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转化生长因子-β在正常和糖尿病大鼠视网膜中的基因表达研究

沈炜  
【摘要】:目的:糖尿病视网膜病变(Diabetic retinophthy,DR)是糖尿病在眼部的主要并发症,为我国四大致盲眼病之一。DR的病理基础是微血管病变,研究其发生、发展的机理对预防和治疗这一疾病具有重要的临床意义。DR的形成涉及多因素、多环节,确切机制至今尚未清楚。随着细胞生物学和分子生物学技术的发展及其与临床研究的相结合,加深了对DR的认识。资料显示,DR的发生和发展与多种生长因子调控密切相关,而转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)是一类能够调节细胞生长和分化的多肽,具有多种生物学作用。本研究选择转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)和转化生长因子-β2(7GF-β2)为研究对象,定量检测其在正常大鼠视网膜中的基因表达水平,探讨了GF-β1和TGF-β2在正常视网膜中表达的差异,为视网膜中基因的检测建立初步的技术平台;检测了GF-β2在不同时相点糖尿病大鼠视网膜中的基因表达情况,观察和分析TGF-β2的动态表达变化,探讨其在糖尿病视网膜病变发生、发展中的作用机制。 方法:1.选10w龄,正常雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠14只,分离视网膜,制备总RNA并逆转录。2.实时荧光PCR技术定量分析正常大鼠视网膜中TGF-β1和TGF-β2的mRNA含量。3.用链脲佐菌素(STZ)诱导SD大鼠建立糖尿病动物模型,血糖浓度大于16.7mmol/L定为糖尿病模型大鼠。4.上述糖尿病大鼠于第4、8、12、16、20、24w分别分离视网膜,液氮保存。5.应用RT-PCR技术检测糖尿病大鼠视网膜中不同时相点TGF-β2的基因表达。 结果:1.制备大鼠视网膜总RNA,甲醛变性凝胶电泳显示RNA样品完好无降 第二军医大学硕士学位论文 中文摘要 解,能够用于基因表达分析。2.成功地进行了TGF一p基因表达的实时荧光定量 RT-PCR检测,样品的复孔实时荧光值曲线大部分拟合良好,Ct值接近,定量 PCR反应体系稳定,结果可靠。3.用STZ成功诱导建立了大鼠糖尿病动物模型。 4.正常大鼠视网膜中TGF一pZ的mRNA转录丰度是TGF一pl的55倍左右。TGF一叩 和TGF一pl的比值为5 5 .00士26.61,统计学上差异有显著性(P0.ol)。5.与正常 对照组相比,糖尿病组大鼠视网膜中TGF一pZ mRNA表达于4w时升高,但统计 学上差异无显著性(P0.05);sw时则下降,差异有显著性(尸0 .05);12w时 仍下降,差异有显著性(尸0.05),较sw时已出现上升趋势;16w时与正常对 照组无明显差异(P0.05);ZOw时则开始升高,但差异无显著性(P0.05); 24w时继续升高,差异有显著性(P0.05)。 结论:1.实时荧光定量PCR技术能够针对性地精确分析极少量组织细胞的基因 表达,尤其适用于大鼠视网膜这样的微量组织标本的定量检测。2.TGF一p在正常 视网膜中以TGF一pZ表达为主,提示TGF一解在视网膜正常生理功能中可能起主导 作用。3.TGF一pZ的mRNA表达在糖尿病大鼠视网膜中较对照组于第sw、12w时 明显降低,第24w时明显升高,可以看出TGF一叩随时间变化呈双相性。一方面 说明TGF一p作为一种重要的细胞生长调节因子的双向调控特点,另一方面也说 明TGF一pZ在DR中可能发挥着重要作用。


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