细胞在同种移植中的作用 第二军医大学博士论文 和眼前房等免疫特赦器官上有较高表达,其免疫特赦的机制就是FasL与Fas结 合通过Fas邝asL途径诱导Fas+的淋巴细胞凋亡从而免遭排斥。因此,如果提高 移植物FasL的表达,则有可能会导致排斥反应的主要效应细胞T淋巴细胞的凋 亡,从而达到抗移植排斥作用。Lau创造性将异源胰岛细胞和人工构建的由FasL 基因转染的同源成肌细胞混合植于小鼠肾包囊中,其存活时间较单纯胰岛细胞移 植明显延长,证实FasL基因治疗能给移植的胰岛细胞提供特异性免疫保护作用。 Zhang等用表达FasL的H一Zb APC治疗H-ZK小鼠,成功地诱导同种异基因间的 抗原特异性T细胞的低反应性。既往研究表明,靶组织表达FasL能诱导浸润的 淋巴细胞凋亡,从而保护靶组织免受攻击。鉴于DC在移植免疫中的重要作用, 我们可以推测,通过FasL基因修饰的DC进一步认识FaS/F asL在同种异体移植 中的凋亡作用和机制,将有可能寻求一种移植物免疫耐受的途径,这种途径能通 过凋亡机制特异性地清除移植物中同种异体抗原激活的淋巴细胞,使移植物免遭 排斥。 本研究利用小鼠血管化的心脏异位移植模型和基因转移技术,通过FasL基 因的腺病毒载体转染·DC,分析FasL基因修饰对DC及同种效应T淋巴细胞功 能、活性的影响,观察其在小鼠心脏移植排斥反应中的效果,并对其发生的机 制进行探讨 第一部分AdFasL基因修饰对Dc、T淋巴细胞功能的影响 采用rmGM一CSF与去除淋巴细胞的骨髓细胞体外培养的方法,可获得纯度 较高的骨髓来源的DC。观察DC发育过程中的形态变化,发现培养第三天即可 见细胞成簇生长,可见到少量细胞呈现出粗短的枝状突起,培养完成时细胞密集 成团,枝状突起仍不多见。经IO0ng/ml LPS刺激18小时后,细胞表面伸出很多 突起,宛如蟹足。第7天用光镜观察及流式细胞术(FACs)鉴定都肯定所培养 的细胞具有成熟DC的性质一细胞表面较高表达MHCn类分子及共刺激分子 (eD40、CDso、CDs6等)。 腺病毒是一种高效的基因转移载体,实验中,我们设定不同的Mol值对 其进行转染。培养至第7天的DC更换无血清RPMll640培养基,按MOI二1:10, 1:40,1:80,1:120分别加入腺病毒基因载体。在37℃、5%COZ孵箱中培养2小时 Fas Ligand墓因修饰的骨做树突状细胞在同种移植中的作用 第二军医大学博士论文 后再加入小牛血清和GM一CSF并使之达到规定浓度。继续在37℃、5%C伍孵箱 中培养18一20小时后收获细胞。为了解AdFasL对DC的转染效率以及转染后基 因的表达情况,我们进行了FAcs分析发现,AdFasL按MOI二1:80,在转染20 小时后具有较高的FasL表达。因此我们认为1:80已经达到或者至少接近了最适 Mol值,在以后的实验中,均采用1:80为默认的重复转染率。 为明确AdFasL基因转染对DC成熟表型及抗原递呈功能的影响,我们对基 因修饰的DC进行了队CS分析。发现FasL基因转染并未使细胞特征发生大的 变化。转染后DC表面分子CD80(B7一l)CD86(B7·2)和CD40等表达没有 明显的改变,同时用ELISA检测了IL一2水平,结果显示AdFasL基因的转染对 DC的抗原递呈功能没有明显影响,这说明FasL基因转染DC这种应用方式是可 行的。有报道认为DC转染FasL基因后可能会导致DC自身的凋亡,我们在实 验中用FACS分析了转染后DC的凋亡情况,和对照相比并未发现明显DC自身 的凋亡。 实验中,我们将C57BL/6小鼠FasL一DC与异基因BALB/C小鼠脾脏T淋巴 细胞共培养48小时后,通过流式细?


