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大鼠肝卵圆细胞活化、分离、培养和鉴定及P28~(GANK)在肝卵圆细胞活化和增殖中作用研究

单云峰  
【摘要】:本研究通过2—AAF/PH模型活化大鼠的肝卵圆细胞,并分离纯化和培养,该细胞表达肝细胞标志如白蛋白、AFP,胆管细胞标志如CK19、OV6,造血干细胞标志c—kit、CD34、CD45、Thy—1。并可以在体外诱导其向肝细胞和胆管细胞分化。同时我们通过Western blot检测发现2—AAF处理后p28~(GANK)表达即升高,于肝切除后先逐渐下降,后在肝卵圆细胞活化过程中又再升高。通过免疫组化发现,肝切除早期,p28~(GANK)主要表达于肝细胞,肝卵圆细胞活化后可见肝卵圆细胞的表达明显高于周围肝细胞。培养的肝卵圆细胞在EGF刺激下,p28~(GANK)表达明显升高,Rb表达下降,CDK4和CycinD1升高,提示p28~(GANK)对肝卵圆细胞活化增殖有重要作用。我们通过HGF刺激稳定表达野生型和突变型SIRPα1(SIRPα1-4Y)以及pcDNA3.0的HuH7细胞进行验证,发现SIRPα1对HGF信号抑制作用,证明了SIRPα1在肝细胞癌的负调控作用。


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