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李成荣!518026,付劲蓉!518026;人IL-4基因修饰增强瘤细胞特异性CTL杀伤活性机制初探[J];中华微生物学和免疫学杂志;2001年03期
2 钱书兵,钱关祥,陈诗书;逆转录病毒介导γ-干扰素基因修饰人肝癌细胞的建立[J];上海第二医科大学学报;1999年01期
3 万涛,曹雪涛,王宝梅,陈国友,于益芝,陶群;经IFN-γ诱导的人IL-2基因修饰的成纤维细胞体外免疫学特性的研究[J];中国肿瘤生物治疗杂志;1997年03期
4 李潇;;基因修饰的BCG能更好地保护小鼠抵御TB[J];中国生物化学与分子生物学报;2006年04期
5 严冬雪;吕静;;自然人VS基因修饰人?[J];中国新闻周刊;2008年03期
6 王慧,荫俊;A型肉毒毒素保护性抗原的基因修饰及高效表达[J];生物工程学报;2004年04期
7 许澍洽;许扬滨;;BMSCs构建组织工程软骨的研究进展[J];中国修复重建外科杂志;2008年02期
8 荫俊,孙叶方,张郁,史俊南,王革;人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的基因修饰及其在大肠杆菌中的高效表达[J];中国医学科学院学报;1999年01期
9 朱丽明;崔颖;;重组生长因子在软骨组织工程中的研究进展[J];医学综述;2008年09期
10 刘勇,崔丽,庄俊英,马雁冰,袁力勇,戴长柏,孙茂盛;轮状病毒VP7基因修饰载体的构建及其在Hela细胞中的表达[J];白求恩医科大学学报;2000年04期
11 匡颖;孙霞;邓涛;卢希彬;孙瑞林;王铸钢;费俭;;四倍体补偿技术的建立及其应用[J];生物化学与生物物理进展;2008年03期
12 石星明;贺笋;王玫;杨桂花;曾伟伟;崔红玉;童光志;王云峰;;基因修饰的鸡新城疫病毒HN基因DNA疫苗免疫效力评价[J];畜牧兽医学报;2009年10期
13 章卫平;淋巴细胞趋化因子基因修饰增强肿瘤抗原多肽致敏的树突状细胞的抗肿瘤免疫效果[J];第二军医大学学报;1999年07期
14 冷建杭,张立煌,姚航平,曹雪涛;白细胞介素18基因修饰的巨噬细胞免疫效应分析[J];中国免疫学杂志;2001年07期
15 郭义铭;生物技术带来的机遇和风险[J];全球科技经济瞭望;2001年12期
16 郑佳琳;江飙;郭霄峰;;优化密码子以提高狂犬病病毒糖蛋白基因在原核细胞的表达[J];中国人兽共患病学报;2010年05期
17 杨继国,林炜铁,吴军林,罗立新;代谢工程中基因修饰与基因表达的工具[J];生物技术通报;2003年03期
18 王素;基因修饰马铃薯引起争议[J];国外科技动态;1999年01期
19 曹雪涛,张明徽,章卫平,刘海军,孙黎飞;IL-2基因修饰对树突状细胞的生物学特征和功能的影响[J];中国免疫学杂志;2002年01期
20 孙黎飞,曹雪涛;IL-2基因修饰对树突状细胞表面粘附分子的影响[J];前卫医药杂志;2000年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孙文佶;张立煌;王全兴;姚航平;曹雪涛;;转化生长因子β_1基因修饰的树突状细胞诱导同种移植免疫耐受的实验研究[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展(下册)[C];2001年
2 项红兵;肖建斌;招伟贤;;基因修饰星形胶质细胞移植镇痛的研究进展[A];中华医学会疼痛学分会第七届年会论文摘要集[C];2007年
3 谭映霞;俞康;胡永仙;章圣辉;韩义香;高申孟;吴建波;;基因修饰CD20-scFv-IgGFc-CD28-ζ T细胞靶向杀伤Raji细胞凋亡的研究[A];全国临床免疫检验研讨会暨第六届全国临床免疫学术会议论文汇编[C];2009年
4 吴万福;胡长林;秦新月;;局灶性脑缺血后HIF-1α基因修饰的NSCs移植对NSCs存活、迁移以及血管新生的影响[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
5 张学荣;班建东;罗小玲;磨标礼;舒雨雁;;IL-2基因修饰的肿瘤细胞体内对巨噬细胞数量和功能的影响[A];广西生物化学与分子生物学会第六次学术研讨会论文摘要[C];2003年
6 张立煌;姚航平;孙文佶;曹雪涛;;IL-18基因修饰肝细胞经脾移植治疗血吸虫病肝纤维化的实验研究[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展(下册)[C];2001年
7 李晓红;余细勇;肖定璋;符永恒;单志新;林秋雄;邓春玉;邝素娟;杨敏;林曙光;;缝隙连接蛋白基因修饰BMSCs的实验研究[A];2008第十一次全国临床药理学学术大会论文集[C];2008年
8 林贤凡;吴金明;陈瑾;孙慧;金思思;申苏建;;HBV S-ecdCD40L融合基因修饰对树突状细胞功能的影响[A];第二届浙江省消化病学术大会论文汇编[C];2009年
9 熊念;张昭文;熊婧;贾敏;张振涛;黄金莎;梁直厚;曹学兵;孙圣刚;王涛;;VEGF基因修饰脐带间充质干细胞移植治疗帕金森病大鼠模型[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
10 张建;许晓群;冯进波;张建化;孙芮;田志刚;;人IL-15基因修饰NK细胞系的生物学特性研究[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 何文俊;基因修饰的胚胎干细胞作为种子细胞构建血管化心肌组织[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
2 刘勇;轮状病毒VP7基因修饰、表达及免疫原性研究[D];中国协和医科大学;2000年
3 杨云山;IL-2基因修饰的肿瘤细胞来源的Exosomes的抗肿瘤作用及相关机制研究[D];浙江大学;2005年
4 陈锋;通过基因修饰的抗原特异性B淋巴细胞的体内扩增提高外源治疗基因的表达水平[D];中国协和医科大学;2009年
5 蒋雯;人IFN-α基因修饰NK细胞系的建立以及人IFN-α/人IL-15基因修饰NK细胞抗肿瘤功能机制研究[D];山东大学;2013年
6 张在云;树突状细胞与白细胞介素18基因修饰的NCI-H460肺癌细胞融合体抗肿瘤作用实验研究[D];浙江大学;2003年
7 张传永;Fas Ligand 基因修饰的骨髓树突状细胞在同种移植中的作用[D];第二军医大学;2004年
8 宋少华;SOCS1基因修饰的骨髓树突状细胞对同种移植排斥的治疗作用及其机理[D];第二军医大学;2010年
9 韩澍;吲哚胺2,3-过氧化酶基因修饰的骨髓树突状细胞诱导移植免疫耐受的作用及其机理[D];第二军医大学;2003年
10 荆鑫;TGF-β_1基因修饰间充质干细胞修复关节软骨缺损的实验研究[D];第二军医大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郑国富;慢病毒载体介导的hbFGF基因修饰骨髓间充质干细胞治疗肢体缺血的实验研究[D];福建医科大学;2012年
2 陈解元;人前脑啡肽基因修饰的人骨髓间充质干细胞系镇痛效应的研究[D];汕头大学;2011年
3 丁英龙;IDO基因修饰的小鼠骨髓间充质干细胞诱导免疫耐受的体外实验研究[D];苏州大学;2012年
4 吴明祥;碱性成纤维生长因子基因修饰大鼠骨髓间充质干细胞的体外分化实验研究[D];福建医科大学;2011年
5 王飞;人Foxp3基因修饰的NKL/NK-92细胞系生物学特性研究[D];山东大学;2011年
6 蔡少彦;人前脑啡肽基因修饰的人骨髓间充质干细胞系的构建及其生物学特性的实验研究[D];汕头大学;2010年
7 张丽娟;α-黑素细胞刺激素基因修饰的树突状细胞延长同种异体心脏移植物存活时间的效应与机制[D];第二军医大学;2004年
8 曹寅;骨保护素基因修饰的Cos-7细胞系的培养、表达与鉴定[D];安徽医科大学;2005年
9 黄朱宋;bFGF基因修饰的骨髓间充质干细胞在脊髓损伤动物模型中bFGF表达的实验研究[D];福建医科大学;2008年
10 刘滋康;肝细胞生长因子基因修饰的人骨髓间充质干细胞促进血管新生[D];安徽医科大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;看端倪 探前沿 触摸科技未来[N];科技日报;2008年
2 姬十三;“基因敲除”敲开疾病之门[N];南方周末;2007年
3 李杰;抗原特异TCR基因修饰T细胞技术的建立和应用[N];科技日报;2007年
4 马冬梅;加强我国的生物技术知识产权保护[N];光明日报;2005年
5 记者 任勇;前沿 首个生物诊疗中心启用[N];天津日报;2010年
6 ;生物两用品及相关设备和技术出口管制清单[N];公共商务信息导报;2006年
7 驻沪记者 魏赟;个性化诊疗:一个诱人而又艰难的市场[N];医药经济报;2010年
8 实习生 牛昊天本报记者 蒋秀娟;基因技术能否使盲人重见光明?[N];科技日报;2007年
9 ;“10项引领未来的科学技术”候选项[N];大众科技报;2008年
10 王进;以“毒”攻毒治AIDS[N];医药经济报;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978